微生物學的檢驗方法都有哪些?

舒小桃

隨著現代科技的飛速發展，各個學科之間存在著相互交叉和滲透，比如微生物學檢驗技術被廣泛地應用到醫學檢驗當中。微生物學檢驗技術的研究水平如今已經上升到細胞、分子、甚至基因，各種各樣的新技術推動著醫學技術的發展。微生物學檢驗在醫學研究、治療、診斷當中都扮演著重要的角色，接下來的內容就將向您介紹微生物學的檢驗方法有哪些？

對微生物做形態學檢查是微生物檢驗的重要方法之一，可以有效地對細菌進行分類和鑒定。其主要是根據細菌的形態、結構、染色反應等特性來判斷細菌的狀態，從而為接下來的鑒定提供有力的參考依據。

一、顯微鏡檢查

我們都知道，細菌的體積是很小，僅通過肉眼是沒有辦法看到的，必須借助其它放大倍數比較大的設備（比如顯微鏡）才可以觀察到。在顯微鏡下可以觀察到細胞的一般形態和結構，如果想要觀察細菌的內部結構，則需要借助電子顯微鏡。顯微鏡有很多種類，以下為常用的顯微鏡：

1.普通光學顯微鏡

普通的光學顯微鏡采用自然光或燈光作為光源，光源的波長在0.4微米左右，顯微鏡的分辨率是波長的一般，也就是0.2微米。但是人體肉眼能見的最小物質為0.2毫米，和顯微鏡的分辨率相差了很多，所以需要用油（浸）鏡將目標物放大1 000倍，這樣才能比較清晰地進行觀察。

普通的光學顯微鏡一般可用作觀察細菌、真菌、放線菌等。

2.暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡，顧名思義就是在視野呈現暗色的顯微鏡，其原理是在普通光學顯微鏡中安一個暗視野聚光器，這樣就使光線不能從中間直接透過。目標物接收到從聚光器邊緣射出的光之后可以發生散射，就能在視野較暗的情況下觀察光亮的微生物，形成一個明顯的反差，觀察結果會更清晰。

暗視野顯微鏡一般用作觀察不染色微生物形態和運動，比如細菌、螺旋體等。

3.相差顯微鏡

相差顯微鏡主要是利用相差板的光柵作用，最光的相位和振幅進行改變。這樣一來，當光線透過不染色標本時，密度不同的部位就會呈現不一樣的結果。

相差顯微鏡一般可用于微生物形態、運動和內部結構的觀察。

4.熒光顯微鏡

熒光顯微鏡和普通光學顯微鏡的原理和結構沒有太大的區別，主要在光源、濾光片和聚光器上有所不同。

熒光顯微鏡主要用于檢測或鑒定對熒光色素染色、與熒光抗體結合的細菌。

5.電子顯微鏡

電子顯微鏡是以電子流為光源，波長與可見光相比差幾萬倍，所以電子顯微鏡的分辨率非常高。除此之外，電子顯微鏡還用磁性電圈作為光學放大系統。這兩者的共同作用使得電子顯微鏡的放大倍數遠遠優于其它任何顯微鏡。

電子顯微鏡一般用于觀察病毒、細菌的內部結構等。

二、不染色標本檢查

不染色標本主要用于細菌形態、運動情況的觀察。細菌在未染色狀態下，主要是利用光的折射以及細菌和周圍環境的明暗對比來進行觀察。有鞭毛的細菌運動相較于無鞭毛的細菌更活潑，無鞭毛的細菌則做不規則的布朗運動。還有一些螺旋體（比如梅毒蒼白密螺旋體等）有著自身特別的運動方式。通過觀察細胞的運動形態可以進一步對種類進行鑒定，有很重要的臨床意義。常用的不染色標本檢查方法有壓滴法、懸滴法和毛細管法等。

1.懸滴法

在凹玻片凹孔周圍涂凡士林，用接種環取液放在蓋玻片中央，凹玻片凹孔與液滴中央對準，蓋上，翻轉，輕壓蓋玻片，觀察其與凹玻片粘緊封閉后，就可以進行觀察，一般選擇高倍鏡或暗視野。

2.壓滴法

壓滴法的操作方法和懸滴法基本相同，只是將凹玻片換成了玻片，也沒有使用凡士林。在蓋玻片的時候需要注意不要讓液滴外溢，防止產生氣泡。

三、染色標本檢查

細菌在染色狀態下，顏色會和周圍環境形成很明顯的對比。一般可用于觀察細菌的形態、特殊結構比如如莢膜、鞭毛、芽孢等，還可以對細菌進行鑒別。

對細菌進行染色的一般步驟是：涂片—固定—染色—（脫色）—（復染）。

1.涂片制備

血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液體培養物，可以直接將目標物放在載玻片上作薄膜涂片。尸檢或感染動物組織，一般用病變局部涂抹采樣的棉拭子直接涂片。

2.固定

固定的主要目的是將細菌殺死，凝固細菌蛋白及結構，這樣可以讓染色劑快速地進入細胞內，便于染色;而且細菌可以粘附在載玻片上，防止在水洗這一步驟被水沖掉。

3.染色

不同的細菌會選擇不同地染色劑以及染色方法。

4.脫色

脫色這一步的目的是檢查脫色劑可以查出細菌與染料結合的穩定程度，作為鑒別染色之用。

5.復染

進行了脫色處理的細菌需要用復染液作復染來觀察。需要注意的是復染不宜過度，防止掩蓋初染的顏色。