十二指腸球部潰瘍患者腸道菌群改變

付冰 梁紅亮 付丹

(1成都市第六人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 成都 610000；2西南醫(yī)科大學(xué)附屬363醫(yī)院消化內(nèi)科)

隨著生活節(jié)奏的加快和生活作息的不規(guī)律，消化性潰瘍的發(fā)生率逐年增加。十二指腸球部潰瘍作為消化性潰瘍的重要組成部分，一旦發(fā)生便合并出血和穿孔甚至急性腹膜炎的危險(xiǎn)性。既往研究表明，消化性潰瘍患者腸道菌群會(huì)發(fā)生改變，尤其是幽門螺桿菌(HP)陽(yáng)性患者在經(jīng)過抗HP四聯(lián)療法后〔1,2〕。亦有研究報(bào)道稱，HP會(huì)誘發(fā)腸道菌群的紊亂，阻礙潰瘍面的愈合〔3,4〕。本研究探討十二指腸球部潰瘍患者，腸道菌群與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選擇2016年1月至2018年1月成都市第六人民醫(yī)院消化內(nèi)科132例十二指腸球部潰瘍患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)內(nèi)鏡證實(shí)為十二指腸球部潰瘍，且潰瘍面積≥0.3 cm×0.4 cm，②HP陽(yáng)性與陰性均可，有明顯的空腹痛和夜間痛癥狀，③均知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有消化道手術(shù)史和(或)潰瘍史，②合并心血管系統(tǒng)疾病患者并在治療前1 w內(nèi)服用過阿司匹林、氯吡格雷及華法林等抗凝藥，③同時(shí)存在胃潰瘍、炎癥性腸病、糖尿病等誘發(fā)腸道菌群改變的疾病，④近1 w有上消化道出血，⑤合并有嚴(yán)重的心、肺、肝、腎功能不全的患者，⑥對(duì)研究用藥過敏的患者。本研究在倫理委員會(huì)批準(zhǔn)下進(jìn)行。

1.2研究方法

1.2.1HP檢測(cè)及樣本獲取 所有患者治療前后進(jìn)行13C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)，確定HP陽(yáng)性情況。并于就診當(dāng)天留取新鮮糞便200～300 g于無菌糞便收集管中，迅速置于-80℃冰箱保存，方便后續(xù)RT-PCR檢測(cè)。

1.2.2RT-PCR 委托上海Invitrogen設(shè)計(jì)并合成腸道目的細(xì)菌的引物序列(見表1)，包括：乳酸桿菌屬(LAG)、普氏桿菌屬(PRE)、柔嫩梭菌屬(CLS)、擬求梭菌屬(CCS)、擬脆弱桿菌屬(BFG)及腸桿菌科(ENG)。嚴(yán)格按照RT-PCR試劑盒規(guī)定的操作步驟對(duì)樣品進(jìn)行菌群DNA定量分析。

表1 腸道目的細(xì)菌的引物序列

1.2.3治療方法 患者均需要營(yíng)養(yǎng)均衡，加強(qiáng)十二指腸球部潰瘍知識(shí)教育，交代注意事項(xiàng)，調(diào)整作息規(guī)律。藥物治療方面，HP陽(yáng)性患者采用奧美拉唑四聯(lián)療法〔奧美拉唑(洛賽克，20 mg×1/次，1次/d，阿斯利康，國(guó)藥準(zhǔn)字：J20080097)+枸櫞酸鉍鉀(先瑞，0.25 g×1/次，3次/d，蘇州東瑞制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H10983185)+阿莫西林(阿莫靈，0.3 g×2/次，3次/d，香港澳美制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字：HC20080020)+呋喃唑酮(呋喃唑酮片，0.1 g×1/次，3次/d，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H11020698)〕；HP陰性患者給予奧美拉唑和枸櫞酸鉍鉀治療。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1一般資料 132例十二指腸球部潰瘍患者中，男96例，其中HP陽(yáng)性63例(65.63%)，女36例，其中HP陽(yáng)性25例(69.44%)，兩組相比未見顯著差異(χ2=0.172，P=0.678)。年齡61～87歲，平均年齡(76.42±7.89)歲，<80歲患者76例，HP陽(yáng)性53例(69.74%)，≥80歲患者56例，HP陽(yáng)性35例(62.5%)，兩組患者相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.760，P=0.383)。吸煙史方面，98例具有吸煙史的患者中有68例(69.39%)HP檢查陽(yáng)性；34例無吸煙史患者中20例(58.82%)檢查HP陽(yáng)性，兩組間相比無明顯差異(χ2=1.268，P=0.260)。家族史資料對(duì)比結(jié)果顯示，有102例患者家族中患過消化性潰瘍，這部分人群中有67.65%(69例)HP檢測(cè)陽(yáng)性；30例無家族史患者中，63.33%(19例)的患者HP檢測(cè)陽(yáng)性，兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.194，P=0.660)。進(jìn)一步對(duì)治療情況進(jìn)行分析，132例患者中，接受過傳統(tǒng)治療的患者122例，其中82例(67.21%)HP檢測(cè)陽(yáng)性；10例未接受過治療的患者中，6例(60%)出現(xiàn)HP陽(yáng)性，兩組間亦未見顯著差異(χ2=0.216，P=0.642)。

2.2腸道菌群在不同性別中的分布特點(diǎn) 在男性患者HP陽(yáng)性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(42.5±9.3)CFU/g、(42.5±9.3)CFU/g、(46.3±8.4)CFU/g、(47.4±9.2)CFU/g、(46.7±8.8)CFU/g及(45.5±8.9)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(43.3±8.9)CFU/g、(45.7±7.3)CFU/g、(44.2±5.6)CFU/g、(48.1±10.1)CFU/g、(45.5±8.6)CFU/g及(45.9±9.1)CFU/g；兩組LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在男性患者糞便中未見明顯差異(均P>0.05)。在女性患者HP陽(yáng)性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(45.5±8.8)CFU/g、(42.3±7.6)CFU/g、(45.9±7.7)CFU/g、(44.4±9.3)CFU/g、(47.8±9.2)CFU/g及(46.5±7.9)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(44.3±8.7)CFU/g、(43.1±6.9)CFU/g、(44.9±6.4)CFU/g、(45.1±9.4)CFU/g、(48.5±7.9)CFU/g及(45.9±8.7)CFU/g；兩組LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在女性患者糞便中未見明顯差異(均P>0.05)。

2.3腸道菌群在不同年齡患者中的分布 在年齡<80歲患者HP陽(yáng)性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(43.2±8.2)CFU/g、(44.7±7.6)CFU/g、(46.5±7.6)CFU/g、(45.4±7.2)CFU/g、(47.2±8.2)CFU/g及(46.2±7.7)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(43.6±6.9)CFU/g、(45.3±6.2)CFU/g、(41.6±6.3)CFU/g、(46.1±8.3)CFU/g、(46.5±7.7)CFU/g及(37.9±6.8)CFU/g；兩組LAG、PRE、CCS及BFG的滴度在<80歲患者糞便中未見明顯差異(均P>0.05)，而在CLS和ENG中存在明顯差異(均P<0.05)。在≥80歲患者HP陽(yáng)性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(45.1±7.4)CFU/g、(43.1±5.8)CFU/g、(45.8±8.1)CFU/g、(46.2±6.2)CFU/g、(46.7±7.7)CFU/g及(47.3±9.3)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(44.6±7.1)CFU/g、(43.6±6.6)CFU/g、(46.1±7.3)CFU/g、(46.1±7.1)CFU/g、(47.2±8.1)CFU/g及(38.8±8.4)CFU/g；兩組LAG、PRE、CLS、CCS及BFG的滴度未見明顯差異(均P>0.05)，而ENG的滴度存在顯著差異(P<0.05)。

2.4腸道菌群在患者吸煙史中的分布特點(diǎn) 在吸煙的HP陽(yáng)性的十二指腸球部潰瘍患者糞便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(42.4±7.6)CFU/g、(43.9±8.2)CFU/g、(43.5±6.9)CFU/g、(44.1±6.2)CFU/g、(44.2±7.1)CFU/g及(46.2±7.7)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(42.4±7.9)CFU/g、(43.1±8.3)CFU/g、(44.5±7.4)CFU/g、(46.1±7.2)CFU/g、(45.1±7.7)CFU/g及(36.8±6.5)CFU/g；兩組僅在ENG中存在顯著差異(P<0.05)。在不吸煙的HP陽(yáng)性的十二指腸球部潰瘍患者糞便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(43.8±9.5)CFU/g、(45.6±7.8)CFU/g、(46.2±9.8)CFU/g、(45.4±7.7)CFU/g、(48.2±8.3)CFU/g及(45.3±9.3)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(44.4±6.9)CFU/g、(45.2±9.5)CFU/g、(46.6±7.9)CFU/g、(45.2±7.9)CFU/g、(47.8±7.8)CFU/g及(46.1±8.7)CFU/g；兩組LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在不吸煙患者糞便中均未見明顯差異(均P>0.05)。

2.5腸道菌群在治療前后的分布特點(diǎn) 治療前HP陽(yáng)性的十二指腸球部潰瘍患者糞便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(39.5±5.5)CFU/g、(45.7±9.2)CFU/g、(40.3±8.9)CFU/g、(46.1±9.5)CFU/g、(44.6±7.1)CFU/g及(35.4±8.5)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(46.3±7.9)CFU/g、(44.8±8.7)CFU/g、(45.3±9.2)CFU/g、(45.1±8.6)CFU/g、(45.1±8.3)CFU/g及(46.4±7.2)CFU/g；兩組在LAG、CLS及ENG中存在顯著差異(P<0.05)。治療后HP陽(yáng)性的十二指腸球部分潰瘍患者糞便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(45.7±9.4)CFU/g、(45.5±9.1)CFU/g、(44.4±7.9)CFU/g、(43.4±7.6)CFU/g、(45.6±7.8)CFU/g及(39.9±8.1)CFU/g；HP陰性組中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分別為(46.1±10.7)CFU/g、(46.1±8.8)CFU/g、(44.3±8.5)CFU/g、(44.2±9.2)CFU/g、(46.1±8.9)CFU/g及(44.7±9.1)CFU/g；兩組僅在ENG中存在顯著差異(P<0.05)。

3 討 論

十二指腸球部潰瘍是臨床上常見的消化系統(tǒng)疾病，通常表現(xiàn)為上腹痛，以空腹痛和夜間痛為主要特點(diǎn)。腸道菌群亦稱為腸道微生物群，已被證實(shí)與功能性腸病，肥胖癥，2型糖尿病和心血管疾病及許多自身免疫性疾病之間有很強(qiáng)的相關(guān)性〔5,6〕。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，使得通過腸道微生物組糞便多樣性的基因檢測(cè)和腸道菌群的種類和系統(tǒng)發(fā)育分類的準(zhǔn)確分析成為可能。這種檢測(cè)可以識(shí)別多樣性的變化，并且可以揭示某些細(xì)菌的過度生長(zhǎng)。既往研究表明，在缺血性心臟病不穩(wěn)定的情況下，胃十二指腸區(qū)的侵蝕性和潰瘍性病變伴隨著其黏膜微生物的分泌增加和細(xì)菌和真菌的酶活性的誘導(dǎo)，在那里形成的異常微生物可以增加黏膜的炎癥和壞死〔7〕，提示腸道菌群在潰瘍形成及愈合中具有重要的作用。

本研究結(jié)果表明腸道微生物群在性別中的分布無顯著差異，這與既往研究存在一定的差異，可能與入選標(biāo)準(zhǔn)的不同，潰瘍種類的差異及樣本量的大小密切相關(guān)〔8,9〕。本研究結(jié)果表明年齡是十二指腸球部潰瘍發(fā)生的重要因素，在HP陽(yáng)性患者中表現(xiàn)更顯著，這與既往報(bào)道的HP陽(yáng)性促進(jìn)十二指腸球部潰瘍發(fā)生的觀點(diǎn)較為一致〔8,10～12〕。本研究暫無證據(jù)表明吸煙與十二指腸球部潰瘍的發(fā)生存在相關(guān)性。治療后十二指腸球部潰瘍患者糞便中的菌群種類失衡情況逐漸改善，有助于病情的恢復(fù)，符合我們的預(yù)期〔13,14〕。但本研究也存在一定的不足之處，雖然初步結(jié)論可以說明腸道菌群在不同臨床病理特征中表現(xiàn)各異，但由于本研究屬于小樣本臨床實(shí)驗(yàn)，得出的結(jié)果仍需進(jìn)一步大樣本數(shù)據(jù)的證實(shí)。