NLR及ESE-3轉(zhuǎn)錄因子在胃癌患者中表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

李玲玲 楊俊娥 石慶芳 杜秋越 王大慶 周風(fēng)舉

(1哈勵遜國際和平醫(yī)院腫瘤科，河北 衡水 053000；2天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科)

胃癌是最常見的上消化道惡性腫瘤，2015年癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)〔1〕顯示，我國胃癌患者67.9萬例，僅次于肺癌，且死亡率極高，我國胃癌死亡人數(shù)占全球同期胃癌總死亡40%以上〔2〕，為社會及家庭帶來嚴(yán)重的疾病負(fù)擔(dān)。ETS超家族是一個轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子家族，在腫瘤演進(jìn)過程中發(fā)揮重要作用〔3〕，上皮轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(ESE)-3轉(zhuǎn)錄因子作為 ETS 家族的一員，主要調(diào)控基因表達(dá)，ESE-3在胰腺癌、卵巢癌中作為抑癌因子，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖〔4,5〕，在甲狀腺癌中則作為促癌基因直接作用于HER2和 HER3結(jié)合位點，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展〔6〕。ESE-3表達(dá)異常與胃癌關(guān)系如何，國內(nèi)外相關(guān)報道很少。此外，中性粒細(xì)胞和血小板積極參與腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程，中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞比值(NLR)和血小板與淋巴細(xì)胞比率(PLR)與多種惡性腫瘤預(yù)后密切相關(guān)〔7〕，但關(guān)于胃癌術(shù)后預(yù)后相關(guān)研究較少。本研究分析胃癌組織ESE-3、CD133及NLR、PLR與患者臨床病理特征相關(guān)性，再探討NLR及ESE-3轉(zhuǎn)錄因子對胃癌患者預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1病例來源 選擇2011年5月至2013年5月哈勵遜國際和平醫(yī)院初次行胃癌根治術(shù)患者82例，研究對象均符合納入標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初次行胃癌根治術(shù)；②術(shù)后病理組織確診為胃癌，根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會(UICC/AJCC)胃癌 TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)(2010)進(jìn)行術(shù)前分期；③患者及家屬了解并簽署之情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未進(jìn)行化療；②術(shù)前合并嚴(yán)重感染或免疫性疾病；③年齡大于75歲。術(shù)后通過復(fù)診、電話、郵件等形式進(jìn)行隨訪，隨訪時間終點為術(shù)后5年，隨訪終點時間為患者死亡，以隨訪結(jié)束或術(shù)后至死亡作為患者生存時間，本研究已通過醫(yī)院倫理委員會倫理審查。

1.2研究方法 免疫組化SP檢測法：取胃癌病灶及距原發(fā)灶邊緣 5 cm 以上的正常胃黏膜組織，標(biāo)本送病理科石蠟包埋，熟練切片厚度為5 μm，切片放恒溫箱收集備用，經(jīng)脫蠟水化放入EDTA修復(fù)液灰盒，在高壓鍋中加熱到噴氣1.5 min，取出后放入 3%的過氧化氫溶液中，室溫避光10 min，經(jīng)PBS溶液洗滌3 次，每次5～10 min，將一抗用抗體稀釋液稀釋，ESE-3抗體(Abcam 公司，英國)及CD133 抗體(Miltenyi 公司，德國)稀釋后，次日復(fù)溫后滴加二抗 ，37℃孵育30 min后，加 PBS洗滌3次每次5～10 min，滴加新配置的二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，顯微鏡下觀察直至顏色變?yōu)辄S褐色，蘇木精復(fù)染2～5 min，脫水，透明，使用中性樹膠封片。有棕褐色或棕黃色著色顆粒記為陽性。隨機(jī)選取觀察區(qū)域內(nèi)5個高倍視野，每個高倍視野計數(shù)500個細(xì)胞，其陽性細(xì)胞百分比<5%者判為陰性，≥5%為陽性。研究對象術(shù)前1 w內(nèi)采集靜脈血2 ml，進(jìn)行血常規(guī)檢測，包括淋巴細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)等，計算NLR及PLR。以 NLR<4 為低NLR組，NLR≥4 為高NLR組；PLR<195為低PLR組，PLR≥195為低PLR組〔8〕。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法制作生存曲線，組間生存曲線比較采用Log-rank檢驗。

2 結(jié) 果

2.1ESE-3、CD133在胃癌及癌旁組織中的表達(dá) 胃癌組織中ESE-3陽性表達(dá)為81.7%(67/82)，顯著高于癌旁組織(54.9%，45/82)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.629,P=0.000)，陽性顆粒主要定位于細(xì)胞核中。胃癌組織中CD133陽性表達(dá)為51.2%(42/82)，癌旁組織均為陰性，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=56.459,P=0.000)。

2.2ESE-3、CD133表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織ESE-3表達(dá)陽性率與患者TNM分期及浸潤深度明顯相關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)(P>0.05)；胃癌組織CD133表達(dá)陽性率與患者腫瘤分化程度、TNM分期及浸潤深度明顯相關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1 ESE-3、CD133陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的相關(guān)性(n,n=82)

2.3NLR、PLR與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 胃癌患者NLR高水平與患者分化程度、TNM分期及浸潤深度明顯相關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)(P>0.05)；胃癌患者PLR高水平與患者腫瘤分化程度、TNM分期及浸潤深度明顯相關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)(P>0.05)，見表2。

表2 NLR、PLR與患者臨床病理特征的相關(guān)性(n,n=82)

2.4NLR及ESE-3轉(zhuǎn)錄因子與胃癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系 胃癌組織中ESE-3轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)陰性患者其術(shù)后生存情況顯著優(yōu)于ESE-3表達(dá)陽性患者(P<0.05)，見圖1；NLR低水平患者其術(shù)后生存情況顯著優(yōu)于NLR高水平患者(P<0.05)，見圖2。

圖1 ESE-3表達(dá)與胃癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系

圖2 NLR與胃癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系

3 討 論

早發(fā)現(xiàn)早治療是減少胃癌死亡率的最有效措施。近年來，胃癌相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物研究為其預(yù)防和治療提供了重要依據(jù)，其中ETS超家族已被證實在細(xì)胞增殖分化、凋亡及腫瘤形成過程中起著至關(guān)重要的作用〔9〕。ESE-3轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子屬于 ETS超家族的 ESE亞家族，廣泛存在于細(xì)胞核內(nèi)，能夠單獨或與其他效應(yīng)分子形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，抑制或增強(qiáng)不同下游靶基因轉(zhuǎn)錄。大約85%的腫瘤是由腺上皮組織中基因異常表達(dá)導(dǎo)致上皮細(xì)胞增殖和分化缺陷發(fā)展而來，ESE-3在上皮或在富含腺上皮組織中表達(dá)異常促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展〔10〕。在結(jié)腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤中，ESE-3是一種潛在的腫瘤抑制基因，其在癌組織中表達(dá)明顯低于癌旁組織〔11〕；而在甲狀腺癌中證實ESE-3上調(diào)頻繁，增強(qiáng)了癌細(xì)胞增殖及運動性和侵襲能力。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織ESE-3陽性表達(dá)高于癌旁組織，可能是胃癌新的轉(zhuǎn)錄因子。Shi等〔12〕發(fā)現(xiàn)敲低胃癌細(xì)胞ESE-3表達(dá)可顯著抑制ETS蛋白質(zhì)的關(guān)鍵靶點基質(zhì)金屬蛋白酶家族基因的表達(dá)，此外，下調(diào)胃癌細(xì)胞ESE-3表達(dá)可降低her2～4 mRNA表達(dá)，抑制其下游MAPK/ERK和PI3K/AKT信號通路活性酶家族來促進(jìn)胃癌的發(fā)生。因此，ESE-3可能成為胃癌預(yù)后判斷新指標(biāo)，為基因治療提供新靶點。

腫瘤發(fā)生發(fā)展與機(jī)體炎癥細(xì)胞和免疫信號密切相關(guān)〔13〕，其中中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血小板尤為重要。腫瘤細(xì)胞通過調(diào)節(jié)炎癥基因釋放促炎因子和趨化因子，抑制細(xì)胞免疫并促進(jìn)癌細(xì)胞生長；中性粒細(xì)胞通過生成多種炎癥介質(zhì)，促進(jìn)腫瘤血管形成及轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，并減弱自然殺傷細(xì)胞功能，促使腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。 淋巴細(xì)胞是抗腫瘤免疫主要細(xì)胞，淋巴細(xì)胞數(shù)量減少為腫瘤細(xì)胞增殖及惡性侵襲提供了條件。NLR可反映腫瘤患者炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)平衡狀態(tài)，高水平NLR 有利于腫瘤細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移，Zhao等〔14〕通過回顧性分析378 名惡性腫瘤患者NLR與臨床病理特征及生存率的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)NLR 為進(jìn)展期惡性腫瘤患者預(yù)后的獨立危險因素。PLR則反映與腫瘤細(xì)胞相關(guān)的炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞增殖誘導(dǎo)IL-1、IL-6水平增加，致使血小板過度增生，進(jìn)而釋放因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者NLR及PLR 水平與年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與腫瘤分化程度、TNM分期及浸潤深度有關(guān)，且低水平NLR胃癌患者生存期優(yōu)于高水平患者。這可能與機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)失衡，腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移增加，抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用減弱有關(guān)，Sun等〔15〕通過回顧性分析305例胃癌根治術(shù)患者NLR、PLR等相關(guān)指標(biāo)，認(rèn)為其能有效評價患者總生存率；Lee等〔16〕研究顯示NLR和PLR 是晚期胃癌化療患者預(yù)后的獨立危險因素。因此，胃癌根治術(shù)患者術(shù)后監(jiān)測NLR及PLR 水平，在一定程度上可反映其預(yù)后水平。

綜上所述，NLR及ESE-3表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，ESE-3可能是胃癌一種潛在的預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點。但ESE-3在胃癌組織中上調(diào)，促進(jìn)胃癌發(fā)展的機(jī)制有待進(jìn)一步研究，為臨床藥物治療提供新的思路。