微乳毛細(xì)管電動色譜－場放大富集法測定9種核苷類化合物

張 慶，于曉章，張 琳，梁美娜，李寧杰，聶謹(jǐn)芳，黃麗麗

（1．桂林理工大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，廣西桂林541006；2．廣西環(huán)境污染控制理論與技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541006；3．福州大學(xué)食品安全與藥物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州361006；4．桂林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西桂林541006）

在基因工程、免疫學(xué)等現(xiàn)代生物技術(shù)的推動下，核苷及其衍生物等得到了廣泛的使用。尤其是核苷類化合物，其在抗病毒、抗腫瘤方面發(fā)揮了越來越重要的作用。目前，經(jīng)美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)的抗艾滋病藥物大多是核苷類衍生物，因此核苷類藥物有望成為新一代具有重要作用的藥物。目前，核苷類化合物的分析檢測方法主要有高效液相色譜法、薄層色譜法、柱色譜法及毛細(xì)管電色譜法等［1－5］。高效液相色譜法不僅分析時間長，而且流動相消耗大量的有機(jī)溶劑；薄層色譜法僅適用于少量樣品的分析；柱色譜法常需要加壓操作，不利于大規(guī)模樣品的測定；毛細(xì)管電色譜法具有快速、高效的特點(diǎn)，但存在重現(xiàn)性較差，運(yùn)行時易產(chǎn)生氣泡等難題。因此，亟需探索和發(fā)展一種更為高效的分析介質(zhì)和更為靈敏的檢測手段，才能更進(jìn)一步發(fā)掘核苷類藥物在生物醫(yī)學(xué)中的作用。

微乳液毛細(xì)管電動色譜（MEEKC）是以微乳液作為分離介質(zhì)，根據(jù)物質(zhì)的疏水性以及電遷移率的差異來實(shí)現(xiàn)分離的一種毛細(xì)管微分析技術(shù)，該技術(shù)可以同時對電荷型／中性物質(zhì)、水溶性／脂溶性物質(zhì)進(jìn)行檢測［6－8］。MEEKC法具有高效、快速及分析對象廣等優(yōu)點(diǎn)，但由于其檢測器多為紫外檢測器（UV），受到進(jìn)樣量和光程等因素的影響，靈敏度低，因此限制了MEEKC法在痕量分析中的應(yīng)用。為了提高該分析方法的檢測靈敏度和擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，一些在線富集技術(shù)，比如場放大富集（FASI）、大體積樣品堆積（LVSS）和離子選擇性耗盡掃集法等已被用于 MEEKC［9－10］。Zhang等［11］建立了一種 MEEKC－FASI分析尿液中嗎啡、可待因、納洛酮、海洛因、蒂巴因、可卡因、哌替啶、芬太尼、美沙酮9種麻醉劑的方法，該技術(shù)檢出限低至0．3μg／L。Chen等［12］首次建立了一種基于毛細(xì)管內(nèi)衍生化的膠束電動色譜法（MEKC）測定奶粉、液態(tài)奶、奶飲料和豆奶粉樣品中羥脯氨酸的方法。在最佳條件下，該方法可在7min內(nèi)完成衍生分離，脯氨酸的檢出限為1．6ng／mL。

本研究建立了一種新的MEEKC－FASI分析方法，對影響MEEKC分離效果和FASI富集效果等因素進(jìn)行了優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了腺嘌呤、鳥嘌呤、甲基腺苷、N6－甲基腺苷、胞苷、鳥苷、次黃嘌呤、巰嘌呤、氟尿嘧啶9種核苷類化合物的同時在線分析檢測。為了驗(yàn)證所建立的方法的可行性，進(jìn)行了尿樣和血清樣品的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，回收率范圍85．2%～113．0%，方法檢出限低至0．22μg／mL。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 主要儀器及試劑

安捷倫 HP3D毛細(xì)管電泳儀（Agilent technologies Inc），配備二極管陣列檢測器；KQ－100型超聲清洗儀（昆山超聲儀器有限公司）；pHS－3C型精密酸度計（上海大普儀器有限公司）；R200D分析天平（Sartorius）；800型離心沉淀器（上海手術(shù)器械廠）。未涂層熔融石英毛細(xì)管（63cm，有效長度54．5cm，50μm i．d．×375μm o．d．）。

腺嘌呤（Aderine）、鳥嘌呤（Guanine）、甲基腺苷（Methladenosine）、N6－甲基腺苷（N6－methyladenosine）、胞苷（Cytidine）、鳥苷（Vernine）、次黃嘌呤（Hypoxanthine）、巰嘌呤（Mercaptopurine）、氟尿嘧啶（Fluorouracil）標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品鑒定所）；十二烷基硫酸鈉（SDS）（Alfa Aesar）；色譜純甲醇、乙腈（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水均為Milli－Q超純水。

血清和尿液（南京森貝伽生物科技有限公司）。

1．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液和微乳液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別稱取適量的腺嘌呤、鳥嘌呤、甲基腺苷、N6－甲基腺苷、胞苷、鳥苷、次黃嘌呤、巰嘌呤、氟尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解，配制成1 000μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，避光保存于4℃冰箱。使用時再稀釋至所需的濃度。微乳液：分別取13．5mg的SDS，11．0μL的正丁醇，8．0μL的乙酸乙酯和1470．0μL 10mmol／L的Na2B4O7緩沖溶液，置于2mL離心管中，超聲30min即可得到光學(xué)透明穩(wěn)定的微乳緩沖體系。固定微乳組成為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．9%SDS、0．6%的正丁醇、0．5%的乙酸乙酯和98．0%10mmol／L的Na2B4O7緩沖溶液。

1．3 樣品制備

尿樣：取適量濃度的9種核苷類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，加入尿液中，經(jīng)4 000r／min離心10min后取上層清液，用0．22μm濾膜過濾，再用10mmol／L Na2B4O7溶液稀釋10倍，制得尿樣。儲存在4℃冰箱備用。血清樣品：取適量濃度的9種核苷類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液混勻，加入血清中，經(jīng)離心處理10min（4 000r／min）后，取上層清液用0．22μm濾膜過濾，再用10mmol／L Na2B4O7溶液稀釋20倍，制得血清樣品。儲存在4℃冰箱備用。

1．4 樣品分析

毛細(xì)管預(yù)處理：依次用超純水、0．1mol／L HCl、超純水、0．1mol／L NaOH、超純水各沖洗30min，最后在電泳儀上用運(yùn)行緩沖液沖洗30min。待毛細(xì)管電泳（CE）基線和電流穩(wěn)定后，方可進(jìn)行CE操作分析。CE儀器操作：毛細(xì)管每次使用前依次用超純水、0．1mol／L NaOH溶液、超純水和緩沖液各沖洗10min；兩次運(yùn)行之間，依次用超純水和運(yùn)行緩沖液沖洗5min；每運(yùn)行5次，均需及時更換運(yùn)行緩沖液；每次更換運(yùn)行緩沖液后，均需用緩沖液平衡毛細(xì)管20min。所有溶液進(jìn)入CE儀器運(yùn)行前，均需經(jīng)0．22μm濾膜過濾，并超聲2min脫氣。安捷倫HP3D毛細(xì)管電泳儀檢測波長設(shè)置為200nm，柱溫保持為25℃。

2 結(jié)果與討論

2．1 MEEKC分離條件的優(yōu)化

2．1．1 緩沖溶液pH的選擇 緩沖溶液的pH值對 MEEKC的分離效果有顯著的影響［10－12］。考察了Na2B4O7緩沖溶液的pH在8．0～9．5之間變化時對9種核苷類化合物的分離情況。結(jié)果表明隨著pH值增大，分析時間逐漸延長。如圖1所示，當(dāng)pH為8．0和8．5時，9種核苷類化合物不能實(shí)現(xiàn)基線分離；當(dāng)pH為9．5時，N6－甲基腺苷（4號峰）和胞苷（5號峰）不能基線分離。綜合考慮分離度和遷移時間，選擇緩沖溶液的最佳pH值為9．0。

2．1．2 緩沖溶液濃度的選擇 使用低濃度（5～10mmol／L）的硼砂鹽或磷酸鹽能夠獲得較小的電流和較大的電滲流，因此上述2種緩沖溶液常被應(yīng)用于MEEKC體系中［13－14］。固定緩沖溶液的pH值為9．0，考察濃度5～15mmol／L Na2B4O7緩沖溶液對9種核苷類化合物分離效果的影響。如圖2所示，隨著硼酸鹽濃度的增加，分離度逐漸增大，被分析物的遷移時間也隨之延長，并且在15mmol／L的時候系統(tǒng)產(chǎn)生的焦耳熱變大，導(dǎo)致體系的穩(wěn)定變差。綜合考慮，緩沖溶液濃度選擇10mmol／L。

圖1 Na2B4O7緩沖溶液pH值對9種核苷類化合物分離效果的影響Fig．1 Effect of Na2B4O7buffer pH on the separation of 9nucleosidesseparation voltage：15kV；temperature：25 ℃；detection wavelength：200nm；electrokinetic injection：10kV×6s；microemulsion：0．9%SDS，0．6%1－butanol，0．5%ethyl acetate and 98．0%10mmol／L Na2B4O7buffer solution．1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2 μg／mL）；3．methladenosine （2．5 μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）．

圖2 NaB4O7緩沖溶液濃度對9種核苷類化合物分離效果的影響Fig．2 Effect of NaB4O7buffer concentration on the separation of 9nucleosidesborate concentration：5，10and 15mmol／L；Other conditions were the same as Fig．1．1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2μg／mL）；3．methladenosine（2．5μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）．

2．1．3 表面活性劑的選擇 SDS是MEEKC法中最常用的陰離子表面活性劑。實(shí)驗(yàn)研究了濃度為5～20mmol／L SDS對核苷類化合物分離效果的影響［11，15］。結(jié)果顯示，隨著SDS濃度的增大，由于電滲流的減小以及油滴表面負(fù)電荷的增多，遷移時間相應(yīng)的延長。當(dāng)SDS的濃度為15mmol／L時，次黃嘌呤（7號峰）和巰嘌呤（8號峰）遷移時間比較接近，分離度較差；當(dāng)SDS的濃度為20mmol／L時，雖然基線分離較好，但遷移時間較長；當(dāng)SDS的濃度較低時（5mmol／L），9種分析物分離度較差，腺嘌呤（1號峰）和鳥嘌呤（2號峰）甚至未基線分離。考慮微乳體系需要足夠的表面活性劑來維持穩(wěn)定，最終選擇10mmol／L的SDS為最佳濃度。

2．1．4 助表面活性劑的選擇 正丁醇是MEEKC法中最常用的助表面活性劑［11，16－17］。微乳體系中加入一定濃度的正丁醇，可以增加微乳滴液膜的機(jī)械強(qiáng)度，有利于維持MEEKC運(yùn)行時微乳液的穩(wěn)定。但如果正丁醇過量，多余的正丁醇分子會與表面活性劑（如SDS）的極性基團(tuán)締合，導(dǎo)致微乳液膜松散，降低微乳體系的穩(wěn)定性，容易出現(xiàn)破乳現(xiàn)象［9］。因此，考察了正丁醇含量對9種核苷類化合物分析效果和微乳液穩(wěn)定性的影響。結(jié)果顯示，正丁醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)由0．3%増至0．9%時，隨著正丁醇含量的增加，遷移時間隨之延長；但正丁醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)增到1．2%，遷移時間縮短，且分離度很差。綜合考慮各分析物的分離度和靈敏度，選擇0．6%的正丁醇為最佳助表面活性劑。

2．1．5 油相種類及濃度的選擇 油相一般采用正己烷、正庚烷、正辛烷、乙酸乙酯等化合物［11，18］。鑒于乙酸乙酯與水之間的表面張力更小，因此將其作為微乳體系的油相微乳液，僅需少量的表面活性劑即可維持體系的穩(wěn)定。以乙酸乙酯為油相，考察了其濃度對9種核苷類化合物分離效果的影響。在0．25%～0．75%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）乙酸乙酯含量范圍內(nèi)，9種分析物均完全分離，且選擇性和靈敏度均無明顯的變化。為確保微乳體系能在較低的SDS濃度下維持穩(wěn)定，故確定0．5%乙酸乙酯為油相。

2．1．6 分離電壓的選擇 分離電壓不僅影響分離效率，也是影響分析時間的一個重要參數(shù)［11，18－24］。研究了在10、15、20、25kV的條件下，分離電壓對9種核苷類化合物分離效果和靈敏度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著分離電壓的增大，9種分析物的遷移時間逐漸縮短。當(dāng)電壓為10kV時，分析物的分離時間較長，且?guī)€嘌呤（8號峰）和氟尿嘧啶（9號峰）響應(yīng)值都有所下降；當(dāng)電壓為20kV和25kV時，分析物的分離度均有所下降，原因可能為體系的電流較大導(dǎo)致毛細(xì)管焦耳熱較大，引起電流和基線不穩(wěn)定。綜合考慮，實(shí)驗(yàn)選擇15kV為最合適的分離電壓。綜上所述，確定最佳的實(shí)驗(yàn)條件為：微乳液組成為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0．9%的SDS、0．6%的正丁醇、0．5%的乙酸乙酯和98．0%的10mmol／L Na2B4O7緩沖液（pH＝9．0），分離電壓為15kV。9種核苷類化合物在最佳微乳組成條件下的MEEKC譜圖如圖3所示。從圖中可以看出，除了N6－甲基腺苷（4號峰）和胞苷（5號峰）分離度相對較小外，9種分析物在12min內(nèi)基本實(shí)現(xiàn)基線分離。

2．2 富集條件的優(yōu)化

2．2．1 樣品稀釋劑的選擇 FASI主要基于高壓電場下樣品溶液和背景緩沖溶液電導(dǎo)的差異而實(shí)現(xiàn)樣品富集的，因此樣品基體對FASI富集效果有重要的影響［7，23－24］。分別以10mmol／L Na2B4O7緩沖溶液、微乳液、0．1mmol／L NaOH溶液、甲醇和水為樣品稀釋劑，考察了樣品稀釋劑對9種核苷類化合物靈敏度和分離度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)樣品稀釋劑為微乳液時，雖然鳥嘌呤的響應(yīng)值明顯得到提高，但其余分析物的分離度下降，氟尿嘧啶甚至不出峰；0．1mmol／L NaOH溶液作為樣品稀釋劑時，腺嘌呤響應(yīng)值下降，N6－甲基腺苷峰變寬；甲醇為樣品稀釋劑時，鳥嘌呤、巰嘌呤和氟尿嘧啶響應(yīng)值下降；水為樣品稀釋劑對各分析物的靈敏度顯著下降。在10mmol／L Na2B4O7緩沖溶液中，9種核苷類化合物的靈敏度均得到提高，且具有良好的分離度。綜合考慮，選擇10mmol／L Na2B4O7緩沖溶液作為樣品稀釋劑。

2．2．2 進(jìn)樣條件的選擇 場放大進(jìn)樣技術(shù)的進(jìn)樣量主要取決于進(jìn)樣電壓和進(jìn)樣時間。考察進(jìn)樣電壓在14～24kV范圍內(nèi)9種核苷類化合物的靈敏度變化情況。隨著進(jìn)樣電壓的增大，檢測靈敏度也隨之提高；當(dāng)進(jìn)樣電壓超過22kV時，各分析物的峰形展寬，分離度開始下降，說明此時樣品富集失敗。原因可能為：（1）FASI富集過程中，進(jìn)樣量隨進(jìn)樣電壓（或者進(jìn)樣時間）的增大而增大，當(dāng)進(jìn)樣量超過毛細(xì)管所能承受的范圍時（FASI進(jìn)樣量只能低于毛細(xì)管總體積的10%），由于樣品擴(kuò)散作用，導(dǎo)致峰形展寬，靈敏度和分離度下降；（2）高進(jìn)樣電壓使樣品區(qū)帶產(chǎn)生大量的焦耳熱，引起毛細(xì)管內(nèi)溫度驟升，影響體系電流和基線的穩(wěn)定；（3）樣品稀釋劑和背景緩沖溶液存在電導(dǎo)差異，過高的進(jìn)樣電壓，可能引起體系產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致富集失敗。進(jìn)樣電壓為22kV，考察進(jìn)樣時間對峰高的影響。進(jìn)樣時間從5s增加到15s的過程中，被分析物的峰高僅在5～10s的范圍內(nèi)是隨著進(jìn)樣時間的增加而增高。當(dāng)進(jìn)樣時間為15s時，峰形展寬，分離效率下降，故以10s（22kV）為最佳進(jìn)樣時間。

2．2．3 FASI與常規(guī)進(jìn)樣對比及富集倍數(shù) 文獻(xiàn)報道［11，25］在樣品電動進(jìn)樣前壓力注入一段水塞可以提高富集效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)以3kPa壓力進(jìn)6s水柱時，富集效果最好。在最佳的MEEKC條件下，對比了FASI和常規(guī)進(jìn)樣兩種方式對9種核苷類化合物分離選擇性和檢測靈敏度的影響。如圖4所示，在不影響核苷類化合物分離度和遷移時間的情況下，采用FASI進(jìn)樣方式可顯著提高各分析物的檢測靈敏度。

對比常規(guī)進(jìn)樣方式，場放大富集的倍數(shù)可表示為：f＝（h／h0）×（c0／c）。其中，h0和h分別為常規(guī)進(jìn)樣和采用FASI進(jìn)樣后溶質(zhì)的峰高，c0和c分別為兩種情況下溶質(zhì)的濃度。依據(jù)公式可以計算出9種核苷類化合物的富集倍數(shù)分別為：腺嘌呤（33倍）、鳥嘌呤（12倍）、甲基腺苷（38倍）、N6－甲基腺苷（14倍）、胞苷（18倍）、鳥苷（20倍）、次黃嘌呤（21倍）、巰嘌呤（8．8倍）及氟尿密度（14倍）。

圖3 最佳MEEKC條件下9種核苷類化合物的電泳譜圖Fig．3 Electropherogram of 9nucleosides under the optimized MEEKC conditionsseparation voltage：15kV；temperature：25 ℃；detection wavelength：200nm；electrokinetic injection：10kV×6s；microemulsion solution：0．9%SDS，0．6%1－butanol，0．5%ethyl acetate and 98．0%10mmol／L Na2B4O7buffer solution．1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2μg／mL）；3．methladenosine（2．5μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）．

2．3 線性范圍和檢出限

配制一系列不同濃度的9種核苷類化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在最佳富集條件下進(jìn)行MEEKC測定。各分析物的線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限（S／N＝3）如表1所示。9種核苷類化合物在線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)大于0．9960，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5．74%。

圖4 MEEKC－FASI（a）與常規(guī)MEEKC（b）進(jìn)樣的9種核苷類化合物毛細(xì)管電泳譜圖Fig．4 Elecropherograms of 9nucleosides for MEEKC－FASI（a）and conventional MEEKC （b）（a）：MEEKC－FASI：water plug（30mbar，6s）；electrokinnetic injection（22kV×10s）．1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2μg／mL）；3．methladenosine（2．5μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）；（b）：normal electrokinetic injection，10kv×5s；1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2μg／mL）；3．methladenosine（2．5μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）．

表1 9種核苷類化合物的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 1 Regression equations，linear ranges，correlation coefficients and detection limits for 9nucleosides

2．4 回收率和精密度

2．4．1 尿樣的測定 根據(jù)1．3節(jié)方法制備尿樣，按照1．4節(jié)所述的條件進(jìn)行分析，尿樣的電泳譜圖如圖5所示。由圖5可以看出，除了N6－甲基腺苷（4號峰）和胞苷（5號峰）峰形有略微展寬，分離度變小，以及巰嘌呤（8號峰）和氟尿密度（9號峰）的分離度有所下降以外，其他分析物均沒有受到基質(zhì)的影響。分別向尿樣中加入2個不同濃度水平的9種核苷類化合物的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。每個濃度平行測定3次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。如表2所示，9種核苷類化合物的回收率介于91．2%～113．0%之間，RSD均小于5．9%。加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法穩(wěn)定可靠。

圖5 9種核苷類化合物尿樣（a）和空白（b）的電泳譜圖Fig．5 Elecropherograms of 9nucleosides in urine（a）and in blank samples（b）experimental conditions same as the Fig．4（a）．1．a(chǎn)derine（2μg／mL）；2．guanine（2μg／mL）；3．methladenosine（2．5μg／mL）；4．N6－methyladenosine（5μg／mL）；5．cytidine（4μg／mL）；6．vernine（30μg／mL）；7．hypoxanthine（5μg／mL）；8．mercaptopurine（4μg／mL）；9．fluorouracil（2μg／mL）．

表2 尿樣中9種核苷類化合物的加標(biāo)回收率（n＝3）Table 2 Recoveries of 9nucleosides spiked in urine samples（n＝3）

2．4．2 血清樣品的測定 血清樣品根據(jù)1．3節(jié)步驟處理，按照1．4節(jié)所述的條件進(jìn)行分析。同時為驗(yàn)證所建立的方法應(yīng)用于血清樣品中9種核苷類化合物檢測結(jié)果的可靠性，進(jìn)行了2個濃度水平的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。每個濃度平行測定3次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），得到9種核苷類化合物的回收率介于85．2%～111．8%之間，RSD均小于8．2%。

3 結(jié)論

本文建立了一種快速、靈敏的同時測定9種核苷類化合物的微乳液毛細(xì)管電動色譜－場放大富集分離分析方法，分別研究了MEEKC分離條件、FASI富集條件等因素的影響。在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下，9種核苷類化合物可在12min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離，且被測物濃度與峰電流呈良好的線性關(guān)系，檢出限（S／N＝3）低至0．22μg／mL。此外，將所建立的方法應(yīng)用到尿樣和血清樣品分析，成功地檢測到了9種核苷類化合物。該方法具有簡單、靈敏等特點(diǎn)，有望在藥物分析等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。