氣相色譜－質(zhì)譜法測(cè)定含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留

徐瀟穎，朱炳祺，劉 柱，趙超群，梁晶晶，羅金文

（1．浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江杭州310000；2．浙江中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310000）

近年來(lái)牛奶中農(nóng)藥殘留的問(wèn)題同樣存在于含乳飲料中，目前許多國(guó)家對(duì)牛奶中農(nóng)藥的最高殘留限量做了嚴(yán)格的限定，而對(duì)于含乳飲料中農(nóng)藥的監(jiān)測(cè)尚不全面。因此，開(kāi)發(fā)一種針對(duì)含乳飲料中多農(nóng)殘檢測(cè)的方法迫在眉睫。侯逸眾等［1］建立牛奶中多組分農(nóng)藥殘留的測(cè)定，采用內(nèi)標(biāo)稀釋?zhuān)稚⒐滔噍腿。瓪庀嗌V／串聯(lián)質(zhì)譜法，得到的檢出限在0．02～0．55μg／kg范圍，獲得的回收率在58．7%～127．1%之間。

含乳飲料為復(fù)配食品，復(fù)雜的基質(zhì)易對(duì)含量較低的目標(biāo)物的分析造成影響，在分析前需要進(jìn)行提取、富集、凈化等處理手段。通常采用凝膠滲透色譜（GPC）［2］、液－液萃取［3］、固相萃取（SPE）［4］、基質(zhì)分散固相萃取（MSPD）［5］等方法凈化。QuEChERS方法［6－7］具有分析速度快、溶劑用量少、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，在農(nóng)藥多殘留檢測(cè)中的使用日益增加，至今已有超過(guò)200種農(nóng)藥殘留測(cè)定可采用QuEChERS方法凈化。針對(duì)目前含乳飲料中規(guī)定的有限量要求的5種農(nóng)藥，本文通過(guò)對(duì)提取方法進(jìn)行優(yōu)化，比較SPE法以及QuEChERS凈化法，最終建立同時(shí)測(cè)定含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留的氣相色譜－質(zhì)譜檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1．1 儀器與試劑

安捷倫7890C氣相色譜，7000C三重四極桿質(zhì)譜儀；LYNX6000離心機(jī)（德國(guó)，Thermo）；Turbo Vap LV氮吹儀（瑞典，Biotage）。

醚菌酯、咯菌腈、氯菊酯、丙溴磷以及氯氰菊酯有效成分含量均大于99．0%，其中氯菊酯、氯氰菊酯、環(huán)氧七氯購(gòu)于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研研究所，咯菌腈、丙溴磷、醚菊酯購(gòu)于北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。乙腈、正己烷為色譜純，無(wú)水 MgSO4、NaCl均為分析純。乙二胺－N－丙基硅烷（PSA，40～60μm），十八烷基硅烷（C18，50μm）均購(gòu)自于天津Agela公司。

含乳飲料及含乳飲品購(gòu)自當(dāng)?shù)爻小?/p>

1．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精確移取適量5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別置于5mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成50μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，－18℃冰箱中保存，使用前根據(jù)需要將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。內(nèi)標(biāo)環(huán)氧七氯臨用前稀釋成適當(dāng)濃度的內(nèi)標(biāo)工作液。

1．3 樣品處理

稱(chēng)取10g（精確至0．01g）樣品于50mL離心管中，加入10．0mL乙腈，渦旋1min后，加入4．0g無(wú)水 MgSO4、1．0g NaCl，振蕩提取10min，8 000r／min離心5min，待凈化。

1．3．1 固相萃取柱凈化 本文中選用兩種固相萃取柱進(jìn)行凈化。其中ENVITM－18固相萃取柱為C18柱填料進(jìn)行石墨化碳黑封端處理，在牛奶多農(nóng)藥殘留檢測(cè)中較為常見(jiàn)，凈化前先用10mL乙腈對(duì)固相萃取柱進(jìn)行活化，后取2．0mL待凈化液通過(guò)固相萃取柱。而Prime HLB固相萃取柱基于對(duì)凈化液中的脂類(lèi)物質(zhì)存在吸附，凈化前，需在2．0mL待凈化液中加入0．5mL水混勻。待凈化液通過(guò)固相萃取柱后，用4mL乙腈分兩次洗脫，收集全部洗脫液，氮吹至近干后，用正己烷交換溶劑，最終定容至1．0mL，經(jīng)0．22μm濾膜過(guò)濾后，供氣相色譜－質(zhì)譜測(cè)定。

1．3．2 QuEChERS凈化 移取3mL待凈化液到預(yù)先裝有100mg無(wú)水 MgSO4、50mg PSA和50mg C18的5mL離心管中，渦旋混合1min，于4℃、8 000r／min下離心2min，取2．0mL上清液氮吹至盡干后，用正己烷交換溶劑，最終定容至1．0mL，經(jīng)0．22μm濾膜過(guò)濾后，供氣相色譜－質(zhì)譜測(cè)定。

1．4 色譜與質(zhì)譜條件

1．4．1 氣相色譜條件 Agilent HP－5MS毛細(xì)管柱（30m×0．25mm，0．25μm）；升溫程序：120℃保持1min，以20℃／min速率升至200℃，再以10℃／min升至300℃，保持5min，總運(yùn)行時(shí)間19．5min；進(jìn)樣口溫度：270℃，載氣：氦氣（＞99．999%），流速：1．2mL／min；進(jìn)樣量：1．0μL；進(jìn)樣模式：不分流；溶劑延遲時(shí)間：5．5min。

1．4．2 質(zhì)譜條件 電子轟擊（EI）電離源；離子源溫度：230℃；掃描方式：選擇離子模式（SIM）。咯菌腈定量離子m／z248，定性離子m／z127、154；，醚菌酯定量離子m／z116，定性離子m／z206、131；氯菊酯定量離子m／z183，定性離子m／z184、255；丙溴磷定量離子m／z339，定性離子m／z374、297；氯氰菊酯定量離子m／z181，定性離子m／z152、180；環(huán)氧七氯定量離子m／z353，定性離子m／z351、355。

2 結(jié)果與討論

2．1 提取條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)比較了二氯甲烷、乙腈、丙酮對(duì)含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留的提取效果。結(jié)果表明，正己烷提取，提取液濃縮后顏色較深、雜質(zhì)多、不易凈化；二氯甲烷提取，部分待測(cè)物回收率偏低；而乙腈較前兩者較好，但采用乙腈作為提取溶劑時(shí)，需加入NaCl使乙腈層與水層分離，加入無(wú)MgSO4以及Pb（Ac）2沉淀蛋白質(zhì)，提高乙腈對(duì)含乳飲料的萃取效果。結(jié)果表明，乙腈提取后，NaCl、無(wú)水MgSO4以及Pb（Ac）2的加入可以使5種農(nóng)藥殘留的回收率更穩(wěn)定。

2．2 凈化方法的選擇

實(shí)驗(yàn)選用陰性樣品進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度為15．0μg／kg，分別考察固相萃取柱凈化以及QuECh－ERS法凈化效果。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)QuEChERS法凈化后，樣品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)物的干擾未完全消除，存在基質(zhì)干擾。選用ENVITM－18固相萃取柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化時(shí)，目標(biāo)物咯菌腈以及醚菌酯的絕對(duì)回收率偏低。Prime－HLB柱能有效吸附牛奶中的磷脂等非極性干擾物，結(jié)合提取條件中的蛋白沉淀技術(shù)，凈化后在目標(biāo)物峰附近不存在基質(zhì)干擾。不同凈化方式對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響見(jiàn)表1，目標(biāo)物的色譜圖如圖1。

表1 不同凈化方式對(duì)目標(biāo)物的回收率的影響Table 1 Effect of different purification methods on recoveries

圖1 牛奶基質(zhì)中5種農(nóng)藥的SIM色譜圖Fig．1 SIM chromatograms of 5pesticides in milk matrix

2．3 方法的線(xiàn)性關(guān)系與檢出限

采用1．3節(jié)下樣品處理中Prime－HLB柱凈化法獲得的空白基質(zhì)溶液，配制5種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度在5～120μg／L范圍內(nèi)，以環(huán)氧七氯作為內(nèi)標(biāo)，將待測(cè)物質(zhì)峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（Y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。結(jié)果表明，5種農(nóng)藥在5～120μg／L范圍線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0．995。選用空白基質(zhì)按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB／T 23210－2008）中檢出限濃度進(jìn)行加標(biāo)后，采用已建立方法進(jìn)行檢測(cè)，其中丙溴磷、氯菊酯以及氯氰菊酯的信噪比均高于100，鑒于不同儀器的差異和方法的適用性，根據(jù)信噪比（S／N≥3）確定本方法的檢出限，結(jié)果如表2所示。

表2 5種農(nóng)殘的線(xiàn)性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 2 Linear equations，correlation coefficients（R2）and limits of detection for 5kinds of pesticide residues

2．4 方法的回收率及精密度

為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性和可靠性，在空白含乳飲料樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，添加水平分別為5．0、15．0和75．0μg／kg，每個(gè)添加水平重復(fù)6次，結(jié)果見(jiàn)表3。

2．5 實(shí)際樣品的測(cè)定

用建立的方法檢測(cè)了20批市售的含乳飲料，結(jié)果均為陰性樣品。

表3 牛奶中不同加標(biāo)水平下5種農(nóng)藥的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）（n＝6）Table 3 Recoveries and RSDs of 5kinds of pesticides residue spiked in milk（n＝6）

3 結(jié)論

建立了固相萃取凈化結(jié)合氣相色譜－質(zhì)譜法測(cè)定含乳飲料中醚菌酯、咯菌腈、丙溴磷、氯菊酯、氯氰菊酯殘留量的分析方法。獲得5種目標(biāo)物的方法檢出限在0．5～1．0μg／kg之間。方法具有穩(wěn)定性好、靈敏度高、快速便捷等特點(diǎn)，能滿(mǎn)足含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留同時(shí)測(cè)定的要求，為該類(lèi)產(chǎn)品的監(jiān)管提供保障。