卵巢癌超聲造影參數與血管新生的相關性研究

時小青 吳秋花

近年來我國的卵巢癌發病率有明顯的增高趨勢，嚴重影響婦女的健康和生活質量[1-2]。卵巢癌的早期診斷是提高患者生存率、延長生存時間的關鍵[3]。人絨毛膜促性腺激素(HCG)水平與卵巢子宮內膜異位囊腫的診斷密切相關，因此利用β-HCG檢測可提高卵巢子宮內膜異位囊腫的早期診斷率，但是診斷的特異性一直不太高，鑒別能力不強[4-5]。超聲是現有檢查手段中診斷卵巢癌最敏感的方法，但是常規超聲的敏感性不高[6-7]。超聲造影(CEUS)是目前最新的反應正常和病變組織的血管灌注狀況的1種辦法，可實時獲得氣泡在微循環中的分布，不僅能將腫瘤內的血流信號和細微血管顯示，還可用于實時觀測腫瘤的血流灌注狀況，有利于腫瘤的定性診斷[8-9]。腫瘤血管生成指內皮細胞在原有的微血管網的基礎上以“芽生”的方式產生新血管的過程。新生血管能持續為宿主輸出腫瘤細胞，并提供足夠的營養，為惡性腫瘤的生長和轉移提供條件[10-11]。本文具體探討了卵巢癌超聲造影參數與血管新生的相關性，希望為早期診斷卵巢癌提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

采用回顧性研究方法，研究時間為2016年1月至2017年12月，選擇在我院診治的卵巢癌患者199例(惡性組)與良性卵巢腫瘤患者100例(良性組)，納入標準：入選者的臨床、超聲與病理學資料完整；在自愿條件下簽署了知情同意書；年齡20～80歲；醫院倫理委員會批準了此次研究；病理學診斷為卵巢癌或良性卵巢腫瘤。排除標準：合并心、肺、肝、胃等重要臟器的疾病；臨床資料缺乏者；妊娠與哺乳期婦女；精神疾病患者。

惡性組中男性100例，女性99例；年齡28～77歲，平均年齡(58.33±3.11)歲；平均體重指數(22.10±3.98)kg/m2；病理分期：Ⅱ期100例，Ⅲ期70例，Ⅳ期29例；分化程度：低分化80例，中分化60例，高分化59例；淋巴結轉移：無轉移100例，有轉移99例；疾病類型：卵巢漿液性囊腺瘤180例，成熟畸胎瘤10例，卵泡膜細胞瘤9例。

良性組中29～78歲，平均(59.11±2.87)歲；平均體重指數(22.08±4.14)kg/m2；疾病類型：卵巢漿液性囊腺癌56例，顆粒細胞瘤30例，內胚竇瘤14例。

兩組患者的年齡、體重指數對比差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 超聲方法

采用GE公司的HITACHI-8500彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率為7.5～13.0 MHz，線陣探頭。患者取截石位，平靜呼吸，患者排空膀胱，將套有避孕套的探頭送入陰道內，探頭頂端達陰道宮頸部。探查有無病灶，探測到病灶時記錄病灶的記錄病灶組織的形態、邊界、內部回聲、鈣化、側方聲影等狀況。

超聲造影劑采用意大利Bracco公司生產的第二代新型超聲微泡對比劑聲諾維(SonoVue)，微泡平均直徑2.5 μm，造影劑微氣泡為磷脂包裹的六氟化硫(SF6)。使用前注入生理鹽水5 ml，震蕩混勻后，形成磷脂包裹的SF6微泡混懸液，通過肘部淺靜脈快速團注，造影劑用量為2.0 ml/次，隨后注入5 ml生理鹽水沖管。選取最佳造影切面：①病灶顯示清晰，選擇的區域應包括腫瘤的實性部分；②聚焦帶放置在病灶下緣。注射造影劑的同時啟動超聲儀內置計時器，采集時間為150 s，保存增強掃描的全過程動態圖像供后期分析。根據病灶大小手動繪制感興趣區(ROI)，記錄時間-強度曲線(TIC)，記錄始增時間(開始注射造影劑到造影劑到達感興趣區時間)、始增強度(造影增強前感興趣區的基礎回聲強度)和峰值時間(開始注射造影劑到感興趣區峰值強化的時間)。

1.3 病理分析

收集所有的病灶組織樣本蠟塊，制度4 μm厚切片，采用SP(鏈霉素抗生物蛋白-過氧化酶)免疫組織化法染色。以陽性對照采用已知的陽性切片，PBS(磷酸鹽緩沖劑)代替第一抗體作陰性對照。采用鼠抗人CD34單克隆抗體行免疫組化染色判斷病理組織的血管，尋找到血管后，先在低倍鏡(×100)下掃查整個切片，尋找3個血管高密度區，再在高倍鏡下(×400)計數這3個視野被染成棕色的微血管數，取平均值作為微血管計數(MVD值)。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 常規超聲特征對比

惡性組的病灶形態不規則、邊界不清晰、內部回聲不均勻、微鈣化、側方聲影的發生率顯著高于良性組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者病灶部位的常規超聲特征對比(例，%)

2.2 超聲造影參數對比

惡性組的始增時間、峰值時間少于良性組，始增強度多于良性組，對比差異都有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者病灶部位超聲造影參數對比

2.3 MVD計數對比

惡性組病灶組織的MVD計數顯著多于良性組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者病灶部位MVD對比個)

2.4 相關性分析

在惡性組中，Spearman相關分析顯示病灶組織的MVD計數與峰值時間呈顯著性負相關(P<0.05)，與始增時間、始增強度無顯著相關性(P<0.05)。見表4。

表4 卵巢癌超聲造影參數與血MVD計數的相關性

3 討論

卵巢癌是目前最常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一，發病率在我國逐漸增加[12]。特別是因其早期癥狀隱匿，病變隱匿不易被發現，缺乏有效的敏感而特異的早期診斷方法，多數的患者就診時已是晚期，導致預后比較差[13]。腫瘤標志物是檢測卵巢癌的1個重要輔助手段，具有簡便、靈敏度高、客觀且創傷小等優點，但是檢測的特異性一直不太高。而在病理檢查中，只有保證一定數量的標本才能制成足夠多的標本切片，這樣做加重了對卵巢的破壞，對于患者有一定的創傷[14-15]。

超聲檢查具有無放射、安全、操作簡單等優點，目前已成為多種疾病的首選診斷方法。超聲檢查方法包括常規超聲、彩色多普勒超聲、超聲造影等[16]。常規超聲檢查的原理是：利用正常組織與卵巢病灶組織的聲阻抗差異來成像，以此觀察卵巢癌的特征；彩色多普勒超聲可用于觀測病灶組織內部的血液流動；超聲造影是1種有效顯示腫瘤組織形狀和形態的方法[17]。本研究顯示惡性組的病灶形態不規則、邊界不清晰、內部回聲不均勻、微鈣化、側方聲影的發生率顯著高于良性組(P<0.05)。不過常規超聲對卵巢癌的鑒別效果不佳，許多卵巢癌的病灶組織不具有典型的超聲表現。

超聲造影是將微泡造影劑經外周靜脈注射后到達靶器官或靶組織，通過增強后散射、改變聲衰減等原理，提高超聲診斷的準確定[18-19]。TIC的曲線走勢和相關參數值能反映出，在造影過程中造影劑灌注隨時間變化的特點，其中峰值時間指注射造影劑到造影增強達到峰值時的時間，峰值強度是指進入腫瘤血管床的微泡數總量。本研究顯示惡性組的始增時間、峰值時間少于良性組，始增強度多于良性組，對比差異都有統計學意義(P<0.05)。從機制上分析，卵巢良性腫瘤血供不豐富，血管數量較少，可在TIC形態上曲線上升支及下降支均緩慢，表現在參數上峰值強度低。惡性腫瘤新生血管數目增多，且腫瘤血管壁不完整，可在TIC形態上為成角明顯，為此峰值強度高，增強速率大[20-21]。

已有研究結果顯示，卵巢癌的發展是1個由多因素、多階段共同參與的極其復雜的過程[22]。與原組織微血管相比，癌癥組織新生血管在結構和功能方面都有很大區別，新生血管不具備完整的微循環功能，其在血管分布和構造方面處于混雜無序狀態，腫瘤外周的血管密集，是利用超聲造影技術觀測卵巢癌組織的新生血管的前期條件[23]。MVD計數是評價腫瘤血管生成的“金標準”，MVD計數越大，術后發生轉移的幾率越高，預后越差。本研究顯示惡性組病灶組織的MVD計數顯著多于對照組(P<0.05)，這提示MVD計數參與卵巢癌的演變過程，腫瘤內MVD差異是鑒別卵巢腫瘤良惡性的基礎。也有研究表明惡性腫瘤內微血管密度隨臨床期別增加而增加，與細胞分化也有顯著相關性[24]。

新生血管網的建立是腫瘤細胞的誘導產生，使得卵巢癌得到進行性生長，以滿足瘤體不斷增殖的代謝、營養需要，同時還不斷地向宿主輸出腫瘤細胞，滿足自身的生長和轉移。本研究Spearman相關分析顯示惡性組病灶組織的MVD計數與峰值時間呈顯著性負相關(P<0.05)，與始增時間、始增強度無顯著相關性(P<0.05)。從機制上分析，腫瘤血管生成活性越高，新生微血管越多，進入腫瘤血管床的微泡灌注量大，其可更短的時間內到達峰值強化，峰值時間縮短[25]。

綜上所述，卵巢癌超聲造影可為卵巢腫瘤良惡性鑒別診斷提供依據，與病理組織血管新生有顯著相關性，可在術前評價卵巢癌血管生成情況。