微生物源果膠酶在豬PK15細胞中異源表達及其酶學性質分析

莫健新，王豪強，黃廣燕，蔡更元,，吳珍芳,，張獻偉,

微生物源果膠酶在豬PK15細胞中異源表達及其酶學性質分析

莫健新1，王豪強2，黃廣燕2，蔡更元1,2，吳珍芳1,2，張獻偉1,2

1. 溫氏食品集團股份有限公司，新興 527400 2. 華南農業大學國家生豬種業工程技術研究中心，廣州 510642

果膠是植物細胞壁組分之一，是畜禽飼料中主要的抗營養因子，影響畜禽對日糧中能量和氮的利用效率。果膠酶在自然界中廣泛存在于細菌、酵母和絲狀真菌等微生物中，對解除果膠的抗營養作用、提高飼料利用率具有良好的效果。為了探索在豬細胞中表達微生物源果膠酶基因的可行性，本研究通過脂質體轉染法將微生物源果膠酶基因、、和導入豬PK15細胞中進行異源表達，利用3,5-二硝基水楊酸(3,5-dinitrosalicylic acid, DNS)法測定這4種基因編碼果膠酶的酶活力。結果顯示，4種果膠酶基因均能在豬PK15細胞中轉錄出mRNA，但只有和適應豬細胞表達系統。其中，果膠酶PG5A的最高酶活為0.95 U/mL，最適作用pH為pH4.0，在pH4.6~6.0范圍內維持46%以上的酶活；PGI在pH5.0處獲得最高酶活，為0.30 U/mL，在pH4.0~6.0范圍內維持35%以上的酶活。消化蛋白酶耐受實驗結果顯示，PG5A和PGI對胃蛋白酶和胰蛋白酶均有較強的耐受能力，用1 mg/mL的豬胃蛋白酶處理2 h后，PG5A和PGI的剩余酶活分別為76%和71%；用1 mg/mL的豬胰蛋白酶處理2 h后，PG5A和PGI的剩余酶活分別為44%和93%。綜上所述，果膠酶基因和能在豬細胞中正常表達，其編碼的果膠酶對豬消化道pH條件和消化蛋白酶具有較強的耐受能力，可作為制備轉果膠酶基因豬的候選基因。

果膠酶；果膠；抗營養因子；……