老年急性髓性白血病染色體核型和熒光原位雜交研究

余蕙君

（南方醫(yī)科大學(xué)深圳醫(yī)院 廣東 深圳 518110）

急性髓性白血病常發(fā)生在中老年階段，屬于異質(zhì)性較強(qiáng)的血液惡性腫瘤疾病，近年來(lái)隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，造血干細(xì)胞移植應(yīng)用、方案優(yōu)化、新的化療方案進(jìn)一步推廣，近期療效有所改善，但遠(yuǎn)期療效仍然較差，隨著深入探索[1]，可發(fā)現(xiàn)除了本身的年齡因素影響外，疾病本身細(xì)胞遺傳學(xué)異常及基因改變對(duì)臨床治療效果起著重要作用，對(duì)此還需進(jìn)一步探索細(xì)胞遺傳學(xué)和基因突變特性，從而更好理解急性髓性白血病發(fā)病原因，本文主要針對(duì)AML的細(xì)胞遺傳學(xué)異常發(fā)生率與年齡組的相關(guān)性，如下文報(bào)道。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對(duì)象為301例急性髓性白血病患者，平均年齡（66.89±3.41）歲，男性189例，女性112例；FAB分型：7例為AML-M6型，127例為AML-M5型，54例為AML-M4型，11例為AML-M3型，94例為AML-M2型，5例為AML-M1型，3例為AML-M0型。

1.2 方法

細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析：常規(guī)骨髓涂片，細(xì)胞化學(xué)染色。

細(xì)胞遺傳學(xué)分析：（1）染色體核型分析：取患者骨髓標(biāo)本，每份標(biāo)本分別用小牛血清和自體血漿經(jīng)本室常規(guī)短期培養(yǎng)，秋水仙堿阻滯細(xì)胞停留在細(xì)胞分裂中期，使用氯化鉀低滲，經(jīng)固定后制片，胰蛋白酶處理G顯帶法。運(yùn)用德國(guó)ZISS公司生產(chǎn)的染色體全自動(dòng)掃描分析系統(tǒng)掃描采集中期細(xì)胞圖像，配套軟件分析，核型命名和報(bào)告解讀遵照《人類細(xì)胞基因組學(xué)國(guó)際命名體系，ISCN2016》。（2）FISH分析：取G顯帶細(xì)胞懸液制備FISH標(biāo)本，根據(jù)臨床及實(shí)驗(yàn)室特征提示選取探針，探針及試劑購(gòu)于美國(guó)Vysis公司，選擇AMLI/ETO、PML/RARa雙色雙融合探針，MLL、CBFβ斷裂分離探針等，標(biāo)本經(jīng)預(yù)處理、變性、雜交、清洗復(fù)染等環(huán)節(jié)，具體操作步驟參照試劑說(shuō)明書及本室規(guī)范進(jìn)行。OlympusBX熒光顯微鏡在三色濾光鏡激發(fā)下觀察間期細(xì)胞熒光雜交信號(hào)并采集圖像，結(jié)果判讀遵照《人類細(xì)胞基因組學(xué)國(guó)際命名體系，ISCN2016》。

1.3 觀察指標(biāo)

分析核型分類受年齡組的影響。

分析染色體異常率。

分析FISH檢測(cè)陽(yáng)性病例的實(shí)驗(yàn)室資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS19.0軟件處理本次統(tǒng)計(jì)值差，當(dāng)P＜0.05，代表存在差異性。

2.結(jié)果

≥61歲患者復(fù)雜核型、單體型核型高于40～60歲患者（P＜0.01）。見表1、表2。

表1 年齡組復(fù)雜染色體核型分布[n（%）]

表2 年齡組單體型核型分布[n（%）]

301例患者，經(jīng)FISH檢測(cè)到10例核型正常而FISH陽(yáng)性病例，見表3。

表3 分析FISH檢測(cè)陽(yáng)性病例的實(shí)驗(yàn)室資料

3.討論

急性髓性白血病患者治療效果主要影響因素之一為分子生物學(xué)特征和細(xì)胞遺傳學(xué)特征，不同年齡段和亞型的急性髓性白血病患者存在不同的分子生物學(xué)特征和細(xì)胞遺傳學(xué)特征[2]，與年輕患者相比，老年人群除了與臟器機(jī)能差、抵抗力差因素外，還可受到分子生物學(xué)異常和細(xì)胞遺傳學(xué)異常影響[3]。

在研究統(tǒng)計(jì)中，最早發(fā)現(xiàn)的不良核型之一為復(fù)雜核型，發(fā)病率可隨著年齡的增長(zhǎng)而增高，而常染色體單體核型與復(fù)雜核型患者治療效果相比，預(yù)后性更差，屬于一種不良預(yù)后的核型，主要是指1條常染色體單體伴有其他染色體結(jié)構(gòu)異常或≥2條常染色體單體[4]，在研究結(jié)果中證實(shí)，年齡越高，核型發(fā)病率越呈上升趨勢(shì)。除此之外，急性髓系白血病預(yù)后、發(fā)展、發(fā)生與染色體核型異常有關(guān)外，與基因突變也存在相關(guān)性，CBFβ/MYHⅡ是急性髓系白血病患者常見Ⅱ類突變；PML/RARα編碼的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對(duì)粒細(xì)胞發(fā)育、發(fā)生具有明顯作用；AML1/ETO突發(fā)率能夠通過(guò)調(diào)控基因甲基化狀態(tài)而調(diào)控細(xì)胞的增殖[5]。

綜上，急性髓性白血病患者存在不同特點(diǎn)的染色體核型，且老年患者細(xì)胞遺傳學(xué)異常發(fā)生率存在一定差異性，對(duì)日后診療具有一定意義。