某區(qū)120例男性不育患者的細胞遺傳學分析

鄢 磊* 張雪瑞 曹東華

（1 大連市婦幼保健院遺傳代謝實驗中心，遼寧 大連 116001；2 大連市婦幼保健院遺傳代謝中心，遼寧 大連 116001）

近來隨人們社會壓力、環(huán)境污染及食品安全等多方面影響，使不孕不育的患者病發(fā)率呈大幅度的上升趨勢。給生殖醫(yī)學健康帶來許多問題。性染色體數目或結構異常可引起性器官結構或功能異常，可引發(fā)性器官發(fā)育不全，染色體病患的主要臨床特征一般發(fā)生病患的本身帶有先天性多發(fā)畸形，智力發(fā)育和生長發(fā)育都比較遲緩，還存在特殊性的改變皮膚紋理；內外生殖器存在異常或畸形例如性腺的不良發(fā)育，第二特征不發(fā)育等[1-2]。不育癥作為全世界主要的一個醫(yī)學社會問題，在育齡階段約8%夫婦患不育病，但約多由男性因素引發(fā)。無精子癥作為男性不育首因。男性不育影響因素之一為生精障礙，臨床表現有無精子、嚴重少精子、弱精子。致男性不育原因很多，目前細胞遺傳學研究顯示染色體異常作為不孕不育的一個首要因素。在男性不育患者中病發(fā)率較高，據世界衛(wèi)生統(tǒng)計，已婚夫婦不育不孕癥占比達10%～15%，其中染色體異常率可以達到3.5%左右，逐年呈上升趨勢。目前治療染色體異常病尚未存在有效防治手段，且遺傳因素致男性不育臨床就診除做免疫、內分泌及必要的常規(guī)檢查外，染色體相關檢查具有十分必要性，明確病因做好優(yōu)生及遺傳咨詢工作[3]。有效避免患者盲目治療，對指導患者選取可行的臨床輔助手段解決生育問題，預防染色體異常患兒出生，有助于促進指導人們優(yōu)生優(yōu)育，大大提高生殖健康水平。

隨科學技術領域不斷大力發(fā)展，人工授精、卵細胞胞質內單精子注射技術、胚胎移植等輔助生殖技術可有利于解決男性不育問題。男性生殖主要在中樞神經系統(tǒng)、下丘腦、垂體、睪丸性軸系內分泌激素調節(jié)，經精子發(fā)生、精子成熟、精子運輸、精子獲能和精子頂體反應等發(fā)生系列生理活動。精子發(fā)生因受諸多有序表達基因控制，染色體的結構、數目畸變對這些基因功能造成影響。對嚴重少或弱精子癥、無精子癥者常規(guī)行染色體核型分析有助于臨床診斷與處理。對男性不育患者進行細胞遺傳學分析明確不育病因，并運用輔助生殖術為男性不育提供遺傳學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料：在2014年～2017年末入我院的大連生殖醫(yī)學中心不孕不育優(yōu)生遺傳咨詢門診就診的不孕不育120例，不育男性患者作為本次的研究對象，均為在婚后未采取任何的避孕措施手段導致發(fā)生不孕或不育病患，年齡在23～41歲，平均年齡為（27±4.6）歲，不育時程最短為2年，最長達8年。均按WHO國際標準行CASA計算機輔助的精液分析檢查后確診，其精液檢查結果顯示其中存在無精子者45例，嚴重少、弱精子75例。所有患者均以排除生殖道梗阻發(fā)生可能性，精索靜脈曲張、附睪損傷、阻塞性無精癥、生殖道感染、內分泌失調等因素致不育患者。經AZF基因檢測AZFa微缺失4例，AZFb微缺失1例為Klinefelter綜合征患者。配偶方也進行相關生殖檢查均顯示正常。

1.2 方法：主要通過染色體制備-外周血淋巴細胞培養(yǎng)及細胞遺傳學檢查進行分析。采用常規(guī)方法抽取患者外周靜脈血對其進行外周血淋巴細胞培養(yǎng)，細胞遺傳檢查處于無菌條件下取其外周血1.5 mL，肝素抗凝，用肝素抗凝的外周血培養(yǎng)淋巴細胞72 h，接種于5 mL的1640培養(yǎng)基中，37 ℃常規(guī)行淋巴細胞培養(yǎng)72 h。在終止培養(yǎng)前1.5～2 h加入收獲前1.5 h加秋水仙素0.1 mL，促進細胞分裂終止在中期，收集細胞。首先行染色體標本制備制片，G顯帶染色體進行核型分析（對某特殊核型需加做C顯帶）。在cytovision下計數15個核型，分析3～5個核型，數目異常核型計數100個，G顯帶合并C顯帶按“人類細胞學命名國際體制”予以染色體核型分析[3-4]。

2 結 果

從分析結果可知在120例檢查者中經細胞遺傳檢查總共檢出性染色異常的核型有28例，經計算異常發(fā)生率為23.3%（28/120），在發(fā)生性染色體異常核型中有18例屬于數目異常，占性染色異常核型的15%；可知主要為性染色體異常。

表1 男性性染色體異常核型

3 討 論

染色體為基因的一種遺傳物質載體，也在遺傳性病中作為一個重要組成部分，染色體數目異常及結構發(fā)生畸變均會導致不同的遺傳效應，其發(fā)生病種中主要含常染色體異常、性染色體疾病及染色體多態(tài)性均是造成染色體病形成的根本原因。染色體異常控制機體性狀的各類基因極易造成基因異常使得其基因發(fā)生缺失、增加或其他方面的一些改變，最后對身體正常發(fā)揮功能造成一定影響，使其發(fā)生遺傳性病，而染色體性相關病患也會存在較嚴重或明顯的臨床癥狀。有報道稱Y染色體在體內大約的長度為60 Mb。一般由染色體兩端部的擬常染色體區(qū)和男性特異性區(qū)域。在本次研究中顯示Y染色體的異常主要是結構和數目異常。數目異常狀態(tài)主要包括無精子，精子少導致不育等癥狀[5]。染色體異常引發(fā)男性不育使用藥物治療無效，早期確診可有效避免盲目求治，減輕負擔及社會醫(yī)療壓力，因此，對患者進行染色體檢查具有重要的臨床價值。

本文研究結果顯示染色體異常作為男性不育的首因。染色體畸變發(fā)生易致性器官發(fā)育不良及不良孕產間粗存在一定密切相關性。針對此類病患，不僅要從傳統(tǒng)上行常規(guī)醫(yī)院檢查，且還需在臨床上進行細胞遺傳學檢查。因此，為明確遺傳學診斷有效避免盲目性采取治療措施，為更好的指導其采取輔助手段解決不育不育難題。