兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶-MB及心肌肌鈣蛋白I的比較實(shí)驗(yàn)研究

田剛　丁俊杰　劉靳波　吳堂明　李光榮

【摘要】 目的：探討兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清肌紅蛋白（Myo）、肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）及心肌肌鈣蛋白I（cTnI）結(jié)果的可比性。方法：依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP9-A3文件，收集西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院臨床血清樣品50例，采用西門子化學(xué)發(fā)光儀（ADVIA Centaur? XP）和三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光儀（SLXP-002）同時(shí)測(cè)定血清中Myo、CK-MB和cTnI的濃度并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI濃度的相關(guān)系數(shù)分別為0.980、0.997和0.984（P<0.05）。陽(yáng)性符合率分別為93.3%、88.9%、100%，陰性符合率分別為97.2%、97.6%、97.5%。兩種方法一致性檢驗(yàn)的Kappa值分別為Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB（K=0.864，P=9.78×10-10）、cTnI（K=0.940，P=2.79×10-11）。Myo和CK-MB在醫(yī)學(xué)決定水平5 ng/ml和72.0 ng/ml的偏倚分別為8.61%和8.14%。結(jié)論：三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光法與西門子化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI的結(jié)果有較好的相關(guān)性和一致性，可用于臨床血清Myo、CK-MB和cTnI的檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】 肌紅蛋白; 肌酸激酶同工酶-MB; 心肌肌鈣蛋白I; 評(píng)價(jià)研究

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.16.031 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2019）16-00-03

【Abstract】 Objective：To evaluate the comparability of two test systems for serum myoglobin（Myo），creatine kinase isoenzyme-MB（CK-MB） and cardiac troponin I（cTnI） detection.Method：A total of 50 serum samples from the Affiliated Hospital of the Southwest Medical University were collected according to the Clinical and Laboratory Standard Institute（CLSI） document EP9-A3，and measured both by the SIEMENS chemiluminescence analyzer（ADVIA Centaur? XP） and the Sanlant micro-array chemiluminescence instrument.The test results of serum samples were analyzed with statistical tools.Result：There were significant relationship of these two test systems for serum Myo（r=0.980，P<0.05），CK-MB （r=0.997，P<0.05） and cTnI（r=0.984，P<0.05） concentrations.The positive coincidence rate of these two test systems were 93.3%，88.9%，and 100%，and the negative coincidence rate were 97.2%，97.6%，and 97.5%，respectively.The Kappa analysis revealed a significant consistency of the two methods for serum Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB （K=0.864，P=9.78×10-10） and cTnI （K=0.940，P=2.79×10-11） detection，respectively.The bias of Myo and CK-MB were 8.61% and 8.14% at the medical determination levels of 5.0 ng/ml and?72.0 ng/ml in serum.Conclusion：Serum Myo，CK-MB and cTnI concentrations detected by the Sanlant micro-array chemiluminescence instrument showed a good correlation and consistency with the SIEMENS chemiluminescence analyzer.The Sanlant micro-array chemiluminescence instrument is suitable for serum Myo，CK-MB and cTnI measurement.

【Key words】 Myoglobin; Creatine kinase isoenzyme-MB; Cardiac troponin I; Evaluation study

First-authors address：The Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Luzhou 646000，China

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠狀動(dòng)脈病變后血供急劇減少或中斷，心肌嚴(yán)重、持久缺血導(dǎo)致的急性心肌壞死[1]。AMI嚴(yán)重威脅患者生命，早期診斷、及時(shí)治療是降低患者死亡率和改善預(yù)后的關(guān)鍵[2]。肌紅蛋白（myoglobin，Myo）、肌酸激酶同工酶-MB（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）和心肌肌鈣蛋白I/T（cardiac troponin I/T，cTnI/cTnT）是臨床常用的心肌損傷標(biāo)志物，在AMI的臨床診斷、療效評(píng)估和并發(fā)癥的鑒別診斷中具有重要作用[3-4]。目前，臨床檢測(cè)血清Myo、CK-MB、cTnI和cTnT多采用進(jìn)口儀器和配套試劑，成本均較高。為積極響應(yīng)國(guó)家對(duì)國(guó)產(chǎn)儀器的研發(fā)、轉(zhuǎn)化與應(yīng)用，擴(kuò)大國(guó)產(chǎn)科學(xué)儀器的市場(chǎng)占有率[5]。本研究以西門子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)為參照，首次評(píng)估三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)和西門子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI的準(zhǔn)確性和一致性，為國(guó)產(chǎn)儀器、試劑和新方法的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在醫(yī)院2018年3月臨床血清樣本共50份。在檢測(cè)系統(tǒng)室內(nèi)質(zhì)控在控下，依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A3文件的要求[6]，采用待評(píng)估系統(tǒng)和參比系統(tǒng)同時(shí)測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI水平。本研究均采用患者檢測(cè)后剩余血清，僅用于結(jié)果比較，對(duì)患者無任何損害和潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此，本研究參照“體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則”中“客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床研究對(duì)受試者幾乎沒有風(fēng)險(xiǎn)，可不提交倫理委員會(huì)的審評(píng)意見及受試者的知情同意書”進(jìn)行[7-8]。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 采用西門子ADVIA Centaur? XP化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)及其配套試劑為參比系統(tǒng)，江蘇三聯(lián)生物全自動(dòng)生物芯片分析儀（微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法）及配套試劑為待評(píng)估系統(tǒng)。

1.2.2 檢測(cè)方法 分別采用兩套系統(tǒng)對(duì)50份血清樣本進(jìn)行檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，由于兩類儀器的測(cè)定原理不完全相同，采用Pearson相關(guān)性分析數(shù)據(jù)，若相關(guān)系數(shù)r≥0.975（r2≥0.95）且P<0.05，認(rèn)為兩種方法相關(guān)性良好[9]。采用字2檢驗(yàn)計(jì)算兩類方法的一致性，若Kappa系數(shù)（K）>0.75，認(rèn)為兩類方法的一致性較好。西門子檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清CK-MB、Myo和cTnI濃度的臨界值（cutoff值）分別為5.0 ng/ml、72.0 ng/ml和0.06 ng/ml。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)性和回歸分析

以參比系統(tǒng)為x，待評(píng)估系統(tǒng)為y，進(jìn)行回歸分析。血清Myo的回歸方程為y=0.962x-3.467（r=0.980，P<0.05）;血清CK-MB的回歸方程為y=1.050x+0.157（r=0.997，P<0.05）;血清cTnI的回歸方程為y=0.957x+0.110（r=0.984，P<0.05），均呈顯著正相關(guān)，見圖1～圖3。

2.2 陽(yáng)性和陰性符合率分析

以西門子化學(xué)發(fā)光法為參照，三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定臨床樣本血清Myo、CK-MB和cTnI。在CK-MB、Myo和cTnI濃度的臨界值分別為5 ng/ml，72.0 ng/ml和0.06 ng/ml時(shí)陽(yáng)性符合率分別為93.3%、88.9%、100%，陰性符合率分別為97.2%、97.6%、97.5%。

2.3 兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI結(jié)果的一致性

對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行字2檢驗(yàn)并計(jì)算K值，兩種檢測(cè)系統(tǒng)一致性檢驗(yàn)的K值分別為Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB （K=0.864，P=9.78×10-10） and cTnI （K=0.940，P=2.79×10-11），K均>0.75，兩種方法的一致性良好。

2.4 兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清Myo、CK-MB和cTnI醫(yī)學(xué)決定水平處偏倚比較

將Myo和CK-MB在醫(yī)學(xué)決定水平處的濃度72.0 ng/ml、5 ng/ml分別帶入線性回歸方程y=0.962x-3.467和y=1.050x+0.157，Myo和CK-MB在醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚分別為8.61%和8.14%，均小于1/2允許總誤差（15.0%）。由于西門子檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定超敏cTnI而三聯(lián)生物測(cè)定cTnI，故未比較cTnI醫(yī)學(xué)決定水平的偏倚。

3 討論

血清Myo、CK-MB和cTnI是美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)和歐洲心臟病學(xué)會(huì)推薦的AMI血清標(biāo)志物[10]。Myo在AMI發(fā)作后約2 h開始增高，6～9 h達(dá)到高峰，24～36 h恢復(fù)至正常水平[11]。因此，若血清Myo水平在患者胸痛發(fā)作12 h內(nèi)在仍正常，則可排除AMI。CK-MB是心肌能量的重要調(diào)節(jié)酶，在AMI后6～9 h，其診斷AMI的靈敏度高達(dá)97.0%[12]。cTnI在AMI發(fā)作4～10 h后開始增高，在12～48 h達(dá)到高峰，對(duì)AMI的診斷特異性高達(dá)100.0%[13]。本實(shí)驗(yàn)中三聯(lián)生物檢測(cè)系統(tǒng)中Myo、CK-MB和cTnI定量檢測(cè)試劑盒均采用微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析原理，以活化處理的硬基質(zhì)玻片為芯片基質(zhì)，通過特殊處理將單克隆抗體固定在基質(zhì)玻片上捕獲待測(cè)抗原，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體形成雙抗夾心結(jié)構(gòu)，最后加入發(fā)光檢測(cè)液酶促化學(xué)發(fā)光。因此，該方法為酶促間接化學(xué)發(fā)光，具有檢測(cè)方式簡(jiǎn)單，成本較低等優(yōu)點(diǎn)。西門子ADVIA Centaur? XP則采用納米超順磁珠包被載體，利用吖啶酯標(biāo)記抗體結(jié)合待測(cè)抗原形成復(fù)合物，該復(fù)合物在含H2O2和NaOH的強(qiáng)堿性環(huán)境下吖啶酯分解發(fā)光。該為直接化學(xué)發(fā)光法，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定。本研究結(jié)果表明，與西門子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)相比，三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)具有很高的一致性（K>0.75），陽(yáng)性符合率均>88.0%，陰性符合率均>93.0%，且測(cè)定結(jié)果均顯著正相關(guān)（r>0.975）。該結(jié)果表明，兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定Myo和CK-MB有較好的相關(guān)性和一致性。三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)與西門子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)有較好的臨床適用性，有助于AMI的早期診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估。

由于兩種系統(tǒng)檢測(cè)原理不完全不同，西門子直接化學(xué)發(fā)光法靈敏高，能檢測(cè)超敏cTnI而酶促間接化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清總cTnI。因此，本研究未采用CLSI EP9-A3文件對(duì)西門子血清cTnI醫(yī)學(xué)決定水平處回歸方程的偏倚進(jìn)行評(píng)估。兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清cTnI具有很好的相關(guān)性，陽(yáng)性符合率和陰性符合率均較高。因此，若采用三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)對(duì)臨床血清cTnI進(jìn)行分析需建立正常人群的參考區(qū)間并獲取該方法大樣本血清cTnI的醫(yī)學(xué)決定水平，以便于對(duì)AMI進(jìn)行準(zhǔn)確診斷、治療藥物監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估。

綜上所述，三聯(lián)生物微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)與西門子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)有較好的相關(guān)性、陽(yáng)性符合率、陰性符合率和一致性，且儀器和試劑成本低，可用于臨床血清Myo、CK-MB和cTnI的快速定量分析。

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（收稿日期：2019-01-07） （本文編輯：郎序瑩）