三陰性乳腺癌組織中P53、Ki67、CK5/6表達分析

韓潔潔，韓麗麗，楊偉偉，王玉治

(1德州市第二人民醫院，山東德州253000；2德州市人民醫院)

乳腺癌發病率呈逐年上升趨勢且發病年齡越來越年輕化[1]。乳腺癌是具有異質性的腫瘤，其中三陰性乳腺癌(TNBC)是其一種特殊亞型，其特點是雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長因子受體2(Her-2)三者均為陰性。TNBC患者的臨床治療方案與非三陰性乳腺癌(NTNBC)患者相比較為單一，針對ER、PR的內分泌治療及Herceptin靶向治療效果均不佳。因此，尋找能夠篩選高危人群、評估患者預后及指導治療的標志物對TNBC的防治具有十分重要的意義。P53是目前已知的腫瘤抑制基因之一，與人類腫瘤發病相關性較高。Ki67是細胞增殖活性標志物，可反映細胞的增殖及分裂能力。CK5/6特異表達于導管上皮的基底層細胞，是基底樣型乳腺癌的免疫組化標志物之一[2]。本研究觀察了TNBC組織中P53、Ki67、CK5/6的表達變化，分析三者與TNBC臨床病理參數的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2015年1月～2018年10月在德州市第二人民醫院就診的乳腺癌患者469例，選擇TNBC患者納入TNBC組。TNBC組病例納入標準：①有完整的臨床病理資料；②手術前均未接受新輔助化療、內分泌治療和放療等治療；③病例均為沒有家族史的女性患者，未合并有其他部位惡性腫瘤；④患者采用術式為乳腺癌改良根治術或乳腺癌根治術或保乳手術+腋下淋巴結清掃術，術后病理腋下淋巴結的檢出數目不少于15個。共有52例患者納入TNBC組，年齡28～78歲、中位年齡42歲；未絕經35例、絕經17例；腫瘤直徑≤2 cm 20例、2～5 cm 22例、≥5 cm 10例；組織學分級Ⅰ級4例、Ⅱ級34例、Ⅲ級14例；臨床分期0～Ⅰ期7例、Ⅱ期32例、Ⅲ～Ⅳ期13例；病理類型為浸潤性癌非特殊型33例、浸潤性小葉癌12例、乳腺導管內癌3例、伴有髓樣癌特征的浸潤性癌4例；無淋巴結轉移34例、有淋巴結轉移18例。選擇100例NTNBC患者納入NTNBC組，年齡32～72歲、中位年齡48歲；未絕經65例、絕經35例；腫瘤直徑≤2 cm 30例、2～5 cm 64例、≥5 cm 6例；組織學分級Ⅰ級12例、Ⅱ級80例、Ⅲ級8例；臨床分期0～Ⅰ期12例、Ⅱ期76例、Ⅲ～Ⅳ期12例；病理類型為浸潤性癌非特殊型63例、浸潤性小葉癌22例、乳腺導管內癌8例、伴有髓樣癌特征的浸潤性癌7例；無淋巴結轉移62例、有淋巴結轉移38例。兩組一般資料具有可比性?；颊呒捌浼覍倬鶎Ρ狙芯恐橥?。本研究獲德州市第二人民醫院倫理委員會批準。

1.2 P53、Ki67、CK5/6檢測 將兩組患者手術標本經4%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規切片。采用免疫組織化學SP法檢測乳腺癌組織中的P53、Ki67、CK5/6。陰性對照用蒸餾水代替一抗，實驗時用已知明確的陽性切片作為陽性對照，具體操作步驟按照試劑說明書進行。P53陽性細胞為細胞核著色，呈棕黃色顆粒。陽性細胞百分比<10%為P53陰性，陽性細胞百分比>10%為P53陽性。Ki67定位于細胞核，陽性細胞為細胞核著色呈棕黃色顆粒者。低倍顯微鏡(100×)下選取5～10個熱點區域，轉入高倍鏡(400×)，取10個高倍鏡視野，計算高倍視野中陽性細胞百分比。陽性細胞百分比<20%為Ki67低表達、判定為陰性，≥20%為Ki67高表達、判定為陽性。CK5/6定位于細胞質，陽性細胞為細胞質有棕黃色顆粒者。陽性細胞百分比<10%為CK5/6陰性，>10%為CK5/6陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman等級相關分析法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組P53、Ki67、CK5/6表達比較 TNBC組P53、Ki67、CK5/6陽性表達率分別為67.3%(35/52)、76.9%(40/52)、71.2%(37/52)，NTNBC組P53、Ki67、CK5/6陽性表達率分別為45.0%(45/100)、58.0%(58/100)、8.0%(8/100)。TNBC組織中P53、Ki67、CK5/6陽性表達率高于NTNBC組(P均<0.05)。

2.2 P53、Ki67、CK5/6的表達與TNBC臨床病理參數的關系 P53在TNBC中的表達與患者年齡、月經狀態、組織學分級和淋巴結轉移情況有關(P<0.05)。Ki67在TNBC中的表達與組織學分級和臨床分期有關(P均<0.05)。CK5/6在TNBC中的表達與腫瘤直徑、患者年齡、月經狀態、組織學分級、淋巴結轉移情況和臨床分期均無相關性(P均>0.05)。見表1。

表1 P53、Ki67、CK5/6表達與TNBC臨床病理參數的關系

2.3 P53、Ki67 和CK5/6在TNBC組織中表達的相關性 TNBC組織中，P53表達與Ki67、CK5/6表達均呈正相關(r分別為0.299、0.280，P分別為0.031、0.043)；Ki67表達與CK5/6表達呈正相關(r=0.356，P=0.01)。

3 討論

TNBC占乳腺癌的15%～25%[3]，是一種特殊的乳腺癌亞型。相對于NTNBC，TNBC病理形態上細胞異型性較大，分化程度較低，生物學行為上細胞增殖更快，常伴有腫瘤壞死，并早期可出現轉移，傳統內分泌治療效果不佳，且缺乏針對Her-2的特異性靶向治療，患者臨床預后差[4]。

TNBC的發生發展是一個受到多種因素調節的復雜過程，與原癌基因激活及抑癌基因失活密切相關[5]。P53基因位于人染色體17P13.1，是目前研究最多的抑癌基因之一，其重要作用主要表現在維持細胞基因組完整性、修復損傷DNA片段和調節細胞周期方面[6]。正常的P53表達產物半衰期較短，不易被檢測到，其作用是抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡；當P53發生突變后，表達產物的半衰期延長，可以被檢測到。突變后的P53不僅失去了抑癌功能，還可誘導正常細胞向腫瘤細胞轉化，同時阻礙未發生突變的野生型P53的抑癌作用，最終促進腫瘤的發生、進展[7]。突變型P53基因在乳腺癌發生、發展及預后評估中起重要作用，是乳腺癌重要的預后標志物和預測因子[8,9]。本研究中P53蛋白在TNBC組陽性表達率高于NTNBC組，與國內相關研究[5]結果一致。P53在TNBC中的表達與患者年齡、月經狀態、組織學分級和淋巴結轉移情況有關，說明P53表達陽性的TNBC腫瘤細胞分化程度較差，侵襲能力較強，容易復發和轉移。

Ki67在具有增殖活性的細胞核中表達，其功能與有絲分裂密切相關，能夠比較準確地反映細胞增殖狀態，是一種最理想的也是應用最廣泛的增殖細胞標志物之一。Ki67可以識別除G0期以外的G1期、S期、G2期和M期的細胞，其在低轉化性的或非增生性的組織細胞中幾乎無表達，在良性腫瘤病變中低表達，在惡性腫瘤中高表達。研究表明，Ki67與多種惡性腫瘤發生、發展及轉歸有關[10～12]。本研究結果顯示，TNBC組Ki67陽性表達率76.9%，低于國內雷珍等[13]的報道，可能是Ki67的分組標準不同所致。Ki67表達隨組織學分級和臨床分期增高而增高，Ki67高表達提示TNBC預后不良。

CK5/6屬于細胞角蛋白家族中的一員，主要表達于上皮組織的基底細胞層。乳腺導管由腺上皮細胞、基底細胞和肌上皮細胞組成。CK5/6被證實是乳腺基底細胞特異表達的CK，也是識別基底細胞樣乳腺癌的重要分子標志物，并且可能是TNBC預后的獨立影響因素[14]。研究發現，導管原位癌細胞中可表達CK5/6，表現出與基底細胞樣乳腺癌相關的特性，提示CK5/6表達變化是乳腺癌發展的早期事件，從疾病一開始就確定了基底樣乳腺癌的臨床病理特征[15]。本研究中，CK5/6在TNBC組陽性表達率為71.2%，高于江科等[16]研究得出的63.8%，可能與本研究樣本量較少有關。TNBC組CK5/6陽性表達率高于NTNBC組，且CK5/6在TNBC中的表達與腫瘤直徑、患者年齡、月經狀態、組織學分級、淋巴結轉移情況和臨床分期均無相關性，與國內畢曉峰等[17]研究結果一致。上述結果提示,CK5/6的表達反映了腫瘤細胞的起源，CK5/6陽性的腫瘤細胞來源于乳腺導管的基底細胞，而非腺上皮細胞，其起源是不隨腫瘤自身進展而改變的。本研究通過Spearman相關分析，發現P53的表達與Ki67、CK5/6呈正相關，Ki67的表達與CK5/6呈正相關，提示乳腺導管的基底細胞在向成熟細胞轉化過程中可能受到突變P53的誘導，未能轉化成正常細胞而轉化成為腫瘤細胞，并使得腫瘤細胞的增殖活性明顯增強。

綜上所述，P53、Ki67、CK5/6在TNBC組織中的表達均高于NTNBC組織，三者在TNBC發生發展過程中可能存在一定相互作用。P53、Ki67高表達與TNBC的進展有關。