木香烴內(nèi)酯通過抑制NLRP3緩解LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)

吳曉燕 厲 星

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院下沙院區(qū)藥學(xué)部，杭州310018)

膿毒癥是機(jī)體對感染的反應(yīng)失調(diào)而引起的危及生命的器官功能障礙，常并發(fā)于感染、休克、大手術(shù)、燒/創(chuàng)傷、缺血-再灌注損傷等臨床極危重患者[1]。脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的重要成分，也是細(xì)菌分泌的內(nèi)毒素[2]。在膿毒血癥中，LPS起著重要的作用，它可激活多條信號通路，引起細(xì)胞功能紊亂，從而導(dǎo)致細(xì)胞壞死、凋亡[1,2]。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體[Nucleo-tide binding oligomerization domain(NOD)-like rece-ptors，NLR]是一類重要的細(xì)胞內(nèi)模式識別受體[3]。它可感受細(xì)胞內(nèi)感染性及非感染性信號的刺激，部分NLR被激活后可形成巨大的蛋白復(fù)合體即炎性小體(Inflammasome)[3]。炎性小體是一種多蛋白復(fù)合體，主要分為4種，即NLRP1、NLRP3、NLRP4和AIM2[3]。近年來國內(nèi)外研究者發(fā)現(xiàn)NLRP3炎性小體形成后進(jìn)一步活化MAPK炎癥信號通路，進(jìn)而激活NF-κB，產(chǎn)生TNF-α、IL-6和IL-1β等細(xì)胞因子[4,5]。木香烴內(nèi)酯(Costunolide，Cos)是一種倍半萜類化合物，主要來源于中藥木香等。近年研究報道Cos具有顯著的抗炎、保肝活性和清除活性氧自由基的作用[6-8]，但對于Cos抑制NLRP3炎性小體的激活來緩解炎癥反應(yīng)的研究鮮少。本研究以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為對象，研究Cos對LPS誘導(dǎo)細(xì)胞炎性小體激活及細(xì)胞炎癥的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步探討Cos抑制炎癥的分子機(jī)制，為臨床運(yùn)用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1材料

1.1.1細(xì)胞 原代小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，提取自C57BL/6小鼠腹腔。C57BL/6小鼠(雄性，體重18～22 g)購自上海斯萊克動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK(滬)2017-0005。

1.1.2藥物與試劑 木香烴內(nèi)酯、MCC950購自美國selleck公司； 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗體兔IgG/鼠IgG、p-ERk鼠單克隆抗體、ERK鼠多克隆抗體、p-IκB兔單克隆抗體、IkB鼠單克隆抗體購自美國Santa Cruz；……