IDH1單克隆抗體的制備及表位鑒定和雙抗體夾心ELISA的建立

杜曉娟 孟 麟 孫天一 壽成超

(北京大學臨床腫瘤學院，北京大學腫瘤醫院暨北京市腫瘤防治研究所，生物化學與分子生物學研究室，惡性腫瘤發病機制及轉化研究教育部重點實驗室，北京100142)

肺癌一直以來都是我國乃至全世界發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，其中非小細胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma，NSCLC)占所有類型肺癌的85%，且多數患者確診時已為晚期肺癌[1，2]。近年研究發現，異檸檬酸脫氫酶1(Isocitrate dehydrogenases 1，IDH1)在NSCLC 患者血漿中表達明顯上調，有望成為一種新的肺癌外周血標志物[3]。IDH1是一種由人類2號染色體上IDH1 基因編碼的酶，定位于細胞質、過氧化物酶體和內質網[4,5]。IDH1不僅參與葡萄糖代謝，催化異檸檬酸的可逆氧化脫羧，產生還原的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和α-酮戊二酸，也間接參與脂質代謝，減輕氧化損傷以及葡萄糖誘導的胰島素分泌的調節[4-9]。IDH1的高表達及突變促使腦膠質瘤的發生發展、急性髓性白血病顯著的表觀遺傳變化以及轉移性黑色素瘤的發生；敲低IDH1或應用IDH1突變體抑制劑之后，增加胰腺癌對多西環素的敏感性，增強DNA損傷修復能力，激活c-Jun 氨基端激酶信號途徑并促進神經生長因子誘導的神經細胞凋亡[10-15]。

為實現對外周血中IDH1的檢測，本課題組應用雜交瘤技術制備獲得了8株高特異性、高親和力的抗IDH1單克隆抗體，并對其識別的抗原表位進行鑒定，確定各株單抗的表位分布，還初步建立雙抗體夾心ELISA以檢測游離的IDH1蛋白。

1 材料與方法

1.1材料 單克隆抗體的制備、純化和……