間質性肺病小鼠外周血循環纖維細胞的變化及依那西普的干預作用①

王慧選 殷寒秋 辜 沖 殷松樓

(徐州醫科大學，徐州221000)

間質性肺病(Interstitial lung disease,ILD)是一類主要累及肺泡腔和肺間質，以不同程度的肺泡炎癥和肺纖維化為病理特征的肺部疾病。約1/3的ILD患者繼發于結締組織疾病(Connective tissue disease，CTD)，ILD常導致肺功能降低和生活質量下降，5年生存率僅為20%，缺乏有效的治療方法[1]。已知肺成纖維細胞在ILD病理發生發展中有重要作用，循環纖維細胞(Circulating fibrocytes)是肺成纖維細胞的重要來源之一，可能參與了ILD的病理過程[2]。TNF-α是ILD發病的重要細胞因子，TNF-α拮抗劑依那西普在治療結締組織疾病中取得了較好的效果，但是，目前TNF-α拮抗劑對于結締組織疾病相關性間質性肺病(CTD-ILD)的治療效果尚存在較大爭議[3,4]。本實驗觀察在BLM誘導小鼠ILD的病理進程中的循環纖維細胞的數量變化，以及依那西普對ILD的干預效果及對循環纖維細胞數量的影響。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗材料 9～11周齡SPF級雌性昆明小鼠60只購于徐州醫科大學實驗動物中心，重量(20±0.93)g。飼養在室溫、相對濕度為(55±10)%的環境中,自主攝食和飲水。

1.1.2實驗試劑 博來霉素針劑為日本化藥株式會社生產，15 mg/支；依那西普為三生國健藥業(上海)股份有限公司生產，12.5 mg/支；固定與透膜試劑盒、Percp標記抗小鼠 CD45 購自BD公司；兔抗小鼠ColⅠ抗體購自Rockland 公司；FITC 標記的山羊抗兔IgG 購自上海貝博生物；兔抗小鼠α-SMA抗體購自艾博拉(上海)貿易有限公司；生物素-鏈霉卵白素免疫組化檢測試劑盒和DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司； Masson染色試劑盒和羥脯氨酸試劑盒購自南京建成生物工程研究所；……