臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外調(diào)節(jié)CD34+CD126-細(xì)胞向巨核系誘導(dǎo)的研究①

徐志國(guó) 陳義柱 施旭斌 汪 峰 楊旭巍 鈕移坤 任振輝 王擁軍 劉 超 孫 泉

(浙江省臍帶血造血干細(xì)胞庫(kù)，協(xié)和華東干細(xì)胞基因工程有限公司，湖州313001)

目前臨床上嚴(yán)重血小板減少患者主要的治療手段為輸注捐獻(xiàn)血小板，但血小板保存期短、貯存條件苛刻且輸注存在血液傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)等缺陷，制約了血小板的臨床應(yīng)用[1-3]。臍帶血作為除骨髓及外周血外，造血干細(xì)胞的又一豐富來(lái)源，擁有易于采集、免疫原性低且擴(kuò)增效率高等優(yōu)勢(shì)[4-7]。體外誘導(dǎo)臍帶血造血干細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化為拓寬血小板來(lái)源開(kāi)辟了新的研究思路。間充質(zhì)干細(xì)胞作為基質(zhì)細(xì)胞是造血微環(huán)境中重要的組成部分，具有支持造血與調(diào)控造血功能的重要作用。大量文獻(xiàn)表明，間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)旁分泌作用向造血微環(huán)境釋放刺激巨核細(xì)胞分化的TPO、IL-6等細(xì)胞因子。但也有研究者提出，間充質(zhì)干細(xì)胞具有維持造血干細(xì)胞“干性”的功能，能阻礙其分化成熟[8]。基于此，本研究選擇巨核細(xì)胞祖細(xì)胞CD34+CD126-細(xì)胞作為分化起始細(xì)胞，以臍血單個(gè)核細(xì)胞為對(duì)照，在細(xì)胞因子誘導(dǎo)向巨核細(xì)胞分化的基礎(chǔ)上，設(shè)置間充質(zhì)干細(xì)胞直接接觸與非直接接觸兩種實(shí)驗(yàn)條件，檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖、特異性標(biāo)志物表達(dá)及巨核細(xì)胞集落生成等結(jié)果，揭示CD34+CD126-細(xì)胞向巨核細(xì)胞誘導(dǎo)分化及間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)誘導(dǎo)過(guò)程的調(diào)節(jié)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑 淋巴細(xì)胞分離液 LymphoprepTM、細(xì)胞緩沖液EasySepTMBuffer、人造血祖細(xì)胞預(yù)富集混合物RosetteSepTMHuman Hematopoietic Progenitor Cell Enrichment Cocktail、人CD34陽(yáng)……