外源激素對灑金柏離體培養的影響

陳雪，孫麗娜，王媚，安冬，王淼，商超，吳春華

（大連市現代農業生產發展服務中心，遼寧大連 116030）

灑金柏（Sabina chinensis（ L.）Ant.cv.Aurea）為柏科側柏屬（Sambucus）多年生落葉灌木，是中國北方應用最廣、栽培觀賞歷史最久的園林樹種，其樹冠渾圓豐滿，酷似綠球，葉色金黃，仿佛金沙籠罩，夏綠冬青，不遮光線，不礙視野，尤其在雪中更顯生機。灑金柏配植于草坪、花壇、山石、林下，可增加綠化層次，豐富觀賞美感。隨著城市綠化的發展，對灑金柏苗木的需求日益增多，傳統的灑金柏扦插繁殖受時間限制，且易受病害侵染，降低了苗木生產能力。鑒于植物組織培養快繁技術趨于成熟[2]，其繁殖的速度快，且不受地區、氣候的影響，能夠及時提供大量優質種苗。目前我國灑金柏快速繁殖技術方面還處于空白階段，該試驗對灑金柏叢生芽誘導及增殖的激素配比進行篩選，旨在為灑金柏快速繁殖奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料。供試材料為1年生灑金柏，選取健壯、無病蟲害的嫩枝莖段為外植體。

1.2 方法

取灑金柏莖段2 cm，流水沖洗30 min。75%酒精浸泡外植體30 s，無菌水沖洗3次，再用5%NaClO浸泡外植體5 min，無菌水沖洗3次。外植體接種到不同激素配比的芽誘導培養基中。接種后置于培養室內光照培養，光照時間為10～12 h/d，光照強度為2 000 lx，培養室溫度（25±2）℃。

1.2.1 芽萌發誘導。每種處理接種30個外植體于芽萌發誘導培養基中，誘導培養基均以MS培養基為基本培養基（表1），培養35 d后，統計其萌芽率。

萌芽率 ＝（萌芽數/接種的外植體數）×100%成活率 ＝（成活數/萌芽數）×100%

表1 芽萌發誘導培養基激素水平

1.2.2 叢生芽誘導。經過芽萌發培養后，切取脫毒嫩芽，接種到叢生芽誘導培養基，誘導培養基均以MS培養基為基本培養基（表2）。每種處理接種10個外植體；35 d后統計其平均株高、平均葉片數及增殖系數。

表2 叢生芽誘導培養基激素水平

平均株高=苗的總高度/苗的總數

平均葉片數=葉片總數/苗的總數

增殖系數=增殖后的幼芽數/接種的外植體數

1.2.3 生根誘導。叢生芽分切為單芽，接種到生根培養基，誘導培養基均以MS培養基為基本培養基（表3）。每種處理接種30個外植體；35 d后統計其平均根數、平均根長、平均株高及生根率。

平均根數=生根總數/接種外植體數

平均根長=根的總長度/根的總數

生根率=（生根的外植體數/接種的外植體數）×100%

表3 生根誘導培養基激素水平

2 結果與分析

2.1 外源激素對灑金柏誘導芽萌發的影響

9種芽萌發誘導培養基對灑金柏芽萌發的影響差異較大。從表4可以看出，經9種處理組合培養基誘導后，都能夠促使灑金柏初代外植體萌芽，但以M4處理的萌芽率最高，達到96.67%，且植株生長健壯、節間正常、葉片平展，幾乎不存在葉片變黃脫落的現象（圖1）。在M5處理中，其萌芽率雖然達到了80%，初期植株長勢較強，但是容易落葉從而影響植株后期生長，甚至導致植株死亡。在M6處理中，萌芽率相對較高，達到73.33%，卻伴有葉片黃化現象發生，后期植株生長勢逐漸變弱，甚至死亡。其他激素組合的培養基中，植株生長勢弱，伴有葉片細弱、卷曲及節間縮短，致使植株后期不能正常生長，未達到預期效果。因此，灑金柏最適的芽萌發誘導培養基組成為 MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.1 mg/L）（圖 2）。

表4 外源激素對灑金柏芽萌發誘導的影響

圖1 灑金柏出芽萌發

圖2 灑金柏繼代培養

2.2 外源激素對灑金柏誘導叢生芽的影響

在MS培養基中添加不同濃度的植物生長調節劑NAA、6-BA對灑金柏的帶芽莖段進行增殖培養，培養35 d后的統計結果如表5所示。

表5 外源激素對灑金柏叢生芽誘導的影響

2.3 外源激素對灑金柏誘導生根的影響

從表6可以看出，9種處理組合均可誘導灑金柏帶芽莖段生根，在1/2MS為基本培養基的處理組合中，綜合而言，在所有處理組合中以處理S6的效果最為顯著，其主根粗壯、須根較多，培養苗整體長勢較壯，葉片平展，生根率達到了93%。因此，灑金柏最適生根培養基的組成為1/2MS＋IBA（0.5 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）（圖 4）。

表6 外源激素對灑金柏生根誘導的影響

從表5可以看出，在加入 NAA（0.1 mg/L）和6-BA（0.5 mg/L）的Z5處理中，灑金柏的長勢最好，平均株高5.34 cm，平均葉片數6.74片，增殖系數達到6.8，顯著高于其他處理（圖3）。因此灑金柏的最佳增殖培養基組成為 1/2MS＋NAA（0.1 mg/L）+6-BA（0.5 mg/L）。

圖3 灑金柏增殖培養

圖4 灑金柏生根培養

3 結論與討論

試驗中大量愈傷組織出現了褐化的現象，可能與培養基中各物質的配比有關，或者是材料自身原因，仍需進一步討論。該研究對影響灑金柏的離體快繁的激素進行分析，初步篩選出芽萌發、叢生芽及生根誘導的培養基配方。最適芽萌發培養基為1/2MS＋6-BA（5.0 mg/L）＋NAA（0.1 mg/L）；叢生芽誘導最佳增殖培養基為 1/2MS＋NAA（0.1 mg/L）+6-BA（0.5 mg/L）；最適生根培養基為1/2MS＋IBA（0.5 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）。

不同植物種類和不同培養目標對植物生長調節物質有不同的要求，篩選出的激素配比為今后灑金柏的離體快繁奠定基礎。隨著園林綠化的普及，常綠小灌木灑金柏的需求量與日俱增，由于組培苗的生長環境限制性，因此灑金柏試管苗的馴化工作尤為重要。獲得無菌且生長力旺盛的苗木是園林綠化成本降低的根本，也是組培苗工廠化的關鍵和瓶頸。