狼瘡性腎炎患者血清和尿液中IL-18和KIM-1的表達水平及臨床意義

曾志能

(桂林醫學院附屬醫院檢驗科， 廣西桂林 541001)

狼瘡性腎炎(LN)不但是系統性紅斑狼瘡(SLE)常見的并發癥之一，而且是繼發性腎病導致終末期腎衰竭的一種疾病[1]。多見于中、青年女性，其發病與免疫復合物形成、免疫細胞和細胞因子等免疫異常有關。據數據顯示5年腎臟存活率為46%～95%，其75%患者可有腎臟受累的臨床征象[3]。因此，為尋找新的LN生物學指標，研究者已經做了大量研究，然而到目前為止，還未找到一種公認的LN的特異性生物學標志物[2]。目前，隨著對炎癥趨化因子和細胞因子的研究更加深入，從中發現新的細胞因子可以作為LN的生物標志物，LN患者和狼瘡鼠模型腎臟病理均存在血清和尿中白細胞介素-18(IL-18)，在抗微生物、抗自身免疫疾病等方面將會得到充分應用，并且在LN的發病機制中起主要作用。而跨膜蛋白-腎損傷分子-1(KIM-1)表達于受損的近曲小管上皮細胞，也可作為檢查LN早期腎損傷定量的生物學標記物[4]。有關資料表明，LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1表達水平顯著升高，血清和尿液中IL-18和KIM-1表達水平和LN嚴重性及治療效果密切相關，同時對LN的復發具有預測價值[5-6]。目前血清和尿液IL-18和KIM-1表達水平在LN患者的臨床研究報道較少。為此，本研究旨在探討LN患者血清和尿液IL-18和KIM-1表達水平與反映腎臟病變常規實驗室檢查指標間的關系及其對活動性LN的臨床診斷意義，為LN臨床治療預后提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2016年10月至2017年9月就診的LN患者60例(LN組)及60例體檢健康者(對照組)作為研究對象。納入標準：(1)所有納入患者均符合1997年美國風濕病學會修訂的LN及SLE分類診斷標準[7]；(2)臨床資料詳細且真實；(3)經腎活檢確診為LN；(4)既往無高血壓、糖尿病者。排除標準：(1)近期行免疫抑制劑治療者；(2)合并肝腎等重要臟器損傷者；(3)類風濕關節炎及自身免疫性疾病者；(4)繼發性腎臟疾病者。LN組根據系統性紅斑狼瘡疾病活動指數2000(SLEDAI-2000)評分系統分為LN活動組(SLEDAI評分≥10分)35例和非活動組(SLEDAI評分<10分)25例；再按照ds-DNA抗體是否陽性分為抗ds-DNA抗體陽性組35例，抗ds-DNA抗體陰性組25例。LN活動組男15例，女20例，年齡19～60歲，體質量35～75 kg；非活動組男9例，女16例，年齡25～55例，體質量40～65 kg。兩組患者C反應蛋白、尿蛋白定量等指標比較差異有統計學意義(P<0.05)，其他基本情況比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

1.2 檢測方法 首先收集患者的基本情況及生化指標等。血清IL-18和KIM-1水平測定：抽取受試者第1天早上8:00時空腹靜脈血5 mL，低溫狀態下在4 000 r/min的離心機中離心5 min，留取上清液分裝貯藏在-80 ℃低溫冰箱中保存待檢。尿液IL-18和KIM-1水平測定：同時，用無菌試管收集受試者早晨尿10 mL，4 000 r/min并離心5 min收集血清和尿液上清液，放置于56 ℃水浴鍋30 min滅活，然后用0.22 μm微孔濾膜濾過除菌，最后放入在-20 ℃冰箱中保存備用。采用酶聯免疫吸附法檢測血液及尿液中IL-18和KIM-1水平。具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，其來源于北京奇松生物科技有限公司。

2 結 果

2.1 比較3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平的變化 3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)，其中LN活動組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于非活動組與對照組，非活動組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.2 LN患者血清及尿液IL-18和KIM-1水平與ds-DNA抗體之間的關系 LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1水平在抗ds-DNA抗體陽性組與抗體陰性組之間比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表2 3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較

注：*P<0.05,與對照組比較；#P<0.05,與非活動組比較

表3 各組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較

2.3 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平與臨床指標的相關性分析 根據相關性結果顯示：LN患者血清中的IL-18和KIM-1水平與白細胞計數、C反應蛋白、尿蛋白定量之間均呈負相關(P<0.05)，且補體C3、補體C4、紅細胞沉降率及SLEDAI評分之間均呈正相關；LN患者尿液中的IL-18和KIM-1水平與白細胞計數、補體C3、補體C4之間呈負相關，與C反應蛋白、尿蛋白定量、紅細胞沉降率及SLEDAI評分之間均呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平

注：*P<0.05

3 討 論

SLE患者中約有1/3～1/2存在腎臟受累的臨床表現，LN是最常見的繼發性腎病之一，也是SLE患者主要死亡原因之一。近年來，腎臟活檢是診斷LN嚴重程度及其腎臟功能損害的金標準并是LN治療的重要參考指標[8-10]。但有創性及風險性限制了其臨床應用[11]。因此探索判斷LN嚴重程度重要性和活動性的實驗室檢查指標顯得尤為重要，尋找一種操作方面及簡單的指標來評估LN患者腎病變的活動性，這是許多醫務人員及研究者們的共同目標。

IL-18是1989年有研究者發現從痤瘡丙酸桿菌和LPS致內毒素休克的小鼠血清中分離出一種類似IL-12的因子，相對分子質量約為75×103。其作用是由巨噬細胞樣細胞產生，具有誘導Th1細胞產生IFN-γ；促進T細胞增殖；加強FasL介導的細胞效應；與IL-12共同作用誘導B細胞產生IFN-γ等多種生物學功能。這預示著IL-18是一種具有廣泛應用的細胞因子，血清和尿中IL-18的表達水平和LN病理密切相關。KIM-1是免疫球蛋白基因超家族的一員，其生物學作用尚不明確，可能參與免疫反應和腎臟疾病的損傷及修復過程及釋放細胞外對抗損傷性黏附[12]。既往研究發現原位雜交和免疫組化顯示，KIM-1表達于再生近曲小管含有細胞增殖的標記物的上皮細胞和含有細胞去分化的標記物的上皮細胞，提示KIM-1的表達與上皮細胞的去分化和增殖有關，并借此參與小管上皮組織形態和功能完整性的恢復[13-14]。因此，血清和尿KIM-1可判斷預后及藥物腎毒性的鑒定中發揮重要作用。研究證明，血清和尿中IL-18和KIM-1能夠更早反映腎損傷[15]。

本研究通過ELISA方法對LN患者血清及尿液中的IL-18和KIM-1水平進行了檢測，結果表明：3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)，其中LN活動組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于非活動組與對照組，且非活動組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于對照組，由此可見，血清和尿液中IL-18和KIM-1表達水平高低和LN的病情活動度、狼瘡病情復發有關，甚至和LN的病理類型密切相關[16]。同時LN患者血清和尿液中的IL-18水平與補體C3、補體C4、紅細胞沉降率及SLEDAI評分之間均呈正相關，此結果和近幾年活動性LN血清和尿液中IL-18和KIM-1升高報道一致[17-18]。臨床上判斷病情活動性的指標，如補體C3、C4、紅細胞沉降率、dcDNA滴度可反映整體狼瘡病情控制的情況，補體C3在肝損害時，也不能很好地反映狼瘡病情的活動性；紅細胞沉降率還受感染等多種因素影響。因此，深入研究LN的生物學作用及其在腎臟中的表達水平及臨床意義，對完善LN的發病機制和提供新的治療思路可能具有重要意義。根據相關性結果顯示，LN患者血清及尿液中的KIM-1水平與C反應蛋白、尿蛋白定量、紅細胞沉降率及SLEDAI評分之間均呈正相關，這一結果提示，尿液KIM-1水平可可能與LN密切相關，而且有可能成為LN疾病活動的預測因子，從而更好地反映LN患者病情變化。

綜上所述，血液和尿液中的IL-18和KIM-1表達水平可能作為LN疾病的生物標記物，且二項指標檢測對病情的預后及治療具有積極的指導意義。