多巴絲肼片聯合銀杏葉提取物對老年帕金森病病人黑質神經元細胞因子、血管活性物質及抗氧化物的影響

徐浩剛 陳正平 夏秋鈺 桑穆惠

帕金森病（Parkinson's disease，PD）是由于錐體外系功能紊亂而引起的一種慢性中樞神經系統退行性疾病［1］，主要發病機制為中腦黑質多巴胺能神經元凋亡導致多巴胺（DA）合成減少，乙酰膽堿（Ach）相對亢進，導致DA-Ach功能失衡［2］，其主要表現為震顫、肌強直、步態異常及運動遲緩等運動癥狀。除了運動功能障礙以外，大多數PD病人還容易患有抑郁、情感淡漠、焦慮、認知功能障礙等非運動癥狀［3］。PD屬于老年人常見的神經內科疾病，隨著老齡化程度的加深，PD發病率也在不斷上升［4-5］。多巴絲肼是左旋多巴和芐絲肼組成的復方制劑，是治療PD的基礎藥物之一，其中芐絲肼能夠抑制腦外組織中左旋多巴減少，降低其不良反應。銀杏葉提取物（ginko biloba extract，GBE）是從銀杏的干燥葉中提取的具有多種有效藥用成分的混合物，其最主要的活性成分為銀杏黃酮和銀杏內脂類化合物，具有抗炎、抗氧化、擴張血管、抑制血小板集聚、保護腦缺血／再灌注后腦組織及神經系統等作用［6-7］。本研究旨在觀察GBE對PD病人黑質神經元細胞因子、血管活性物質及抗氧化物的影響，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院神經內科門診就診的老年PD病人60例為研究對象，其中男35例，女25例，年齡66～82歲，平均（67.12±10.41）歲；病程 1～12年，平均（5.40±2.73）年。根據隨機數字表法將60例病人分為2組，每組各30例。其中觀察組男17例，女13例，年齡67～82歲，平均（67.06±9.17）歲，病程 1～11年，平均（5.23±2.67）年；對照組男 18 例，女 12 例，年齡66～81歲，平均（67.19±11.68）歲，病程 2～12年，平均（5.57±2.82）年。2組病人在性別、年齡、病程等方面差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得醫院倫理委員會批準，且所有病人均自愿簽署知情同意書。

納入標準：（1）所有病人均符合 PD診斷標準［8］，Hoehn and Yahr分級Ⅱ～ Ⅲ級；（2）病人意識清楚，能夠配合研究措施。排除標準：（1）腦血管疾病、腦炎及外傷等原因引起PD綜合征的病人；（2）肝腎功能不全及心血管疾病的病人；（3）高血壓及糖尿病病人；（4）伴有認知功能嚴重障礙影響研究進行的病人。

1.2 治療方法 2組病人均給予物理和功能鍛煉等基礎治療。對照組給予多巴絲肼片（上海羅氏制藥有限公司，國藥準字 H10930198），62.5 mg／次，1 次／d，口服5 d后改為125 mg／次，2次／d，口服 5 d后改為166.67 mg／次，3次／d；觀察組在對照組的基礎上給予GBE（注冊證號： H20090296），3 次／d，一次 2 片，口服。2組治療均持續4周。

1.3 檢測方法 所有病人于治療前后清晨空腹抽取靜脈血15 mL，置于抗凝管中備用。采用雙抗體夾心法檢測病人黑質二價金屬離子轉運蛋白（DMT1）及葡萄糖調節蛋白 75（grp75）水平，試劑盒購于上海寶曼生物科技有限公司；采用硝酸還原法檢測一氧化氮（NO）含量；采用放免法檢測內皮素（ET）含量；采用酶聯免疫吸附法檢測超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）及丙二醛（MDA）水平，相關試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件對數據進行統計學分析，計量資料用均數±標準差（ˉx±s）表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組黑質神經元細胞因子水平比較 治療前，2組黑質神經元細胞因子水平差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，2組DMT1水平顯著降低，grp75水平顯著升高，且觀察組DMT1水平明顯低于對照組，grp75水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 2組黑質神經元細胞因子水平比較（ˉx±s，μmol／L，n=30）

2.2 2組血管活性物質水平比較 治療前，2組血管活性物質水平差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，2組NO水平顯著升高，ET水平顯著下降，且觀察組NO水平明顯高于對照組，ET水平明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 2組血管活性物質水平比較（ˉx±s，n=30）

2.3 2組抗氧化物水平比較 治療前，2組抗氧化物水平差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，2組SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平則顯著降低，且觀察組SOD和GSH-Px水平明顯高于對照組，MDA水平明顯低于對照組，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 2組抗氧化物水平比較（ˉx±s，n=30）

3 討論

目前我國有超過500萬的PD病人，55歲以上人群PD患病率約為1%［9］，65歲以上老年人群PD患病率約為1.7%，且男性高于女性［10-11］，可以發現，隨著人口老齡化程度的加深，老年PD綜合征病人的患病率也在逐年升高。PD臨床主要特征為運動障礙，包括進行性運動遲緩、肌強直、靜止性震顫和姿勢步態異常等，此外還可伴有大量非運動癥狀（NMS），如嗅覺減退、便秘、抑郁、睡眠障礙等［5］。

PD最主要的病理改變是中腦黑質多巴胺能神經元的變質死亡，而中腦黑質多巴胺能神經元的變性死亡與過渡金屬鐵的關系密切［12］。PD病人腦內鐵含量升高的主要部位一般是黑質和蒼白球，其顯著升高的程度與PD的嚴重程度相關，且鐵代謝有賴于各種相關蛋白的調節，如DMT1。有研究認為DMT1在PD病人黑質神經元細胞中重度高表達，且與鐵升高部位一致，認為DMT1水平升高可能是腦內鐵離子紊亂的原因之一。grp75作為一種主要存在于細胞線粒體中的熱休克蛋白，行使分子伴侶功能。研究認為grp75與PD密切相關，其在PD病人黑質線粒體中的表達顯著降低，且grp75的基因突變也會顯著影響到線粒體功能［13］。本研究結果顯示，與治療前相比，治療后，2組DMT1水平顯著下降（P＜0.05），grp75水平顯著上升（P＜0.05），且觀察組黑質神經元細胞因子的調節作用優于對照組。表明GBE能通過減少DMT1水平使腦內鐵含量下降，對 PD有較好的治療作用，與衛飛等［13］研究一致。

NO和ET均為血管內皮細胞產生的血管活性物質，主要作用于血管平滑肌以調節血管舒張或收縮，其中NO起到強烈舒張血管作用，能夠有效抑制血小板集聚和血栓形成，ET起到強烈收縮血管作用，能夠促進血栓形成。本研究結果顯示，與治療前相比，治療后，2組病人血清中NO含量顯著增加（P＜0.05），ET含量顯著降低（P＜0.05），且觀察組血管活性物質改善程度均優于對照組，說明GBE能夠作用于血管床，產生擴血管作用，與周莉等［14］研究一致。

GBE化學成分種類較多，其中黃酮類化合物是GBE中主要的藥理活性成分，主要作用機制如下：黃酮類分子中多含有羥基團（-OH），能夠直接清除H2O2、O-等氧自由基，并捕捉其他代謝過程中產生的自由基，同時通過提供氫離子終止自由基連鎖反應，阻止和抑制氧自由基反應及脂質過氧化反應，抑制MDA，并參與調節SOD、GSH-Px等酶活性，降低氧自由基和脂質過氧化損傷。SOD活性能夠反映機體清除自由基的能力，GSH-Px則能夠清除 H2O2和MDA［14］。本研究結果顯示，與治療前相比，治療后，2組SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平顯著降低，且觀察組病人SOD、GSH-Px水平顯著高于對照組（P＜0.05），MDA 水平顯著低于對照組（P＜0.05），說明SOD、GSH-Px水平的升高會進一步抑制機體內MDA的水平，GBE能夠降低氧自由基和脂質過氧化損傷，與周莉等［14］研究一致。

綜上所述，GBE能顯著降低老年PD病人黑質DMT1水平，升高grp75水平，改善血管收縮舒張功能以及機體氧化應激水平。