葫蘆素B的檢驗方法研究

2019-07-31 06:36:54姜懷利

關鍵詞：實驗

姜懷利

（江蘇因倍思科技發展有限公司江蘇淮安 223005）

1 前言

葫蘆素是從葫蘆科植物中提取的苦味苷元成分，是一類高度氧化的四環三萜類化合物[1-3]，其化學結構的確立始于20 世紀60年代，現已發現40 余種葫蘆素中，以葫蘆素B 應用最廣，此外還有葫蘆素 A、葫蘆素 C、葫蘆素 D 等[4-6]。

本文采用高效液相色譜法測定葫蘆素B 的含量，并計算出了不同試驗下的相對標準偏差（RSD），此法簡便、準確，重現性好[7,8]。

Shimadzu LC-20A 型高效液相色譜儀，Shimadzu SPD-10A 紫外檢測器；Sartorius SQP 雙量程電子天平。

葫蘆素B 對照品（天津藥物研究院提供）；所用試劑均為分析純。

色譜柱:江蘇漢邦 Kromosil C18 色譜柱（4.6×250 mm，5 μm）；流動相:甲醇-水（62∶38）；柱溫:25℃；檢測波長:228 nm；流速:1.0 mL/min。

對照品溶液的制備:精密稱取葫蘆素B 對照品適量，用甲醇制成每1 mL 含葫蘆素B 0.03 mg 的溶液。

供試品溶液的制備:取供試品細粉約1.25 g，精密稱量，置具塞錐型瓶中加甲醇20 mL，振搖20 min，放置10 min，過濾，濾液置25 mL 容量瓶中，用少量甲醇洗滌，洗液并入同一容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻[9]。

稱取葫蘆素B 對照品2.8 mg 至50 mL 的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得貯備液，分別吸取貯備夜 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL 至10 mL 容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定。

分別精密吸取對照品溶液（0.005 6 mg/mL、0.011 2 mg/mL、0.016 8 mg/mL、0.022 4 mg/mL、0.028 0 mg/mL、0.033 6 mg/mL、0.039 2 mg/mL）20 μL（詳見表1），按已擬訂的色譜條件測定峰面積。

以峰面積（A:mV·min）為縱坐標，葫蘆素 B 的濃度（C:mg/mL）為橫坐標繪制得曲線，并計算得回歸方程 Y=3×107X+687.1，相關度（r）為 0.999 8。詳細情況見圖1。

表1 葫蘆素B 線性數據

圖1 峰面積與濃度曲線圖

再以峰面積（A:mV·min）為縱坐標，葫蘆素B的進樣量（m:μg）為橫坐標繪制標準曲線，并計算得回歸方程 Y=1×106X+687.1，相關度（r）為 0.999 8。詳細情況見圖2。

圖2 峰面積與進樣量曲線圖

實驗結果表明，葫蘆素B 為0.0056～0.0392mg/mL時，其進樣量（m）與峰面積（A）呈良好的線性關系。

精密吸取葫蘆素B 對照品溶液，即濃度為0.028 0 mg/mL 的溶液 20 μL，分別進樣 6 次，每次20 μL，測得的峰面積值詳見表2。

表2 精密度實驗結果

（續表2）

實驗結果表明，本色譜條件下的儀器精密度良好。

精密稱取樣品6 份，制成對應的供試品溶液，按上述擬訂色譜條件測定，分別平行測定6 次，進樣量為20 μL，測定每粒含葫蘆素B 的量。詳細結果見表3。

表3 重現性試驗結果

實驗表明，所擬訂的色譜條件以及試驗方法重現性良好。

分別取供試品溶液20 μL，按上述色譜條件分別在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 進樣，測定峰面積，考察樣品溶液的穩定性，結果詳見表4。

表4 葫蘆素B 溶液穩定性試驗結果

實驗結果表明，供試品溶液在12 個小時內基本穩定。

取已知含量的樣品6 份，分別加入葫蘆素B 對照品適量，制成供試品溶液[10]，按上述色譜條件測定，進樣量20 μL，計算回收率公式為:

回收率（%）=（實測葫蘆素B 量-樣品中葫蘆素B 量）/添加葫蘆素 B 量×100%

詳細結果見表5。

表5 回收率試驗結果

實驗結果表明，葫蘆素B 含量在該色譜條件下回收率良好。

本文采用的測定葫蘆素B 含量的高效液相色譜法的精密度、重現性和加樣回收率的RSD 均小于2%，符合實驗要求，表明該方法可實際用于葫蘆素B 含量的測定[11]。