2種國標方法檢測嬰幼兒奶粉中葉酸和泛酸含量比較

王 晶 蘆 云 師 佳 安麗艷 李 玲

（中國檢驗檢疫科學研究院 北京 100123）

1 前言

葉酸（Folic）和泛酸（Pantothenic Acid）同屬于水溶性的維生素，都是人體維持正常生理功能所必需的微量物質, 尤其對孕婦和新生兒有著特殊的重要性[1,2]。葉酸和泛酸在嬰幼兒配方食品和特殊醫學用途嬰兒配方食品等國家強制性標準中規定為必須成分，并對添加量做了明確限定。

嬰幼兒配方奶粉葉酸和泛酸的主要檢測方法是微生物法。2018年8月，食品安全國家標準勘誤，其中GB 5009.211—2014 《食品安全國家標準食品中葉酸的測定》[3]和 GB 5009.210—2016《食品安全國家標準 食品中泛酸的測定》[4]在勘誤中將當時現行有效的國家標準GB 5413.16—2010 《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測定》[5]和GB 5413.17—2010《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》[6]替代。這2 個標準突然作廢，無論是對檢測機構還是乳品企業來說都有一定的影響。本文對葉酸和泛酸新舊國標方法的精密度和檢測結果的差異性進行比較，希望能給檢測機構和乳品企業在檢測和生產中提供一些數據支持。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

市售各品牌嬰幼兒配方奶粉。

標準菌株:植物乳桿菌（ATCC 8014）、鼠李糖乳桿菌（ATCC 7469），購自中國工業微生物菌種保藏管理中心（CICC）；培養基:乳酸桿菌瓊脂培養基、乳酸桿菌肉湯培養基，購自北京陸橋生物技術有限公司；葉酸測定培養基、泛酸測定培養基，美國BD 公司；葉酸標準品（99.0%）、泛酸標準品（99.0%）:DR。

2.2 主要儀器設備

pH 計（S220，瑞士 METTLER 公司）；培養箱（MIR-254-PC，日本 Panasonic 公司）；酶標儀（multiskan go，美國 Thermo 公司）。

2.3 檢測方法

葉酸參照 GB 5009.211—2014、GB 5413.16—2010方法檢測；泛酸參照GB 5009.210—2016（第一法）、GB 5413.17—2010（第一法）方法檢測，并分別測出了它們的相對標準偏差（RSD）。

3 結果與討論

3.1 精密度

選擇嬰兒配方奶粉3 個、較大嬰兒奶粉2 個、幼兒奶粉1 個，總共6 個樣品，每個樣品做6 個平行。2種方法檢測結果的精密度詳見表1～表4。

表1 GB 5413.16—2010 葉酸檢測結果

表2 GB 5009.211—2014 葉酸檢測結果

表3 GB 5413.17—2010（第一法）泛酸檢測結果

表4 GB 5009.210—2016（第一法）泛酸檢測結果

由表1、表2可知，GB 5413.16—2010 檢測 6 種奶粉葉酸，6 個平行的 RSD 為 2.78%～4.59%，GB 5009.211—2014 檢測 6 種奶粉葉酸，6 個平行的 RSD為 3.05%～4.23%；由表3、表4可知，GB 5413.17—2010（第一法）檢測6 種奶粉泛酸，6 個平行的RSD為 1.10%～4.05%，GB 5009.210—2016（第一法）檢測6 種奶粉泛酸，6 個平行的 RSD 為 1.75%～4.99%。每種方法的精密度比較接近。

3.2 2種方法的差異分析

葉酸 2 種方法的檢測結果經 F 檢驗，P＞0.05，可進一步采用雙樣本等方差t 檢驗對2 種方法的結果進行分析:在95%的置信區間下，自由度df=10，t 檢驗值=0.066，t 臨界值=2.228，P=0.949＞0.05，2 種方法的檢測結果無統計學意義；泛酸2 種方法的檢測結果經F 檢驗，P＞0.05，可進一步采用雙樣本等方差t檢驗對2 種方法的結果進行分析:在95%的置信區間下，自由度 df=10，t 檢驗值=-0.102，t 臨界值=2.228，P=0.920＞0.05，2 種方法的檢測結果差異無統計學意義。

3.3 討論

葉酸和泛酸新舊國標的主要差異在于樣品前處理。葉酸舊標準中嬰幼兒配方奶粉的前處理方法是100℃水浴加熱，泛酸舊標準中嬰幼兒配方奶粉的前處理方法是121℃水解。在新國標中，2 個項目的前處理方法都變成了超聲直接提取法，并省去了調整pH 值的步驟，與舊方法對比，前處理步驟工作量有所減少。值得一提的是，對于泛酸項目，由于省去了試樣調整pH4.5 后過濾取上清液的步驟，試樣會渾濁，使得測試結果平行性差，故建議先將試樣用0.22 μm 的過濾器過濾除去背景顏色再進行后續實驗。

4 結語

本文對葉酸、泛酸新舊國標方法檢測嬰幼兒配方奶粉結果的精密度和差異性進行了比較。葉酸新、舊方法的結果精密度分別為3.05%～4.23%和2.78%～4.59%；泛酸新、舊方法的結果精密度分別為1.75%～4.99%和1.10%～4.05%。2 個項目新舊方法的結果精密度接近，分別測得的葉酸、泛酸結果差異無統計學意義（P＞0.05）。通過本文的比對數據，希望能在加速實驗、穩定性實驗或者產品配方配比方面為檢測機構和乳品企業提供一些數據支持。