柴胡皂苷D對非酒精性脂肪性肝炎大鼠糖脂代謝紊亂的影響*

阮 君 肖鐵剛 王 兵△

1.上海交通大學附屬第六人民醫院中醫科 (上海， 200233) 2.上海中醫藥大學附屬上海市中西醫結合醫院

柴胡皂苷含量占柴胡總干重的7%[1]，其中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷D被認為是柴胡藥理活性最強的物質[2,3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的發病率在世界范圍內呈上升趨勢，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是NAFLD的一個臨床和組織學分支，與全球人口死亡率、肝硬化和終末期肝病、心血管疾病死亡率的增加以及與肝相關和非肝相關癌癥發病率的增加有關，本文研究柴胡皂苷D對NASH大鼠糖脂代謝和肝臟脂肪變性的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠44只，體重(130±15)g，由上海斯萊克試驗動物有限責任公司提供，動物生產許可證號[SCXK(滬)2007-0005]，自由進食飲水，12 h明暗交替照明，適應性普通飼料喂養1 周。

1.2 藥物與試劑 柴胡皂苷D由中國藥品生物制品研究所提供；羅格列酮片，葛蘭素史克(天津)有限公司，批號：H20020475；碘125胰島素放射免疫分析試劑盒，購于上海西唐生物有限公司。

1. 3 造模和分組方法 44只雄性Wistar 大鼠隨機分為空白對照組(C) 10 只和造模組34只。C組大鼠給予普通飼料喂養，造模組大鼠給予高脂高糖飼料(68%基礎飼料+15%豬油+15%蔗糖+2%膽固醇)喂養。以上飼料均由中國科學院上海斯萊克實驗動物有限公司提供。于第2、4、6、8周末各處死1只造模大鼠，行肝組織病理切片HE染色，判斷造模情況。造模8周后，將造模成功大鼠隨機分為模型組(M，n=10)、羅格列酮組(R，n=10)、柴胡皂苷D組(CD，n=10)。

1.4 給藥方法 CD組大鼠以100 mg/kg劑量的柴胡皂苷D灌胃R組大鼠以0.4 g/kg劑量的羅格列酮的灌胃，均1次/d，連續4周。M組和C組大鼠均以等量生理鹽水灌胃。CD、R和M組大鼠繼續給予高脂高糖飼料，C組大鼠給予普通飼料。用藥4周后處死大鼠取材。

1.5 觀察指標 觀察大鼠行為、狀態、食欲、毛發及死亡情況；稱量體重；觀察肝臟形態，包括重量、外形、色澤、質地；計算肝體比(肝體比=肝臟濕重/體重×100%) 。檢測血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、FFA、TBA、FBG及FINS水平，計算IRI：IRI=(FBG×FINS)/22.5。

1.6 病理學檢測 取各組大鼠肝右葉相同部位大小(1.0×0.8×0.3)cm3兩塊肝組織放入 4% 甲醛中固定，石蠟包鹽、切片后行HE染色，光鏡下觀察各組大鼠肝臟脂肪變性和炎癥程度。

2 結果

2.1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比測定情況 見表1。

表1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比比較

2.2 4組大鼠肝功能檢測結果 見表2。

表2 4組大鼠肝功能結果比較

2.3 4組大鼠總膽汁酸、游離脂肪酸檢測結果 見表3。

表3 4組大鼠TBA、FFA結果比較

2.4 4組大鼠血脂指標檢測結果 見表4。

表4 4組大鼠血脂情況比較

2.5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數結果 見表5。

表5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數比較

2.6 4組大鼠肝脂肪變性和炎癥情況 見表6。

表6 4組大鼠肝脂肪變性、炎癥程度比較

3 討論

非酒精性脂肪性肝病以全身性代謝障礙為主要特點,歸屬中醫“肝癖”“積聚”“脅痛”“痰濁”等范疇[4]?！胺才K腑十二經之氣化, 皆必藉肝臟之氣化以鼓舞之, 始能調暢而不病”(清代周學海《讀醫隨筆》)”，肝臟為氣機升降之樞, 有研究認為肝主疏泄對氣機的調節功能為脂類代謝主要途徑[5]。脾失健運，肝氣郁結，最終導致氣機郁阻、痰瘀互結是NAFLD的發病趨勢和特點[6]。

柴胡為傘形科植物柴胡(DC.)或狹葉柴胡(Willd.)的干燥根，有“北柴胡”“南柴胡”之分[7]，以柴胡為主藥的方劑對防治脂肪肝有良好效果，如小柴胡湯及其類方大柴胡湯、柴胡疏肝散、柴胡桂枝干姜湯、柴胡加龍骨牡蠣湯、柴苓湯等[8]。柴胡皂苷D的藥理作用較為廣泛，包括抗腫瘤、抗癌、保肝、鎮靜、抗癲癇及雌激素樣作用等[9],且療效確切。

糖脂代謝紊亂包括胰島素抵抗、糖耐量異常和脂質代謝改變，被認為是NAFLD和NASH的分子發病機制。機體營養過剩時脂質轉錄因子包括碳水化合物反應元件結合蛋白(ChREBP)以及甾醇調節元件結合蛋白-1c (SREBP-1c)上調，導致脂肪生成基因的表達增加，乙酰輔酶a羧化酶(ACC)升高，促進新生脂肪生成(NDL)，抑制肝內脂肪酸氧化作用來驅動脂肪變性[10]。有實驗證明，NAFLD患者不僅肝新生脂肪生成升高，而且血漿FFAs也升高，胰島素抵抗(IR)時，抑制激素敏感脂肪酶的作用消失，導致脂肪組織向血液中大量釋放游離脂肪酸[11]。本次實驗結果顯示M組大鼠血清TC、TG和FFA均升高，與上述結果符合，柴胡皂苷D可降低NASH大鼠血脂、血糖和游離脂肪酸水平，改善糖脂代謝紊亂狀態。

IR與NAFLD之間存在關聯，并且IR還是一種獨立的危險因素，可用于預測NAFLD的發生發展[12，13]。本研究發現，M組大鼠血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均有增加，經過柴胡皂苷D治療后，血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均明顯降低，柴胡皂苷D可有效改善胰島素抵抗，從而減輕NASH。

實驗表明柴胡皂苷D具有利膽保肝作用。戴維等[14]證明柴胡皂苷D能夠通過降低膽汁酸的濃度，抑制肝細胞鈣超載，上調 STIM1 mRNA 的表達，進而減輕阻塞性黃疸對大鼠肝臟的損傷。法尼醇X受體(FXR)作為膽汁酸相關受體，當膽汁酸增加到一定程度時，可以通過誘導 Fxr 來調節膽汁酸轉運基因的表達，達到調節膽汁酸平衡的作用。如柴胡皂苷D通過誘導 Abcc4 mRNA 表達促進膽汁酸從肝細胞進入體循環進而降低膽汁酸的含量；在回腸中，柴胡皂苷D通過誘導 Mdr1 mRNA 表達促進其外排來調節膽汁酸的含量[15]。本研究結果也證明柴胡皂苷D能降低血清總膽汁酸水平、降低ALT，對NASH大鼠有利膽保肝之效。