黃芪中總黃酮含量的測定

王煥英

（衡水學院化工學院，河北衡水053000）

黃芪作為一種中藥藥材，因其含有黃酮類化合物，具有補氣、改善心功能、利尿消腫、抗衰老和增強免疫力等功效，越來越受到科研工作者的關注。黃芪中總黃酮含量的測定與中醫藥學關系密不可分，測定黃芪中總黃酮的含量對黃芪藥理作用的研究發揮著指導性作用。王超等[1]用乙醇作為提取劑，添加溴化十六烷基三甲胺輔助提取黃芪中黃酮。肖衛華等[2]用乙醇回流提取黃芪中黃酮含量，并用高效液相色譜法對提取出來的黃酮進行測定。徐東生[3]利用微波消解儀提取黃芪中的黃酮。以上方法能對黃芪中的黃酮最大限度地提取，并進行了含量測定，但也存在使用藥品昂貴、儀器復雜等缺點。

本文以乙醇為溶劑，采用超聲提取法提取黃芪中的黃酮，通過紫外分光光度計測定黃酮的含量,方法簡單，操作方便,并采用單因素實驗法探討了不同乙醇濃度、用量、不同提取溫度和時間對河北產黃芪中黃酮含量的影響，得出了最佳提取條件，在最佳條件下采用標準曲線法測得了黃芪中的黃酮總含量。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器

T6新世紀紫外分光光度計；超聲波清洗器；粉碎機。

1.2 實驗步驟

1.2.1 超聲溫度的確定

文獻調研得知，黃酮的溶解量隨著溶劑乙醇溫度的升高而升高，但是考慮到乙醇的沸點在75℃～80℃，超聲溫度超過80℃乙醇會揮發而使體積減少，所以選擇超聲溫度為75℃。

1.2.2 超聲時間的確定

用粉碎機將黃芪粉碎，將粉碎后的黃芪均分成4份，每份稱取1 g左右，分別在80%的乙醇中浸泡8 h后，在 75℃下超聲 20 min、30 min、40 min、60 min，在紫外分光光度計上測其黃酮含量。

1.2.3 乙醇浸泡濃度的確定

用粉碎機將黃芪粉碎，將粉碎后的黃芪均分成4份，每份稱取1 g左右，分別取20 mL 55%、70%、80%、95%的乙醇中浸泡8 h。浸泡結束后，75℃下超聲提取40 min。在紫外分光光度計上測其黃酮含量。

1.2.4 浸泡時間的確定

用粉碎機將黃芪粉碎，將粉碎后的黃芪均分成5份，每份稱取1 g左右，分別在80%的乙醇中浸泡2 h、8 h、10 h、12 h、14 h，浸泡結束后，75℃下超聲提取 40 min。在紫外分光光度計上測其黃酮含量。

1.2.5 乙醇浸泡體積的確定

用粉碎機將黃芪粉碎，將粉碎后的黃芪均分成4份，每份稱取1 g左右，分別加入80%的乙醇10 mL、20 mL、30 mL、50 mL，浸泡結束后，75℃下超聲提取 40 min。在紫外分光光度計上測其黃酮含量。

2 結果與討論

2.1 超聲時間對黃酮含量的影響

表1 不同超聲時間對黃酮吸光度的影響

由表1可知，隨著超聲時間的延長，吸光度逐漸增大，說明黃芪中提取黃酮的量逐漸增加，但當超聲時間超過40 min后，吸光度雖然增大，但是增大的幅度減小，所以取超聲時間為40 min，既保證了得到較大量的黃酮，又節省了時間和能源。

2.2 乙醇濃度對黃酮含量的影響

表2 不同濃度乙醇浸泡后黃酮所測吸光度

由表2可知，隨著浸泡黃芪的乙醇濃度增大，吸光度先增大后減小，原因可能是，乙醇濃度越大，能溶解的黃酮量也越多，但當乙醇濃度增大到一定程度，乙醇分子間產生氫鍵，游離乙醇濃度減小，溶解黃酮的能力減小，所以選取乙醇濃度80%為宜。

2.3 浸泡時間對黃酮含量的影響

表3 不同浸泡時間后黃酮所測吸光度

由表3可知，隨著黃芪浸泡時間的延長，吸光度逐漸增大，但當浸泡時間超過12h后，吸光度幾乎不再增加，說明浸泡12 h黃芪中的黃酮已完全溶解出來，所以選擇浸泡時間為12 h。

2.4 黃芪與乙醇量比對黃酮含量的影響

表4 不同物料比所測黃酮吸光度

由表4可知，隨著所用乙醇體積的增大，吸光度逐漸增大，但當乙醇體積增大到1∶30后，吸光度雖然增大，但幅度不大。所以選擇物料比1∶30既保證黃芪中的黃酮基本溶解，又節約了成本。

綜上所述，黃芪中黃酮最佳提取條件為：在80%的乙醇中浸泡12 h，浸泡時黃芪與乙醇的物料比為1 g∶30 mL，然后在75℃下超聲40 min。

2.5 標準曲線的繪制

準確量取對照品溶液（蘆丁標準液）0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL，分別置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶液至刻度線，置比色皿中，分別于265 nm波長處測定吸光度，作出圖1曲線。

在上述最佳黃酮提取條件下，稱取一定量黃芪測得黃酮吸光度，根據標準曲線，可以得出黃酮的平均濃度為7.4 μg/mL，即每g黃芪中黃酮的含量為0.007 4 mg。

3 結論

（1）乙醇濃度對黃酮的提取有影響，經過實驗可知，黃芪浸泡在80%的乙醇溶液中有較高的吸光度。

（2）浸泡黃芪的乙醇體積對黃酮的提取有影響。當乙醇濃度固定不變時，體積越大，吸光度越大，1g∶30 mL的乙醇溶液浸泡較好。

（3）黃芪在乙醇中浸泡時間的長短與黃酮的含量有關，浸泡時間越長，提取的黃酮含量越多，當達到一定時間時，黃酮含量不再升高，表明黃芪已經浸泡完全。

（4）用粉碎機粉碎黃芪后浸泡將黃酮提取出來，實驗發現用超聲波提取法能將黃酮提取得更徹底。

（5）實驗結果表明，黃芪在1 g∶30 mL 80%的乙醇溶液中浸泡12 h，然后在75℃下超聲40 min，吸光度達最大值，可以認為黃酮已經提取完全，此時吸光度值為0.302 3，黃芪中黃酮含量為0.007 4 mg/g。