miR-483在視網膜母細胞瘤細胞中的表達及其作用機制

蘇 杰，劉 巖，邵宏超

(華北理工大學附屬醫院眼科，河北 唐山 063000)

視網膜母細胞瘤(retinoblastoma,RB)是嬰幼兒最常見的眼內惡性腫瘤，隨著生活水平及診療技術的提高，RB的治療也由以往的眼球摘除向盡可能保留眼球、提高生存率等方面轉變。microRNA-483(miR-483)與腫瘤的發生關系密切，在腫瘤細胞增殖、分化、凋亡等過程中起到調控作用，但miR-483在RB中的作用尚不明確。本研究通過對RB Y79細胞株轉染miR-483模擬物及抑制物，探討miR-483在RB細胞中的表達及作用機制，為RB的治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、試劑與儀器RB Y79細胞株、正常視網膜細胞ARPE-19(深圳豪地華拓生物有限公司)；RPMI-1640培養基、胎牛血清(美國Gibco公司)，細胞自噬染色檢測試劑盒(南京凱基生物科技有限公司)，RNA提取試劑盒(美國Sigma公司)，SYBR Green實時熒光定量聚合酶鏈反應試劑盒(美國Thermo公司)；FACSCalibur流式細胞儀(美國BD Biosciences公司)，低速離心機(長沙湘智離心機儀器有限公司)，培養箱[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養常規培養ARPE-19細胞和Y79細胞。Y79細胞懸浮生長，當細胞密度達到80%時，對細胞進行傳代培養；取生長狀態良好的細胞，以每孔5×105接種于6孔板，于37 ℃、含體積分數5%CO2的培養箱中培養過夜。

1.2.2 細胞轉染取處于對數生長期、生長狀態良好的Y79細胞，轉染前2 h，換成無血清1640培養基，根據細胞轉染的不同，分為miR-483 inhibitors組、miR-483 minics組和陰性對照組。miR-483 inhibitors組和miR-483 minics組細胞分別轉染miR-483 inhibitors和miR-483 minics；細胞轉染后于37 ℃、含體積分數5%CO2的培養箱中培養，4～6 h后吸出混合液換入正常培養基；于37 ℃、含體積分數5%的CO2培養箱中繼續培養 24 h。采用聚合酶鏈反應檢測各組細胞的轉染情況，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。……