氣相色譜法檢測(cè)雞蛋中氟蟲腈的殘留

王愛軍

（上海食品科技學(xué)校，上海 201599）

氟蟲腈是苯基吡唑類高活性殺蟲劑，商品名稱為銳勁特（Regent）[1]。該農(nóng)藥于1996年在美國(guó)正式注冊(cè)登記，20世紀(jì)90年代后期在我國(guó)大范圍試驗(yàn)示范并推廣應(yīng)用，可用于防止水稻、蔬菜、棉花、煙草等作物上的多種農(nóng)業(yè)害蟲。目前，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所對(duì)含氟蟲腈成分的農(nóng)藥制劑產(chǎn)品僅能申請(qǐng)衛(wèi)生用、玉米等部分旱田種子包衣劑的田間試驗(yàn)、臨時(shí)登記和正式登記[2]。我國(guó)于2009年10月1日發(fā)布了《氟蟲腈限用管理規(guī)定》對(duì)該農(nóng)藥禁/限用，目前僅有部分家庭用衛(wèi)生害蟲除蟲劑含有氟蟲腈成分。然而2017年8月初，歐洲被爆出毒雞蛋事件，全世界將矛頭再一次指向氟蟲腈[3]。

氟蟲腈具有慢性神經(jīng)毒性作用，被定為C類致癌物質(zhì)，被世界衛(wèi)生組織列為“對(duì)人類有中度毒性”的化學(xué)品。該藥動(dòng)物試驗(yàn)研究表明，短期攝取大量氟蟲腈會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成不良影響，大量進(jìn)食含有高濃度氟蟲腈殘留的動(dòng)物性食品（如肉、蛋、奶等）可引起肝臟、甲狀腺和腎臟等損害，具有致癌、致畸、致突變的不良作用。因此，歐盟法律規(guī)定，氟蟲腈不得用于人類食品產(chǎn)業(yè)鏈的畜禽養(yǎng)殖過程[3]。目前，世界各國(guó)已對(duì)雞蛋中氟蟲腈的殘留量制定了最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)（MRL）。其中，國(guó)際食品法典委員會(huì) （CAC） 規(guī)定的 MRL值為 0.02 mg/kg，美國(guó)為0.15 mg/kg，歐盟為0.005 mg/kg，日本為0.02 mg/kg，因而對(duì)雞蛋中氟蟲腈的檢測(cè)而言，檢出限應(yīng)當(dāng)至少低于0.005 mg/kg才能對(duì)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行有效評(píng)估[4]。

氟蟲腈的測(cè)定方法有氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜法檢測(cè)氟蟲腈通常使用ECD檢測(cè)器，該檢測(cè)器對(duì)氟蟲腈響應(yīng)高、儀器檢出限低、檢測(cè)成本低，適用于水果蔬菜基質(zhì)的測(cè)定[5-8]。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有較高的靈敏度和分辨能力，能夠有效排除雜質(zhì)干擾[9]。氣相質(zhì)譜一般配備EI離子源，氟蟲腈分子經(jīng)過電子轟擊后無(wú)法產(chǎn)生響應(yīng)高、質(zhì)荷比大的特征峰，因而檢出限較高，如GB/T 23204—2008茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定：氣相色譜-質(zhì)譜法中規(guī)定農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法為氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法，其氟蟲腈的檢出限為0.100 mg/kg[10]。配備化學(xué)源（CI） 的氣相色譜質(zhì)譜儀可以獲得較低檢出限，如陳珊珊等人[11]測(cè)定蝦中氟蟲腈，檢出限可達(dá)到0.4 μg/kg。然而CI源沒有EI源應(yīng)用廣泛，該方法無(wú)法在更多的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行推廣。對(duì)于液相色譜法，已有檢測(cè)方法中采用液相色譜法檢測(cè)的大部分是對(duì)原藥檢測(cè)，對(duì)于實(shí)際樣品的檢測(cè)無(wú)太大的實(shí)際意義[12]。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法結(jié)合液相色譜的高分離能力和串聯(lián)質(zhì)譜的高分辨能力，在食品中的痕量污染物殘留檢測(cè)方面具有很強(qiáng)的定性和定量能力，從而獲得廣泛的應(yīng)用。龔勇等人[13]建立了檢測(cè)雞蛋中氟蟲腈殘留的方法，抗干擾能力強(qiáng)，定量限達(dá)到0.002 mg/kg。然而液相質(zhì)譜檢測(cè)前處理復(fù)雜、儀器維護(hù)成本高。

針對(duì)雞蛋的基質(zhì)，通過比較QuEChERS、固相萃取前處理方法，采用針對(duì)性填料和吸附劑進(jìn)行凈化，比較不同通量、極性的毛細(xì)管色譜柱以獲得更低的檢出限，建立快速、經(jīng)濟(jì)檢測(cè)雞蛋中氟蟲腈的氣相色譜方法，該方法有效降低雜質(zhì)干擾、提高檢測(cè)準(zhǔn)確性，以滿足雞蛋中氟蟲腈風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的需求，便于在各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行推廣。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer，99.2%）；雞蛋，市售；己腈（TEDIA，色譜級(jí)）；石墨化碳（CNW）；PSA（CNW）；固相萃取柱（Oasis，PRiME HLB 200 mg/6 cc）；丙酮（TEDIA，色譜級(jí)）；實(shí)驗(yàn)用水為三級(jí)水。

7890B型氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；QL-866型旋渦混合器；Velocity 14R型高速冷凍離心機(jī)；TTL-DC型氮吹儀。

1.2 樣品前處理

雞蛋樣品經(jīng)去殼，均勻制備后，準(zhǔn)確稱取2.5 g（精確到0.000 1 g）于50 mL旋蓋離心管，加入10 mL 80%的己腈水溶液，蓋上蓋子于漩渦混合器中振蕩60 s，然后以轉(zhuǎn)速12 000 r/min離心5 min，取上清液6 mL進(jìn)固相萃取柱，控制流速1.0～1.5 mL/min，棄去前1 mL洗脫液，收集4 mL洗脫液于10 mL塑料離心管，于氮吹儀上50℃濃縮近干，準(zhǔn)確加入1 mL丙酮，加蓋后超聲提取3min，使用0.45 μm的微孔濾頭過濾，待氣相色譜分析用。

按照上述方法另取一份樣品前處理，離心后取上清液6 mL于氮吹儀上50℃濃縮近干，準(zhǔn)確加入1 mL丙酮，加蓋后超聲提取3 min，加入20 mg PSA和10 mg石墨化碳，加蓋后于旋渦混合器混合30 s，使用0.45 μm的微孔濾頭過濾，待氣相色譜分析用。

1.3 儀器條件

色譜條件：色譜柱Agilent HP-5MS UI（30 m×0.25 mm×0.25 μm） 彈性石英毛細(xì)管柱；色譜柱Agilent DB-1701（30 m×0.53 mm×0.25 μm） 彈性石英毛細(xì)管柱；載氣：N2（99.999%）；恒流模式，柱流量1.5 mL/min（HP-5MS UI），10 mL/min（DB-1701）；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣口溫度220℃，柱初始溫度60℃，保持2 min，程序升溫以20℃/min至160℃，然后以5℃/min至250℃保持10 min，檢測(cè)器溫度280℃，尾吹60 mL/min。

1.4 測(cè)定方法

取樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 μL，通過自動(dòng)進(jìn)樣器注入氣相色譜儀中進(jìn)行分析，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法計(jì)算樣品中氟蟲睛的含量。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

（1）母液配制。用感量0.000 01 g的電子天平準(zhǔn)確稱取氟蟲腈10.0 mg，溶于10.00 mL丙酮中，配成質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)母液。

（2）工作曲線的制作。用丙酮將標(biāo)準(zhǔn)母液配制成 0.000 5，0.001 0，0.002 0，0.004 0，0.008 0，0.016 0，0.032 0，0.064 0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，進(jìn)行分析，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱選擇

色譜柱HP-5MS UI和DB-1701是農(nóng)殘常用色譜柱，對(duì)這2種不同極性和通量的色譜柱進(jìn)行考查。

1.0 μg/mL氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1，氟蟲腈色譜峰參數(shù)見表1。

圖1 1.0 μg/mL氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

從表1看出，進(jìn)樣質(zhì)量濃度均為1.0 μg/mL，氟蟲腈在DB-1701上對(duì)稱因子為0.85，在HP-5MS UI僅0.20，可能的原因是氟蟲腈在弱極性色譜柱上峰型較差，容易拖尾，在中等極性色譜柱上出峰效果較好。此外，試驗(yàn)中HP-5MS柱內(nèi)徑為0.25 mm，通量較小，容易造成拖尾和過載現(xiàn)象。同樣質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在DB-1701上峰面積是HP-5MS的6.8倍，信噪比13.9倍，這說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)品在DB-1701中通量高、基線平滑，能夠獲得更低的檢出限。由于氟蟲腈在DB-1701上有較長(zhǎng)的保留時(shí)間，因此更容易和大多數(shù)低沸點(diǎn)的雜質(zhì)分離，大大降低假陽(yáng)性發(fā)生。綜上所述，選擇使用DB-1701色譜柱。

表1 氟蟲腈色譜峰參數(shù)

2.2 線性范圍、檢出限、精密度、回收率

氟蟲腈質(zhì)量濃度為0.000 5 μg/mL時(shí)，峰面積32 Hz·s，信噪比 3.1，因此儀器檢出限為 0.000 5 μg/mL，當(dāng)稱樣量2.5 g時(shí)，方法檢出限為0.6 μg/kg。配制標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度0.000 5，0.001 0，0.002 0，0.004 0，0.008 0，0.016 0，0.032 0，0.064 0 μg/mL 進(jìn)行測(cè)定，以峰面積S為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，在標(biāo)準(zhǔn)溶液在范圍內(nèi)，線性回歸方程為S=88 349.924 02C-20.892 69，相關(guān)系數(shù)為0.999 85，線性較好。對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行6次獨(dú)立試驗(yàn)，3倍檢出限低質(zhì)量濃度加標(biāo)（1.8 μg/kg） 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=8.6%，回收率為73.4%。高質(zhì)量濃度加標(biāo)（6.0 μg/kg） 時(shí)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=6.1%，回收率為84.2%。

氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

圖2 氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 凈化條件的選擇

目前，農(nóng)殘常用的快速凈化方法有QuEChERS方法（吸附劑主要為PSA/石墨化碳）、固相萃取法（SPE）。

不同凈化方法的基質(zhì)色譜圖見圖3。

圖3 不同凈化方法的基質(zhì)色譜圖

經(jīng)過QuEChERS方法凈化后，部分色素和極性雜質(zhì)被去除，基質(zhì)色譜圖雜峰有所降低，但是25 min后雜峰并沒有明顯減少；經(jīng)過SPE凈化后，基質(zhì)中的小分子酸、極性化合物和磷脂得到有效清除，基質(zhì)色譜圖雜峰顯著降低，尤其是25 min后雜峰明顯減少，有效避免假陽(yáng)性產(chǎn)生。因此，試驗(yàn)使用SPE凈化效果較好。

3 結(jié)論

建立了一種檢測(cè)雞蛋中氟蟲腈殘留量的檢測(cè)方法，該方法檢測(cè)成本低、易普及、前處理簡(jiǎn)單快捷高效，能有效避免假陽(yáng)性產(chǎn)生，方法檢出限為0.6 μg/kg，具有靈敏度高、準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，可有效滿足檢驗(yàn)部門對(duì)雞蛋中氟蟲腈殘留量的檢測(cè)。