遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中染色體制片技術(shù)的方法改進(jìn)

秦永燕，姚沁濤

（1.長治學(xué)院 生物科學(xué)與技術(shù)系，山西 長治 046011；2.長治市第一中學(xué)，山西 長治 046011）

經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中觀察根尖有絲分裂、減數(shù)分裂、多倍體、核型和結(jié)構(gòu)變異等實(shí)驗(yàn)都需要進(jìn)行染色體裝片的制備，裝片制備的好壞直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察。因此染色體制片技術(shù)是經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)。筆者根據(jù)多年實(shí)驗(yàn)教學(xué)的經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，染色體制片技術(shù)的關(guān)鍵是如何獲得分散良好的圖片。對(duì)于經(jīng)驗(yàn)豐富的研究者或教師而言可能很容易，但是對(duì)于初學(xué)者來說，在相對(duì)有限的時(shí)間內(nèi)確保每次實(shí)驗(yàn)都能成功是有難度的。

根尖染色體裝片制備的基本步驟是：材料培養(yǎng)——處理——固定——解離——制片——觀察。對(duì)于不同的材料，培養(yǎng)方法、處理方法和解離條件都需要摸索，在材料相同的情況下，不同的制片方法則會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)效果。因此，文章對(duì)經(jīng)典的制片和十字交叉扣壓法制片的效果進(jìn)行分析總結(jié)，并提出一種新的改進(jìn)方法，為初學(xué)者提供參考。

1 經(jīng)典方法

將解離好的材料置于潔凈的載玻片中央，用刀片切取分生區(qū)乳白色的區(qū)域，不管縱切還是橫切，切出最薄的一片留下染色，剩余的放入廢物缸中。染色之后，蓋蓋玻片。食指、中指固定蓋玻片，取鉛筆末端（有平面的一端）對(duì)準(zhǔn)材料，輕敲多次，直至材料呈云霧狀為止。

結(jié)果可能有部分細(xì)胞呈單層，沒有重疊，可以觀察，但是不均勻的地方還是有重疊現(xiàn)象，而且染色不均勻。此外，染液用量很難掌握，用量稍多則容易造成污染。

2 十字交叉扣壓法

為了盡可能消除重疊現(xiàn)象，首先材料用量要少。于是改進(jìn)方法，采用“十字交叉扣壓法”。切取最薄的一小塊組織于載玻片中央。另取一塊載玻片，呈十字交叉壓在材料上，用拇指垂直按壓，將材料壓散，然后小心將兩塊載玻片分開，注意不能移動(dòng)材料的位置。此法中載玻片分離時(shí)很容易移動(dòng)，也會(huì)造成部分重疊、染色不均勻等現(xiàn)象，影響觀察。

3 改進(jìn)方法

根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果和學(xué)生的實(shí)際情況，對(duì)制片和染色這一步進(jìn)行改進(jìn)。取解離好的根尖，在載玻片上切取分生區(qū)部位的組織于1.5mL離心管底部，用玻璃棒將其搗碎，然后滴加染液，染色。最后用移液器吸取10μl滴于載玻片中央，蓋蓋玻片，輕壓即可觀察。此法既能保證細(xì)胞呈單層，染色均勻，又不會(huì)因染液用量過多而污染環(huán)境。該法用于學(xué)生遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中，學(xué)生很容易操作，效果很好，每次在有限時(shí)間內(nèi)，學(xué)生都能成功地觀察到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

圖1是初學(xué)者用三種方法制備大蒜根尖有絲分裂裝片的結(jié)果圖，從圖中可以清楚的看出經(jīng)典法染色不均勻；十字交叉法有重疊現(xiàn)象；改進(jìn)方法后背景清晰，染色效果良好，利于觀察。因此，該改進(jìn)方法適合在指導(dǎo)學(xué)生制備觀察染色體裝片實(shí)驗(yàn)中推廣應(yīng)用。

圖1 大蒜根尖不同制片方法的比較