烏司他丁對COPD合并免疫能力降低患者Treg和Th17細胞的調節作用

江萬倉

（三門峽市中心醫院RICU，河南 三門峽 472000）

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是以持續氣流阻塞、氣流受限為特點的慢性氣道炎癥反應綜合征，常反復發作，遷延難愈，最終可進展為呼吸衰竭或肺源性心臟病，嚴重影響患者預后[1]。近年來研究發現，較大部分COPD患者存在免疫功能紊亂，伴外周血T淋巴細胞數量異常[2]。且研究發現，T細胞介導的自身免疫應答在COPD病程中有重要作用[3]。調節性T細胞（Treg）與輔助性T細胞17（Th17）兩者平衡是維持機體免疫耐受，抑制自身免疫應答的條件，而毒性顆粒、氣體等持續刺激支氣管上皮，導致巨噬細胞、中性粒細胞聚集，進一步激活免疫反應，引起炎癥損傷及異常免疫修復，造成氣道重塑，引起不可逆氣流受限[4]。烏司他丁為廣譜蛋白酶抑哮喘制劑，屬人類內源性抑炎物質，抑酶譜廣，可抑制自由基及多種炎癥介質釋放，早期已被證實可減輕COPD患者氣道炎癥浸潤[5]。但烏司他丁對COPD患者免疫調節作用少見報道。本研究對我院收治的142例COPD合并免疫功能降低患者展開分析，探討烏司他丁對患者Treg、Th17細胞的調節作用，報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年3月—2017年4月我院收治的142例COPD合并免疫功能降低患者作為研究對象。納入標準：符合慢性阻塞性肺疾病全球倡議中COPD診斷標準[6]，且處于穩定期；外周血CD4+/CD8+比值低于正常值，伴免疫功能降低；伴氣流受限；入組近3個月內未使用糖皮質激素類藥物干預；獲得患者及家屬知情同意。排除標準：嚴重呼吸困難者；急性呼吸衰竭者；支氣管哮喘者；過敏性鼻炎者；意識模糊或昏迷者；需行機械通氣者；心肝腎器質性功能障礙者；合并嚴重腦血管疾病者；合并精神疾病者；合并自身免疫性疾病及免疫缺陷性疾病者；合并全身惡性腫瘤者；合并急慢性感染者；依從性差，無法配合治療者；妊娠及哺乳期女性；對研究用藥過敏者。其中男81例，女61例；年齡42～76歲，平均年齡（57.1±10.3）歲；病程2～10年，平均病程（3.6±1.5）年。按隨機數字表法將患者分為對照組與觀察組，各71例。對照組男39例，女32例；年齡43～76歲，平均年齡（58.3±9.9）歲；病程2～9年，平均病程（3.5±1.6）年。觀察組男42例，女29例；年齡42～75歲，平均年齡（57.9±10.2）歲；病程2～10年，平均病程（3.8±1.6）年。兩組性別、年齡等基線資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

對照組給予COPD基礎對癥處理，參照COPD診治指南[7]，予常規吸氧、化痰止咳、抗菌藥物預防感染、改善通氣、解痙等干預。觀察組在對照組基礎上加用注射用烏司他?。ㄉ唐访禾炱章灏?，廣東天普生化醫藥股份有限公司，國藥準字：H19990133）治療，10萬U+0.9%氯化鈉注射液100 mL，ivgtt，bid，兩組療程均為2周。

1.3 觀察指標

①療效觀察。兩組均于治療2周后觀察療效，參照文獻[8]制定評價標準，即顯效：咳嗽、咳痰、憋喘等癥狀及體征消失，肺功能基本正常，可從事輕體力勞動；有效：靜息狀態無憋喘，咳痰、咳嗽等體征改善，肺功能趨向正常；無效：癥狀及體征無改善，肺功能無變化或惡化。

②肺功能監測。治療前、治療2周均采用Vmax229型肺功能儀（美國森迪斯公司）監測患者肺功能的變化，記錄1秒用力呼吸容積（FEV1）、用力肺活量（FVC）、1秒用力呼吸容積占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）。③Treg、Th17細胞水平測定。治療前、治療2周均留取外周靜脈血，分離單個核細胞（PBMC），采用FACS Calibur型流式細胞儀（美國BD公司）測定Treg細胞、Th17細胞水平，試劑為別藻藍素（APC）標記的抗人CD3單克隆抗體、異硫氰酸熒光素（FITC）標記的抗人CD4單克隆抗體，藻紅蛋白（PE）標記的抗人CD25單克隆抗體，PE標記的抗人白介素-17A（IL-17A）單克隆抗體（均購自美國BD公司），數據分析采用Cell quest軟件及FCX Express 4軟件，并計算Th17/Treg比值。④免疫相關細胞因子水平。治療前、治療4周均留取空腹外周靜脈血，采用酶聯免疫吸附試驗法測定白細胞介素（IL）-6、IL-10、IL-17、轉化生長因子（TGF）-β水平，試劑盒均購自美國R&D公司，均嚴格參照試劑使用說明進行操作。⑤安全性觀察。監測兩組治療期間心肝腎肺功能的變化，統計治療不良反應發生情況。

1.4 統計學分析

采用SPSS 20.0軟件分析數據，計數資料以百分數（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療效果比較

觀察組治療總有效率為90.14%，明顯高于對照組的77.46%，差異有統計學意義（χ2=4.202，P＜0.05）。見表1。

表1 兩組治療效果比較

2.2 兩組治療前后肺功能指標比較

治療前，兩組肺功能指標比較差異無統計學意義（P＞0.05）；治療2周，兩組FEV1、FVC、FEV1/FVC較治療前均上升，且觀察組高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組治療前后Treg細胞、Th17細胞水平比較

治療前，兩組Treg細胞、Th17細胞水平及Th17/Treg值比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療2周，兩組Th17細胞水平及Th17/Treg比值較治療前降低，且觀察組低于對照組，Treg細胞水平較治療前上升，且觀察組高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 兩組治療前后免疫相關細胞因子水平比較

治療前，兩組IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療2周，兩組IL-6、IL-17、TGF-β水平較治療前降低，且觀察組低于對照組，IL-10水平較治療前上升，且觀察組高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 兩組治療不良反應發生率比較

兩組治療不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表5。

表2 兩組治療前后肺功能指標比較

表3 兩組治療前后Treg細胞、Th17細胞水平比較

表4 兩組治療前后免疫相關細胞因子水平比較

表5 兩組治療不良反應發生率比較

3 討論

早期研究發現，機體免疫功能紊亂，T淋巴細胞調節失衡是COPD發病的重要原因[9]。連玉菲等發現Th17、Treg介導的免疫失衡與COPD發病及進展有密切聯系[10]。有害物質進入氣道后損傷氣道上皮細胞，導致炎性細胞釋放大量炎癥因子，活化中性粒細胞、巨噬細胞等細胞因子，啟動自身免疫反應，導致免疫平衡破壞，引起免疫相關疾病。有臨床研究發現，COPD患者外周血Th17細胞呈絕對增加表現，而Treg細胞呈增加不足或減少表現[11]。其中Th17細胞通過分泌IL-6、IL-17等效應因子發揮作用，促進中性粒細胞活化，募集中性粒細胞及巨噬細胞，分泌多類炎癥因子，介導炎癥反應，促使中性粒細胞聚集于氣道，引起氣道反應，同時IL-17可通過刺激支氣管上皮細胞，上調黏液表達基因MUC5B表達，導致氣道黏液分泌失衡，引起COPD。而Treg細胞為關鍵的免疫調節因子，可分泌IL-10、TGF-β等抗炎因子，維持機體免疫耐受，拮抗Th17細胞水平上升所介導的炎癥反應[12]。Neukamm等研究發現，Treg細胞及其所分泌的效應因子可控制機體炎癥反應，預防自身免疫性疾病發病[13]。Th17/Treg細胞兩者免疫平衡在維持機體內環境穩定中有重要作用，而兩者免疫平衡破壞則可導致機體內環境失衡，引起自身免疫性疾病及感染性疾病發生。本研究發現，COPD患者伴免疫功能失衡，主要表現為Th17細胞水平上升，Treg細胞水平降低，Th17/Treg調節失衡，導致免疫相關細胞因子IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β呈高表達，而IL-10呈低表達，與毛剛等[14]研究結論相符，提示免疫調節紊亂可能參與COPD發病過程。

烏司他丁為人尿液分離并純化的廣譜蛋白酶抑制劑，為內源性抑炎藥物，抑酶譜較廣，可減少氧自由基及多種炎癥介質釋放，改善機體微循環及組織灌注。Wang等[15]發現，烏司他丁可阻斷炎癥因子與白細胞效應聯系，有明顯抗休克、抗炎效應，在膿毒癥患者救治中效果肯定。也有報道顯示，烏司他丁可調控紅細胞免疫，減少呼吸相關性肺炎發病風險[16]。Sheng等[17]表示，急性肺損傷、COPD其病理均表現為非特異性炎癥反應，而烏司他丁可下調C反應蛋白（CRP）、TNF-α等炎癥因子表達，減輕氣道炎癥浸潤，改善氧合指數，減輕肺間質纖維化和肺泡彌散功能[18]。但烏司他丁對COPD患者免疫功能的影響尚少見報道。本研究中，觀察組治療總有效率優于對照組，治療后肺功能指標、T淋巴細胞水平及免疫相關細胞因子水平改善幅度均優于對照組，主要表現為肺通氣功能改善，Th17細胞水平降低，Treg細胞水平上升，Th17/Treg免疫平衡改善，免疫相關炎性因子表達降低，抗炎因子表達上升，分析原因可能為烏司他丁可高效抑制參與氣道炎癥反應的多種酶表達，減輕肺組織炎癥反應程度，避免炎癥激活，阻止肺損傷進展，改善機體免疫功能。此外，進行安全性監測發現，兩組治療不良反應發生率比較差異無統計學意義，表明加用烏司他丁治療COPD伴免疫功能低下的安全性較高。

綜上所述，烏司他丁治療COPD合并免疫功能低下的療效理想，可促進患者Th17/Treg細胞調節平衡，改善機體免疫功能，減輕炎癥反應，且安全性好。