刺梨、山楂、綠豆飲料的降血脂作用研究

陳萍，譚書明，黃穎，陳小敏，宋長軍

（1.貴州大學釀酒與食品工程學院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省農畜產品貯藏與加工重點實驗室，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學生命科學學院，貴州 貴陽 550025）

常見降血脂的功效成分主要有膳食纖維[1]、黃酮類[2]、多糖類[3]、多酚類[4]、生物堿[5]及皂苷[6]等，刺梨（Rose roxbunghii）又名刺莓果、茨梨、木梨子，別名送春歸、刺菠蘿，是一種貴州特有的水果，富含多種活性成分，其VC含量比獼猴桃高9 倍[7]。鮮果中的黃酮具有降血脂作用，胡文堯等給動脈粥樣硬化模型大白兔灌胃刺梨汁，表明刺梨可能通過降低血脂質化氧化損傷防止動脈內膜粥樣化斑塊的形式[8]。簡崇東等研究發現腦梗死患者口服刺梨汁能有效改善患者的動脈粥樣硬化癥狀，降低患者的復發率，具有良好的臨床效[9]。Zhang C 等研究了刺梨汁對低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL-C）的體外氧化修飾和低密度脂蛋白誘導的巨噬細胞生長和細胞膽固醇酯（cholesteryl ester，CE）積累的影響[10]，發現刺梨汁可抑制 LDL 的氧化修飾和抑制泡沫細胞形成的能力。王勁紅等[11]用刺梨根等自擬五味降脂散，對高脂血癥有較好療效。崔俊英等[12]對刺梨原汁對不同時期的高脂血癥小鼠的影響進行了研究，證實刺梨原汁有較好的降血脂作用，不同時期的降血脂效果存在差異。山楂又稱山里紅、紅果果，屬于薔薇科山楂屬的一類植物[13]。山楂果實含有豐富的鈣、鐵、果膠及黃酮類物質，含量遠超其它鮮果[14]，其降血脂活性成分主要是黃酮類化合物[15]及山楂多糖類[16]，主要起降血脂作用的是黃酮類化合物。王玲等[17]發現山楂通過提高膽固醇7α-羥化酶的表達水平，抑制3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A 還原酶、酰基輔酶A 以及膽固醇酰基轉移酶的活性，增加低密度脂蛋白受體水平及通過調控多種脂肪代謝酶的機制調節血脂。綠豆是一種經濟作物，其中生物堿黃酮及蒽醌對高血脂癥有一定的抑制效果[18]。研究結果表明，煮沸和發芽改善了綠豆的可溶性纖維含量和降膽固醇潛力，可飲食調節（p＜0.05）由高膽固醇飲食引起的血清非高密度脂蛋白膽固醇濃度的增加和高密度脂蛋白膽固醇濃度的降低[19]。Keong 等研究發現發酵的綠豆降低高膽固醇血癥小鼠的血清脂質和肝酶譜[20]。

據中國衛生部、科技部和統計局于2016 年10 月聯合發布的《中國居民營養與健康現狀》稱，我國血脂異常患病率為18.6%，即估計全國血脂異常現患人數約1.6 億。不同類型的血脂異常患病率分別為高膽固醇血癥2.9%，高甘油三酯癥11.9%，低密度脂蛋白血癥7.4%。另有3.9%的人群膽固醇升高[21]。2012 年，慢性病引起的死亡占總死亡的79.4%[22]，而高血脂癥是是冠心病等心腦血管疾病重要的獨立危險因素之一[23]。本研究旨在利用天然食品資源經科學配方研發安全有效的降血脂飲料，同時，進一步發掘刺梨資源的綜合效應，提高刺梨產品的附加值，促進我省的刺梨產業良性發展，為食品企業刺梨加工產品提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

刺梨汁：貴州宏財聚農投資有限公司；山楂干、綠豆、豬油：貴州合力超市；膽固醇（食品級）：河南青羊生物科技有限公司；膽酸鹽（食品級）：河北格貝達生物科技有限公司；蛋黃粉（食品級）：亳州市紅日蛋制品有限責任公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL-C）測定試劑盒：南京建成科技有限公司。

SPF 級 22 g～24 g 的 KM 小鼠（合格證號：SCXK（遼）2015-0001）60 只，由遼寧長生生物技術股份有限公司提供。小鼠飼料：騰鑫科技有限公司；其余試劑均為分析純級。

1.2 儀器與設備

電熱恒溫水浴鍋（HH-S6 型）：北京科偉永興儀器有限公司；旋轉蒸發儀（R-201 型）：上海申勝生物技術有限公司；電子分析天平（FA22048 型）：奧豪斯儀器（上海）有限公司；紫外可見光分光光度計（UV-7502PC）：北京譜析通儀器有限責任公司；高壓萬能粉碎機（LD-Y300A 型）：上海頂帥電器有限公司；高壓均質機（GJJ-0.06/60 型）：上海諾尼輕工機械有限公司；臺式高速冷凍離心機（TGL20M 型）：長沙邁佳森儀器設備有限公司；循環水式多用真空泵（SHB-Ⅲ型）：鄭州世紀雙科實驗儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 山楂、綠豆提取液的制備

取適量山楂干在80 ℃～90 ℃水浴提取30 min，4層紗布過濾得濾液為山楂提取液；將綠豆浸泡12 h后，煎煮20 min（不要煮開花），4 層紗布過濾得濾液即為綠豆提取液。

1.3.2 高脂飼料的配方

77.8%基礎飼料（玉米、小麥、碎米60%，魚粉、雞肉粉、豆粕33%，魚油、葵花籽油3%，維生素、礦物質4%），10%豬油，10%蛋黃粉，1%膽固醇，0.02%膽酸鹽[24]（均為質量分數）。

突出云南特色，積極推動跨境人民幣業務創新是云南省沿金綜改的一大亮點。截至6月末，全省跨境人民幣結算業務覆蓋境外82個國家和地區，得益于相對穩定的邊貿結算，在邊境八省中位居第三位，在全國位居第十五位，人民幣在全省本外幣跨境收支中的占比36．34%，較上年同期提高3．1個百分點，人民幣繼續保持我省僅次于美元的第二大涉外交易貨幣和對東盟的第一大跨境結算貨幣。

1.3.3 建立小鼠高脂模型

KM 雄性小鼠 60 只，22 g～24 g 適應性喂養 1 周后按體重分組，隨機選擇一組作為空白組，其余組均喂養高脂飼料，均飲自來水，不限飲食。喂養1 個月可造成高血脂癥模型，按體重隨機分為3 組，分別為高脂模型組、陽性對照組、刺梨山楂綠豆組，空白組及高脂模型組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃辛伐他汀溶液（4 mg/kg），刺梨山楂綠豆組給予相應的飲料。每周稱重1 次，紀錄每天小鼠的采食量。給藥28 d 后摘眼球取血，檢測小鼠血清及肝臟TC、TG、HDL-C 水平評價其降血脂功效。

1.4 測定指標

1.4.1 小鼠體重和采食量測定

造模成功的小鼠重新分組后，紀錄各組小鼠每天的采食量，每周測1 次各組小鼠的體重，計算每周各組小鼠的飼料效率及體重增加量。

1.4.2 血清及肝臟總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）

總膽固醇、總甘油三酯是衡量機體內膽固醇代謝的重要指標。高密度脂蛋白是將肝臟外組織的膽固醇逆向轉運回肝臟的主要形式，小鼠灌胃第28 d 禁食不禁水，12 h 后摘眼球取血，靜置2 h 后于4 ℃，3 000 r/min離心10 min 取上清液存放在-20 ℃待分析；脫頸處死后剖取小鼠肝臟清洗稱重，后取相同部位肝臟制備10%肝臟勻漿。使用TC、TG、HDL-C 測定試劑盒進行檢測，具體操作見說明書，其下降率計算見下式。

式中：TC1、TG1、HDL-C1分別為高脂模型組 TC、TG、HDL-C 含量，mmol/L；TC2、TG2、HDL-C2分別為給藥組的 TC、TG、HDL-C 含量，mmol/L。

1.4.3 小鼠臟器指數的計算

小鼠灌胃28 d 后禁食不禁水，12 h 后稱取記錄小鼠體重，摘眼球取血后脫頸處死，剖取出小鼠的心臟、肝臟等部位，將肝臟經生理鹽水清洗后擦干稱重并記錄，臟器指數反映了小鼠器官的健康狀況，按下列公式計算臟器指數。

式中：w1為小鼠臟器總質量，g；w2為小鼠體質量，g。

1.4.4 小鼠盲腸內容物質量和盲腸壁表面積的測定

盲腸內容物質量=m1-m2

式中：m1為小鼠盲腸總質量，g；m2為小鼠盲腸壁質量，g。

小鼠灌胃28 d 后禁食不禁水，12 h 后稱取記錄小鼠體重，摘眼球取血后脫頸處死，剖取出小鼠的盲腸部位，稱重記錄，取出盲腸內容物后稱量盲腸壁的質量，將盲腸壁用生理鹽水洗凈后鋪展在坐標紙上，勾畫出盲腸壁的輪廓，干燥后將盲腸壁輪廓剪下來用千分之一的分析天平稱重（m1，g），1 cm2的打印紙稱重（m2，g）按下列公式進行計算[25]。

式中：m1為盲腸壁輪廓紙重，g；m2為 1 cm2打印紙重，g。

2 結果與分析

2.1 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠體重增量、小鼠采食量、飼料效率的影響

小鼠喂養期間體重變化見圖1。刺梨山楂綠豆飲料對小鼠體重增量、采食量、飼料效率的影響見表1。

在高脂小鼠飼養過程中，小鼠無異常死亡情況。高脂飼料喂養的小鼠與空白對照組小鼠相比，毛色暗淡，有掉毛現象。從表1及圖1可看出第1 周各組小鼠之間的體重無顯著性差異（p＞0.05），4 周后空白組小鼠的體重與其他各組出現了顯著性差異（p＜0.05），空白組小鼠的體重增量及采食量與高脂模型組存在顯著性差異（p＜0.05），說明喂養高脂飼料4 周后高血脂模型建立成功，第5 周開始給藥后小鼠體重波動幅度較大，逐漸趨于穩定，增長緩慢。各組之間的飼料效率差異均不顯著（p＞0.05）。

2.2 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟指數的影響

刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟指數的影響見表2。

圖1 小鼠喂養期間體重變化Fig.1 Body weight change during feeding

表1 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠體重增量、采食量、飼料效率的影響Table 1 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on body weight gain，feed intake and feed efficiency in mice

表2 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟指數的影響Table 2 Effect of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on liver index of mice

從表2可看出喂養普通飼料的小鼠肝臟總重顯著小于高脂飼料喂養的小鼠，說明高脂飼料會對小鼠肝臟產生一定的負擔，而陽性對照組及刺梨山楂率組對小鼠肝臟均有一定的減重作用，但未達到顯著性水平（p＞0.05），各組間的肝臟指數和心臟指數均無顯著性差異（p＞0.05），說明刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟健康無影響。

2.3 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠血清中TC、TG、HDL-C的影響

刺梨山楂綠豆飲料對小鼠血清中TC、TG、HDL-C的影響見表3。

表3 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠血清中TC、TG、HDL-C 的影響Table 3 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on serum TC，TG and HDL-C in mice

從表3中可看出高脂模型組的TC、TG、HDL-C 水平均顯著（p＜0.05）高于空白組，表明高脂模型成功建立。刺梨山楂綠豆飲料可顯著性（p＜0.05）降低小鼠的TC、TG 水平，較高脂模型組分別降低了42.28%，24.12%，刺梨山楂綠豆飲料組的HDL-C 水平較高脂模型組升高了21.96%。

2.4 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C的影響

刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C的影響見表4。

表4 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C 的影響Table 4 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on TC，TG and HDL-C in mice liver

從表4可看出刺梨山楂綠豆飲料對高血脂小鼠的TC 水平無顯著性影響（p＞0.05），對小鼠的 TG 水平有顯著性的降低（p＜0.05）較高脂模型組降低了46.35%。刺梨山楂綠豆組的HDL-C 水平較高脂模型組顯著性（p＜0.05）上升了77%。

2.5 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠盲腸組織的影響

刺梨山楂綠豆飲料對小鼠盲腸組織的影響見表5。

表5 刺梨山楂綠豆飲料對小鼠盲腸的影響Table 5 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on mice cecal

從表5中可看出刺梨山楂綠豆組的盲腸總重和盲腸內容物重顯著性（p＜0.05）高于空白組，喂養高脂飼料的小鼠盲腸總重及盲腸內容物重普遍高于喂養普通飼料的空白組，各組間的盲腸壁重及盲腸壁表面積沒有顯著性差異（p＞0.05）說明刺梨山楂綠豆飲料對盲腸組織的影響不大。

3 結論

本研究通過將刺梨、山楂、綠豆3 種常見的藥食同源具有降血脂功效的原料復合以期達到較為顯著的降血脂效果。喂養高脂飼料誘導小鼠建立高血脂癥模型，通過灌胃刺梨山楂綠豆飲料28 d 后，取出小鼠血清及肝臟測定其中的TC、TG、HDL-C 水平評價刺梨山楂綠豆飲料的降血脂效果。研究發現刺梨山楂綠豆飲料可通過顯著性（p＜0.05）降低小鼠血清的 TC、TG，分別降低了 42.28%，24.12%，顯著性（p＜0.05）升高血清及肝臟中的HDL-C 水平，分別升高了21.96%、77%，表明刺梨山楂綠豆飲料可通過調節血脂平衡達到良好的降血脂效果。