基因芯片檢測載脂蛋白E多態性與阿托伐他汀調脂關系

黃健中 陳冬萍 石艷 肖建民

在脂質代謝中，載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）作為配體與LDL受體（ApoE受體）結合，可影響血脂水平，尤其是LDL-C的重要遺傳因素之一[1]。但不同人群和個體，在控制血脂水平方面，存在著明顯的差異[2]。這種差異可能與不同個體間藥物受體基因多態性、藥物轉運蛋白基因多態性、藥物代謝酶基因多態性有關[3]。近年來，關于ApoE不同基因亞型對調脂藥物相關性研究有很多，特別針對他汀類藥物[4]。本研究擬觀察不同ApoE基因型高脂血癥患者，在應用阿托伐他汀前后的血脂水平的變化程度，以探討ApoE基因多態性對阿托伐他汀調脂作用的影響，為未來個體化治療方案建立供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象

入選標準：入選對象選自2017年3月—2018年3月在東莞市第五人民醫院心血管內科門診或住院患者301例，符合《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》[5]中的診斷標準，并符合以下條件之一：空腹血清檢查總膽固醇（TC）≥5.18 mmol/L或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）≥3.37 mmol/L。

1.2 排除標準

（1）近3月內服用過降脂藥物；（2）家族性高膽固醇血癥者或藥物引起的高脂血癥者；（3）存在內分泌相關疾病；（4）嚴重的肝、腎功能損害；（5）嚴重高血壓不能控制和/或未控制的糖尿病；（6）妊娠或準備懷孕、哺乳期婦女；（7）過敏體質及急性炎癥期患者；（8）有嚴重煙、酒嗜好者。

1.3 研究對象一般資料

所有研究對象采集個人信息如：年齡、性別、體質量、身高、家庭住址、聯系方式等，對患者病史資料進行問詢如：高血壓病史、冠心病病史、糖尿病病史、吸煙史等資料。

1.4 藥物治療

首次抽采外周血后開始服用阿托伐他汀鈣片，每次20 mg，每晚1次，飯后服。治療期間維持低脂飲食。

1.5 血液樣本采集與測定

所有研究對象均在空腹8 h后次日早晨抽采外周靜脈血6 mL。3 mL立即送化驗室應用全自動生化分析儀測定總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）低密度脂蛋白-膽固醇（Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C），并于第12周末空腹8 h抽采外周靜脈血3 mL復查上述指標。3 mL置于乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）管中，送中心實驗室于低溫冰箱中保存，3天內分離血清后用基因分型芯片法測定ApoE基因并分型。主要儀器及試劑：ApoE基因分型芯片法檢測試劑盒（珠海賽樂奇生物）；聚合酶鏈鎖反應（Polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（ABI2720）；基因芯片閱讀儀（Sinochips-PGA，珠海賽樂奇生物技術）。根據ApoE基因表型分型的結果進行分組。

1.6 基因分型

基因芯片可檢測出6種ApoE基因表型，本研究依據各基因表型的堿基對應位點將各基因表型分三組做比較，即為ε2（E2/2+E2/3）、ε3（E2/4+E3/3）和ε4（E3/4+E4/4）。

1.7 統計學分析

采用SPSS 23.0軟件進行統計分析，所有計量資料采用（s）表示，兩組間計量資料比較采用t檢驗，三組間計量資料采用ANVOA法分析比較，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 基因頻率的分布

301名高脂血癥患者中ApoE基因型分布如下：E2/2型2例，E2/3型50例，E3/3型205例，E2/4型8例，E3/4型34例，E4/4型2例。各基因表型基因頻率分布如下：E2/2型為0.66%，E2/3型為16.61%，E3/3型為68.11%，E2/4型為2.66%，E3/4型為11.30%，E4/4型為0.66%，見表1。通過計算，ApoE各等位基因ε2、ε3、ε4樣本數分別是52、213、36；等位基因頻率分別是：17.3%、70.8%、11.9%，見表2。ApoE基因表型E3/3占總數的68.11%，等位基因ε3比例為70.8%，分別為最常見的基因表型及等位基因型。

表1 ApoE基因表型分布

表2 ApoE等位基因分布

表3 各基因組合臨床資料比較

表4 各組治療前后血脂水平比較（mmol/L，

表4 各組治療前后血脂水平比較（mmol/L，

組別 TC TG LDL-C HDL-C 0周 12周 0周 12周 0周 12周 0周 12周ε2（52）ε3（213）ε4（36）F值P值5.52±0.38 5.21±0.43 5.37±0.35 3.08 0.214 9 4.03±0.21 5.12±0.25 4.29±0.23 529.76 0.000 0 2.26±0.17 2.42±0.19 2.33±0.19 0.99 0.610 3 1.97±0.14 2.11±0.13 2.08±0.14 303.11 0.000 0 3.20±0.22 4.22±0.25 3.57±0.23 1.48 0.476 0 2.32±0.17 3.95±0.21 2.65±0.18 33.40 0.000 0 1.59±0.11 1.55±0.10 1.48±0.10 0.79 0.672 4 1.91±0.13 1.65±0.11 1.68±0.12 107.62 0.000 0

2.2 不同基因組合間的一般資料比較

入選的高膽固醇血癥患者共301例，其中男性136例，女性165例，平均年齡（65.31±12.56）歲。各基因組合間的年齡、性別、BMI、高血壓、糖尿病等，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表3。

2.3 不同基因組合治療后血脂水平比較

所有研究對象治療前血脂水平差異均無意義（P＞0.05）。經12周阿托伐他汀治療后：（1）TC：ε2組優于ε3組、ε4組優于ε3組，數據對比差異存在統計學意義（P＜0.05），ε2組與ε4組間對比差異無統計學意義（P＞0.05）；（2）LDL-C：ε2組優于ε3組、ε4組優于ε3組，數據對比差異存在統計學意義（P＜0.05），ε2組與ε4組間對比差異無統計學意義（P＞0.05）；（3）HDL-C：ε2組優于ε3組、ε2組優于ε4組，數據對比差異存在統計學意義（P＜0.05），ε3組與ε4組對比差異無統計學差異（P＞0.05）；（4）TG治療后各組間數據比較均無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

3 討論

高脂血癥為臨床常見疾病，任意原因引起的膽固醇含量增高或甘油三酯含量增高，都稱之為高脂血癥[6]。高脂血癥可發展為動脈粥樣硬化，動脈粥樣硬化可引發心腦血管疾病。載脂蛋白E（ApoE）為一種主要在肝臟與大腦中合成的富含精氨酸的堿性蛋白，其主要參與人體脂質代謝、神經元重塑/修復、神經元突觸生長[7-8]。其在機體內分布較廣，外周血漿中ApoE由肝臟、腎臟、骨骼、卵巢、巨噬細胞合成，中樞神經系統中則由星形膠質細胞合成[9]。ApoE基因多態性與心腦血管疾病的可能發病機制為ε4基因攜帶組增加了腦淀粉樣病理改變，繼而引發心腦血管疾病[10]。

本研究結果提示ApoE3/3及ε3為最常見的基因表型和等位基因，這與目前其他研究顯示的基因頻率是相符合的[11]。本研究結果還發現，治療前各基因型組合間血脂水平差異無統計學意義。經12周阿托伐他汀治療后，ε3組TC均值水平高于其他2組；ε3組LDL-C均值水平同樣高于ε2組和ε4組；ε2組HDL-C均值水平高于其余2組。提示治療后攜帶ε3等位基因的患者血脂水平高于非攜帶ε3等位基因的患者，尤其表現在TC和LDL-C的血脂水平上。并通過對治療前后血脂變化程度的觀察中，我們可以發現治療前后TC、HDL-C、LDL-C的變化程度存在差異，ε2在降低TC、LDL-C的水平以及升高HDL-C方面，均優于ε3組。Gar cí a-o tí n AL等[12]發現，攜帶ε2等位基因的歐洲人群，服用阿托伐他汀后LDL-C下降較明顯，提示ApoE基因ε2與阿托伐他汀降脂效果有關。

綜上所述，他汀具有良好的調脂作用，其效果在一定程度上受到ApoE基因多態性的影響。若能明確這些基因與藥物療效差異的關聯性，對今后臨床用藥將具有指導意義，更好地為動脈粥樣硬化患者，尤其心腦血管疾病患者，起到早期針對性用藥，取得更好地疾病預防及治療作用。