牛結(jié)核病檢疫方法研究進(jìn)展核心探索

布于努爾其其格

摘 要 牛結(jié)核病作為一種比較嚴(yán)重的人畜共患疾病，會極大的影響畜牧業(yè)的生產(chǎn)，對人類健康造成嚴(yán)重威脅。同時，這是一種慢性消耗性疾病，廣泛流行于許多國家，為此需要做好與牛分支桿菌有關(guān)，為此做好檢疫工作至關(guān)重要。近年來，科學(xué)技術(shù)發(fā)展迅猛，關(guān)于該病檢疫方法的研究也取得了很大進(jìn)展。

關(guān)鍵詞 牛結(jié)核病；檢疫方法；研究進(jìn)展；核心探索

牛結(jié)核病是一種傳染疾病，可經(jīng)吸入含菌氣溶膠或食用受污染的乳制品而從牛傳染到人身上，這是一種最為古老的疾病，會對人類與動物健康而造成極大的威脅，且造成的經(jīng)濟(jì)損失無法估量[1]。當(dāng)下，該病在世界范圍內(nèi)的形式比較嚴(yán)峻，感染結(jié)核分枝桿菌的牛達(dá)5000萬頭，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失在30多億美元左右，更是很難精確的統(tǒng)計(jì)野生動物的帶菌情況。

1 抗酸染色法

病料涂片后進(jìn)行抗酸染色，使用顯微鏡對抗酸性桿菌進(jìn)行鏡檢，本菌細(xì)胞壁包含肽聚糖與特殊糖脂，革蘭氏染色在糖脂的干擾下很難進(jìn)行著染，但是對于30ml/L的石碳酸酒精脫色作用能夠進(jìn)行有效的抵抗，抗酸染色呈現(xiàn)紅色，齊尼二氏、熒光抗酸染色法均為主要的染色法。若抗酸性染色微生物存在于組織內(nèi)，且組織學(xué)病變比較典型，在此基礎(chǔ)上可進(jìn)行初步診斷。盡管抗酸染色法不會產(chǎn)生較高的陽性率，但是這是傳染檢測方法之一，具有一系列優(yōu)點(diǎn)，如假陽性率不高、價格便宜、操作簡單等，可在牛場中直接開展，因此所具有的實(shí)用價值較高[2]。

2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

關(guān)于分支桿菌的分離可以采用選擇性培養(yǎng)基，鑒定時可以再次進(jìn)行培養(yǎng)與生化試驗(yàn)，檢疫時可利用核酸探針與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。若存在其他特殊原因或培養(yǎng)物被污染的情況，則可以進(jìn)行豚鼠接種的方式，通過再次分離鑒定的方式證實(shí)。羅杰及其改良二氏培養(yǎng)基、小川與丙酮酸培養(yǎng)基比較常用，然而結(jié)核菌在上述培養(yǎng)基中的分裂時間較長，通常分裂一次需要14-15小時，由此會延長病原學(xué)檢查周五，菌落看到通常需要10-30天的時間，所取得陽性率不高，在臨床上不具備適用性[3]。

3 結(jié)核菌素皮內(nèi)試驗(yàn)

經(jīng)長期實(shí)踐證明，這種方法在牛結(jié)核病的檢測中最為可靠，且廣泛應(yīng)用到世界各國中，缺點(diǎn)在于對因感染其他分枝桿菌而致敏的動物檢測結(jié)果為陽性 ，不能對病情進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷，且因病情嚴(yán)重而造成免疫反應(yīng)不高的動物出現(xiàn)假陽性的可能性較大。同時，該試驗(yàn)消耗的人力較大，再加上檢驗(yàn)周期長，因此存在明顯滯后性。受DTH滯后效應(yīng)的影響，不能在一個月之內(nèi)重復(fù)使用該方法。

4 血清學(xué)診斷

關(guān)于分枝桿菌抗原循環(huán)抗體的檢測可以采用抗原抗體反應(yīng)，如熒光偏振檢測法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法等，這些都已經(jīng)建立且成功應(yīng)用。但是，所利用的抗原比較單一，在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法時使用的是雞尾酒或重組抗原，導(dǎo)致很難取得良好的試驗(yàn)結(jié)果，所取得的特異性與靈敏度并不理想，與預(yù)期目標(biāo)之間仍然存在很大差距[4]。

5 檢測菌體成分

該技術(shù)所使用的細(xì)菌培養(yǎng)物量非常少，只需要10-15mg，相比較于傳統(tǒng)生化鑒定方法具有顯著優(yōu)點(diǎn)，如操作簡單、快速等，可以作為一種可靠的替代方法，還有學(xué)者使用過氧化酶標(biāo)記的單克隆抗體，其優(yōu)點(diǎn)在于成本低、操作簡單、檢測速度快等，缺點(diǎn)為受標(biāo)本采集與病程影響大，不利于提高準(zhǔn)確率。

6 淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)

在特異性抗原的刺激下，致敏外周血淋巴細(xì)胞會導(dǎo)致抗原特異性T淋巴細(xì)胞亞群出現(xiàn)增生反應(yīng)。采用同位素來標(biāo)記DNA合成的某種核苷酸；通過對外周血循環(huán)增生淋巴細(xì)胞比例的測定，便于對具體增生程度進(jìn)行準(zhǔn)確了解，由此可以將細(xì)胞被特異性抗原致敏情況間接反映出來。這種方法盡管能夠?qū)ε＝Y(jié)核個體發(fā)病與免疫情況進(jìn)行有效的監(jiān)測，但是不適用于檢測規(guī)模較大的疫情[5]。

7 細(xì)胞因子及其受體檢測法

這類方法的原理主要體現(xiàn)在通過對抗原刺激活化后分泌的T淋巴細(xì)胞活化標(biāo)記分子的檢測，可準(zhǔn)確判斷機(jī)體對某種病原的具體致敏情況，進(jìn)而判斷是否感染該病原。相比較于PPD皮內(nèi)試驗(yàn)具有顯著優(yōu)勢，即反應(yīng)早、試驗(yàn)迅速且靈敏度高。

8 結(jié)束語

由于分子生物學(xué)的檢測離不開特殊儀器設(shè)備的幫助，再加上具有相對復(fù)雜的技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室條件與操作人員的要求普遍較高，因此很難在大范圍內(nèi)推廣。免疫法檢測相對比較簡單可靠，但是因試劑比較昂貴，大規(guī)模實(shí)施成本高，為此需要一段時間才能推廣開來。

參考文獻(xiàn)：

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[2]王東梅. 淺談牛結(jié)核病的癥狀及防治[J]. 農(nóng)民致富之友，2012，20：150.

[3] 王金果，劉愛林，周向梅，苑方重，尹曉敏，楊建民，楊利峰，趙德明. 牛結(jié)核病診斷方法的研究進(jìn)展[J]. 中國畜牧獸醫(yī). 2010（07）.

[4] 馮向輝，王建永，包永占，趙月蘭，左玉柱，秦建華. 牛結(jié)核膠體金免疫層析快速診斷方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010（02） .

[5]杜海力. 探討牛結(jié)核病的診斷與防治 [J].中國畜牧，2016，（12）：95-97.