TLRs在口腔癌細胞中的表達及臨床意義

王雪麗　劉俊輝

【摘要】 目的：探究TLRs在口腔癌細胞中的表達及與臨床的關系。方法：收集筆者所在醫院口腔科2014年10月-2015年10月因口腔癌行手術治療的患者32例為口腔癌組，總結口腔癌患者性別、年齡、腫瘤大小、分級等信息，并對患者進行術后隨訪。納入同期入院的正?？谇火つせ颊?2例為對照組。采用qRT-PCR檢測腫瘤組織中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表達，并與腫瘤大小、預后行相關性分析。結果：口腔癌組TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表達均顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）?？谇话┙M織中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的mRNA水平的表達與口腔癌腫瘤大小呈正相關，與生存時間呈負相關，差異均有統計學意義（P<0.05）。口腔癌組織中TLR1、TLR3、TLR7的mRNA水平的表達與口腔癌腫瘤大小、生存時間無明顯相關性（P>0.05）。

結論：TLR1-8亞型在口腔癌患者中的表達異常升高，且TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表達與腫瘤大小呈正相關，與患者生存期呈負相關。

【關鍵詞】 口腔癌; Toll樣受體; 表達; 相關性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.14.028 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）14-00-03

The Expression and Clinical Significance of TLRs in Oral Cancer Cells/WANG Xueli，LIU Junhui.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（14）：64-66

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of TLRs in oral cancer cells and its relationship with clinic.Method：32 patients with oral cancer who underwent surgical treatment in author's hospital from October 2014 to October 2015 were collected，and as the oral cancer group.The information of sex，age，tumor size and grade of oral cancer patients were summarized，and the patients were followed up.32 patients with normal oral mucosa admitted to the hospital during the same period as the control group.The expression of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 in tumor tissues were detected by qRT-PCR.The correlation analysis was performed between the expression of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 and the tumors size and prognosis.Result：The mRNA levels of TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7 and TLR8 in the oral cancer group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）.The expression of TLR2，TLR4，TLR5，TLR6 and TLR8 in oral cancer tissues was positively correlated with the size of oral cancer and negatively correlated with the survival time，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of TLR1，TLR3 and TLR7 in oral cancer tissues had no significant correlation with the size and survival time of oral cancer（P>0.05）.Conclusion：The expression of TLR1-8 subtypes is abnormally high in patients with oral cancer，and the expressions of TLR2，TLR4，TLR5，TLR6 and TLR8 are positively correlated with the size of tumors and negatively correlated with the survival time of patients.

【Key words】 Oral cancer; TLRs; Expression; Correlation

First-authors address：Hubei Province Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Wuhan 430015，China

口腔癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，病理分級多屬中、高分化癌，區域性淋巴轉移率高，而全身遠位轉移率較低，對放、化療敏感性差[1]。原發灶的失控是導致患者死亡的主要原因，各期平均5年生存率在50%～60%，故探討有效的治療方法是臨床面臨的重大課題[2]。Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）是一類Ⅰ型跨細胞膜受體[3]。TLRs與多種內源性分子結合后可啟動核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）途徑，NF-κB在腫瘤發病和發展過程中起著關鍵作用，它能夠控制黏附分子、細胞因子和生長因子等一些基因的表達，激活免疫反應及炎性反應，釋放大量的細胞因子及炎性反應趨化因子，形成適合腫瘤生長的微環境，促進腫瘤的發生、發展[4-5]。因此，探究TLRs在口腔癌細胞中的表達及與臨床的關系具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在醫院口腔科2014年10月-2015年10月因口腔癌行手術治療的病例32例。納入標準：（1）術前資料、術中及術后病理診斷均確診為口腔癌;（2）術前未行放化療;（3）不合并其他口腔疾病;（4）無其他系統腫瘤病史或放化療病史?？谇话┙M患者平均年齡（32.6±12.3）歲;男23例，女9例;腫瘤

0.4～4.7 cm，平均（1.5±2.4）cm;分級：1級11例，2級11例，3級10例;術后3年內腫瘤相關死亡18例，術后3年內非腫瘤相關死亡2例。納入同期入院的正?？谇火つせ颊?2例為對照組，平均年齡（32.9±14.8）歲;男22例，女10例。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。本研究獲得患者及家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

（1）總結口腔癌患者性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期等信息，并對患者進行術后隨訪，隨訪至2018年10月31日。（2）獲得樣本。嚴格按照RNAgent Isolation System說明書，抽提總RNA。取1 μg總RNA，嚴格按照逆轉錄試劑盒說明書將總RNA逆轉錄成cDNA。PCR反應在PE公司GeneAmp8 5700型PCR擴增儀上進行，嚴格按照SYBR green說明書加樣，總反應體系20 μl，各樣本加cDNA 2 μl;SYBR green 10 μl;商品化引物2 μl[TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8（上海生工）;GAPDH（MQP027158，Genecopoeia公司）];RANase Rree去離子水2 μl。按兩步法反應94 ℃、30 s，58 ℃、30 s，反復40個循環以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內參照進行分析。

1.3 統計學處理

應用SPSS 20.0統計軟件分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗;兩組均滿足正態分布的定量資料采用Pearson相關檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TLRs在mRNA水平的表達比較

口腔癌組TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8的mRNA水平的表達均顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 TLRs表達與口腔癌腫瘤大小相關性分析

口腔癌組織中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的mRNA水平的表達與口腔腫癌瘤大小呈正相關，差異均有統計學意義（P<0.05）?？谇话┙M織中TLR1、TLR3、TLR7在mRNA水平的表達與口腔癌腫瘤大小無明顯相關性，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.3 TLRs表達與生存時間相關性分析

口腔癌組織中TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8在mRNA水平的表達與生存時間呈負相關，差異有統計學意義（P<0.05）。口腔癌組織中TLR1、TLR3、TLR7在mRNA水平的表達與生存時間無明顯相關性，差異無統計學意義（P>0.05），見表3。

3 討論

TLRs是近年來發現的Ⅰ類跨膜信號傳遞受體，在先天免疫中通過識別病原體相關分子模式，調節吞噬細胞特異性識別抗原，誘導炎癥因子和細胞因子的合成中發揮重要作用[6]。自1997年Medzhitov發現第一個與果蠅同源的人Toll樣受體蛋白以來，至今在人類和鼠類中分別發現10和13種類型[7]。在結腸癌、膠質瘤等多種惡性腫瘤中的研究均表明，TLRs的異常表達與腫瘤的發生發展密切相關[8]。但是TLRs在口腔癌中的作用鮮有文獻報道。通過此次的研究表明，TLRs家族中的TLR1-8亞型在口腔癌中的表達均明顯升高，且顯著高于健康人群。

Virchow等于100多年前就提出了腫瘤起源于慢性炎癥反應的假說。目前研究表明，TLRs家族可以通過持續激活NF-κB信號途徑，導致慢性炎性反應持續存在，進而發展為惡性腫瘤[9]。TLRs通過與相應配體結合，啟動下游的Myd88依賴/Myd88非依賴兩條信號途徑，進一步激活下游的SPNK/JNK、p38MAPK、ERK1/2信號通路，從而激活轉錄因子激活子蛋白-1（activator protein-1，AP-1）、NF-κB等，啟動炎癥因子及炎癥趨化因子的轉錄，使腫瘤細胞合成釋放TNFα、IL-6、IL-8等炎癥因子與炎癥趨化因子，促成腫瘤微環境[10]。同時，腫瘤細胞釋放的大量細胞因子可作用于免疫細胞，抑制免疫細胞發揮作用，進而產生免疫逃逸[11]。因此，在非小細胞肺癌、結腸癌、宮頸癌中的研究均表明，TLRs的表達與腫瘤大小、患者預后密切相關[12-13]。本研究亦證實，TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表達與患者生存時間呈負相關，TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8表達越高，患者生存期越短，這亦與既往的研究符合。但是，此次的研究發現TLR1、TLR3、TLR7的表達與生存時間無明顯相關性，這仍有待進一步探討。

綜上，本研究表明TLR1-8亞型在口腔癌中的表達異常升高，且TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8的表達與腫瘤大小呈正相關，與患者生存期呈負相關。

參考文獻

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（收稿日期：2018-12-14）