一例網狀內皮組織增生癥高抗體蛋雞子代垂傳檢測報告

薛曉陽 （華裕農業科技有限公司 河北 邯鄲 056000）

賀凱麗 張向文 王娟娟 趙姍姍 孔肖肖 秦曉麗 王雨蒙

（河北省蛋雞產業技術研究院 河北 邯鄲）

河北一蛋雞場REV抗體檢測異常，選擇30只蛋雞，進行血清REV抗體檢測，全血REV病原檢測，同時固定雞只所產種蛋入孵，出雛雛雞進行肝臟和全血REV病原檢測，檢測結果種雞血清抗體滴度平均值在10000左右，病原檢測陰性，出雛雛雞全血及肝臟REV病原檢測均為陰性。得出結論該REV抗體滴度陽性雞群子代0日齡檢測為陰性，無垂傳現象。

網狀內皮組織增殖癥是由網狀內皮組織增殖病病毒(REV)引起的鴨、火雞、雞和野禽的一組癥狀不同的綜合征。包括免疫抑制、致死性網狀細胞瘤、生長抑制綜合征(矮小綜合征)以及淋巴組織和其他組織的慢性腫瘤[1]。目前養殖企業會定期進行REV抗體檢測，以評估雞群感染壓力。在集約化養殖場實行管理上的防疫措施只能在一定程度上減少禽網狀內皮組織增生病病毒的感染機會，但并不能保證雞群呈陰性狀態，同時查閱國內流行病學調查顯示全國有一定的流行。張丹俊等對安徽省不同地區9個雞場、7個不同地方品種雞471份血清樣本中有250份為陽性，全省7個不同地方品種雞總體個體陽性感染率高達53.1%；被檢的9個雞場中均有陽性感染雞群，被檢雞場陽性感染率為100%；不同雞場的不同批次差異較大[2]。崔治中等[3]對來自全國從南到北5省市9個公司100個雞群的約2400份血清樣品的ELISA檢測表明，有60%以上的雞群在不同時期感染過REV，不同地區不同雞群的REV抗體陽性率從0到100%不等，平均約為20%，綜上表明雞群REV感染較為普遍。針對REV病源檢測核酸探針方法是一種快速、靈敏、特異性強的檢測技術，操作簡單，結果易于判定，是目前常用的分子生物學診斷技術，也是本次試驗的主要應用方法[4]。主要針對篩選出的REV抗體陽性雞只進行種蛋入孵，以評價是否垂傳，以此進行調查，為種蛋的使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 陽性雞只 從種雞場選擇REV抗體陽性雞只30只，品種為海蘭褐蛋雞，日齡153d該場區多次檢測陽性率為100%，但雞群生產指標正產，雞群解剖無REV癥狀存在。

1.2 試劑 RNA 提取試劑盒，OMEGA品牌，批號R6874-02，反轉錄試劑盒Takara 品牌，批號A112361A，2*PCR mix天根品牌，批號R7129。REV抗體檢測試劑和，IDEXX產品，批號：FP466斑點雜交試劑，由山東農業大學腫瘤研究重點實驗室提供。

1.3 設備 溫箱，樹立儀器、烘箱，樹立儀器、冷凍離心機、水浴鍋、PCR儀，伯樂T100，孵化器。

1.4 引物 REV-FGGACTCAATTCCCGTAT-CA GA， REV-R TCTTCCCAGCGACCTTTAC，片段大小為775bp，擴增條件為REV：體系為25μl，上下引物各μl，mix 12.5μl，模板2μl，雙蒸水9.5μ，反應條件為95℃，5min；31個循環(95℃，30s；58℃，30s；72℃，1min20s)72℃，10min[4]。

1.5 斑點雜交方法 參照山東農業大學腫瘤重點實驗室方法[5]。

1.6 試驗方法 （1）蛋雞檢測：采集30只種雞血清進行REV抗體檢測。采集全血進行斑點雜交檢測。（2）種蛋檢測：單籠固定雞只，收集受精種蛋30枚進行入孵，21d出殼后取肝臟和全血檢測REV病毒方法為PCR+斑點雜交。

2 試驗結果

2.1 種雞血清檢測結果 見表1。

表1 試驗用雞REV抗體檢測結果

2.2 種雞REV核酸檢斑點雜交檢測結果 見表2。

表2 試驗用種雞REV核酸病原檢測結果

2.3 孵化結果 孵化種蛋30枚，出雛28只，雞只聲音宏亮，體重在初產蛋體重范圍之內。

3 結果

（1）種雞REV抗體檢測，從檢測結果得出抗體幾何平均值為10378，最大值為19317，最小值為4132，因國內目前無REV疫苗免疫，確定雞群受到REV感染，并且抗體滴度值較高，表明接觸REV病原時間較長。（2）同時對種雞進行REV核酸檢測，方法PCR+斑點雜交，從檢測結果得出在REV高抗體存在的情況下，機體進行REV檢測，病原檢測呈陰性。（3）對出雛雛雞全血和肝臟進行病源檢測，結果均為陰性，同時出雛數據均正常，孵化率為93.3%，出雛重量及均勻度良好。

4 討論

（1）雞群REV高抗體存在，且陽性率100%是該場區的一個特點，針對該種雞場情況進行相關試驗，從檢測結果可以看出在抗體滴度達到10000左右的時候，垂傳為零。但造成該狀況的原因尚無定論，雞痘病毒(FPV)野毒和疫苗毒整合禽網狀內皮組織增殖病病毒(REV)全基因或基因片段的現象普遍存在，由此引起的生物風險分析已成為許多研究學者關注的焦點，并且有臨床報到禽痘疫苗污染引起的病例[6-7]。但疫苗污染后群體抗體水平會達到多少陽性率無相關報到。（2）種雞群抗體滴度在10000左右從孵化及種雞生產分析來看對生產影響不大，但需要后續跟蹤子代生產成績，更加深入的進行評判。同時要對場區高陽性率來源進行原因查找。（3）研究表明多數雛雞容易在早期感染REV，且易產生耐受性病毒血癥，維持長期的病毒血癥卻不產生抗體，同時成為雞群內REV的傳染源[8]，因此，下次試驗會結合雛雞的REV抗體走勢及生產成績進行綜合評判，結合此次結果初步判斷高抗體陽性雞只0日齡雛雞無REV檢出，為是否發生垂傳提供初步判斷。

5 結論

從種雞生產情況得出，種雞REV抗體10000的滴度水平，雞群病原檢測陰性，對應種蛋入孵，雛雞產品檢測無REV病原檢測到，總體良好，至此得出REV高抗體雞群種蛋無垂傳現象。