氣相色譜法檢測黃瓜和土壤中氟唑活化酯殘留

張春榮，郭鈐，孔麗萍，徐玲英

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準研究所 省部共建國家重點試驗室培育基地 浙江省植物有害生物防控重點實驗室 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測重點實驗室，浙江 杭州 310021)

氟唑活化酯，化學(xué)名稱為2,2,2-三氟乙基苯并[1,2,3]噻二唑-7-甲酸酯，是由華東理工大學(xué)開發(fā)的創(chuàng)制農(nóng)藥產(chǎn)品，上海泰禾化工有限公司享有專利化合物獨家使用權(quán)，并與華東理工大學(xué)產(chǎn)學(xué)研合作開發(fā)工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)。氟唑活化酯是一類新型的植物誘導(dǎo)抗病激活劑，本身沒有殺菌活性，但在活體植物上能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對侵染病菌的抗性[1]，對水稻白葉枯病、水稻稻瘟病、瓜類炭疽病和瓜類白粉病均具有誘導(dǎo)抗病活性[2]。目前，我國政府批準的氟唑活化酯的登記作物和防治對象為黃瓜白粉病；但我國、CAC(國際食品法典委員會)、歐盟、美國、日本等均未制定黃瓜上氟唑活化酯的最大殘留限量值。關(guān)于氟唑活化酯的誘導(dǎo)抗病機理，目前已有不少研究報道[3-6]。在檢測方法上，覃柳瓊等[1]建立了高效液相色譜法測定氟唑活化酯含量的方法，但關(guān)于其殘留檢測方法尚未見任何報道。為評價氟唑活化酯使用的安全性，有效防止和減少其對農(nóng)作物和環(huán)境的污染，并為制定氟唑活化酯在黃瓜中的最高允許殘留限量提供參考依據(jù)，特開展氟唑活化酯在黃瓜和土壤樣品中殘留量檢測的氣相色譜方法研究，并在浙江杭州、山東淄博和湖北武漢3地開展了2 a的田間殘留檢測試驗。該方法準確、凈化分離效果好、靈敏度高。現(xiàn)總結(jié)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥劑：5%氟唑活化酯乳油，由南通泰禾化工有限公司提供。99.0%氟唑活化酯標準品，由南通泰禾化工有限公司提供。乙腈、氯化鈉、乙酸乙酯、石油醚(60～90 ℃沸程)、無水硫酸鈉，均為分析純；弗羅里硅土，650 ℃烘4 h，5%水脫活，分析純。試驗用水為超純水。

試驗作物：黃瓜。

試驗儀器：Shimadzu GC-2010 Plus型GC-ECD(氣相色譜電子捕獲檢測器)，日本島津；AB104-S電子天平(0.000 1 g)，梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司；R201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申勝生物技術(shù)有限公司；HH-4恒溫水浴鍋，江蘇金壇市江南儀器廠；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵，鞏義市子華儀器責任公司；SPN402F型電子天平(0.01 g)，梅特勒-托利多(常州)測量技術(shù)有限公司；W201B型數(shù)控恒溫浴鍋，上海申勝生物技術(shù)有限公司；DHZ-DA全溫型大容器恒溫振蕩器，太倉市試驗設(shè)備廠。

1.2 田間試驗

1.2.1 施藥

消解動態(tài)。施藥時期為黃瓜果實生長至成熟個體一半大小時，施藥時應(yīng)保證用于動態(tài)試驗的黃瓜均勻著藥。小區(qū)面積15 m2，施藥劑量為制劑量1 666.7倍液(30 mg·kg-1)，施藥后2 h和1、3、5、7、10、14、21、28 d采集黃瓜和土壤樣本。

殘留量。設(shè)2個施藥劑量：低劑量，制劑量2 500倍液(20 mg·kg-1)；高劑量，制劑量1 666.7倍液(30 mg·kg-1)。各設(shè)5～6次施藥，小區(qū)面積30 m2。黃瓜定植苗后第一次用藥，施藥間隔期7 d。采樣時距離最后一次施藥的間隔分別為3、5、7 d。

試驗另設(shè)清水空白對照。以上所有處理均重復(fù)3次，處理間設(shè)保護帶。

1.2.2 樣本采集

用隨機方法在試驗小區(qū)內(nèi)不同方向及不同部位采集6份以上(不少于2 kg)生長正常、無病害、成熟的黃瓜樣本；并在試驗小區(qū)內(nèi)隨機取點6～12個，用土鉆采集0～15 cm的地表土(動態(tài)采集0～10 cm)1～2 kg，除去碎石、雜草和植物根莖等雜物。將以上樣本裝入樣品袋中包扎妥當，同時采集對照區(qū)樣本。

1.2.3 樣品制備與保存

田間樣本采集后8 h內(nèi)運回實驗室。黃瓜田間樣本用不銹鋼刀切成1 cm大小的碎塊，充分混勻后用四分法縮分黃瓜及土壤樣品，分取兩份150 g的樣品，裝入封口樣品容器中，貼好標簽，貯存于-20 ℃冰柜，待測。

1.3 樣品分析

1.3.1 標準溶液配制

準確稱取99%的氟唑活化酯標準品0.010 1 g于100 mL容量瓶中，用石油醚配成濃度為100 mg·L-1的標準儲備溶液，吸取1.0 mL于10 mL容量瓶中，石油醚定容，得到10.0 mg·L-1的氟唑活化酯標準工作溶液，再分別稀釋成0.001、0.002、0.005、0.010、0.020 mg·L-1的系列濃度氟唑活化酯標準溶液。

1.3.2 提取

稱取樣品(黃瓜、土壤)各20 g(精確到0.01 g)，放入250 mL錐形瓶中，加入50 mL乙腈振蕩30 min，提取液經(jīng)布氏漏斗抽濾，濾液轉(zhuǎn)入裝有10 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，充分搖勻2 min，靜置15 min，取上清液5 mL到250 mL平底燒瓶中，在40 ℃水浴條件下濃縮近干，待凈化。

1.3.3 凈化

在玻璃層析柱內(nèi)依次加入2 cm高的無水Na2SO4、4 g弗羅里硅土、2 cm高的無水Na2SO4，用10 mL石油醚預(yù)淋層析柱，棄去淋洗液。

將以上提取物用10 mL石油醚溶解洗滌3次，移入層析柱中，用10 mL石油醚-乙酸乙酯(體積比95∶5)淋洗，棄去淋出液，再用20 mL石油醚-乙酸乙酯(體積比90∶10)洗脫，收集洗脫液，在40 ℃水浴條件下濃縮干，用5 mL石油醚定容待測。

1.3.4 色譜條件

色譜柱：RTX-1701(30 m×0.320 mm×0.25 μm)；氣體流量恒壓：100.0 kPa；載氣：氮氣，流量60.0 mL·min-1；進樣口溫度：250 ℃，不分流進樣；檢測器溫度：300 ℃；基座溫度：280 ℃。程序升溫：150 ℃，0.5 min；25 ℃·min-1升溫至260 ℃，保持3 min；再20 ℃·min-1升溫至280 ℃，保持5 min。進樣量：1.0 μL；尾吹：30 mL·min-1。外標法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的繪制

用石油醚準確配制0.001、0.002、0.005、0.010、0.020 mg·L-1的系列濃度氟唑活化酯標準溶液，按前述色譜條件測定，以峰面積(y)-濃度(x)繪制標準曲線，經(jīng)最小二乘法擬合，得回歸方程y=11 741 408.789 4x+4 776.693 2(R2=0.999 2)，標準曲線呈良好的線性關(guān)系，可見，氟唑活化酯在0.001～0.02 mg·L-1范圍內(nèi)，含量與色譜峰面積呈顯著的線性關(guān)系，可滿足定量分析的需要。

2.2 方法的準確度、精密度和靈敏度

2.2.1 方法的準確度和精密度

采用添加回收率和變異系數(shù)(RSD)表示此方法的準確度及精密度。在黃瓜和土壤空白樣品中添加3檔濃度的氟唑活化酯標準溶液，每檔重復(fù)5次，測定回收率(表1)。當黃瓜、土壤中氟唑活化酯的添加濃度為0.02、0.2、2.0 mg·kg-1時，黃瓜中的回收率為95.5%～97.4%，RSD為1.7%～4.5%；土壤中的回收率為92.1%～106.8%，RSD為1.7%～6.1%。說明分析數(shù)據(jù)準確可靠，可滿足農(nóng)藥殘留檢測要求。

2.2.2 方法的靈敏度

采用最小檢出量和最低檢出濃度來表示此方法的靈敏度。儀器對氟唑活化酯的最小檢出量為1.0×10-12g；方法對黃瓜及土壤樣品中氟唑活化酯的最低檢出濃度均為0.02 mg·kg-1。

表1 氟唑活化酯在黃瓜和土壤中的平均添加回收率

2.3 氟唑活化酯在黃瓜和土壤基質(zhì)中的消解動態(tài)和最終殘留

以施藥劑量30 mg·kg-1噴施5%氟唑活化酯乳油1次，浙江點、山東點和湖北點3地2 a樣品中僅在藥后2 h黃瓜樣品中檢測到氟唑活化酯，其含量為0.020～0.045 mg·kg-1，土壤樣品中氟唑活化酯均未檢出(<0.020 mg·kg-1)，表明氟唑活化酯在黃瓜和土壤中消解較快。

以低劑量(20 mg·kg-1)和高劑量(30 mg·kg-1)分別噴施5%氟唑活化酯乳油5次和6次，施藥間隔期均為7 d，距離最后一次噴藥3、5、7 d采樣測定黃瓜和土壤中氟唑活化酯的殘留量。浙江點、山東點和湖北點黃瓜和土壤樣品中氟唑活化酯均未檢出(<0.020 mg·kg-1)。說明用5%氟唑活化酯乳油防治黃瓜白粉病，用藥量20～30 mg·kg-1，施藥5～6次，施藥間隔7 d，距最后一次施藥3 d采樣，采收的黃瓜樣品是安全的。氟唑活化酯在土壤中消解較快，不易對周圍環(huán)境及地下水造成風險。

3 小結(jié)

建立了一種基于氣相色譜檢測黃瓜和土壤中氟唑活化酯的分析方法。結(jié)果表明，該方法的靈敏度、精密度和回收率等均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。氟唑活化酯在黃瓜和土壤中消解較快，不易對周圍環(huán)境及地下水造成風險。5%氟唑活化酯乳油，用藥量20～30 mg·kg-1，施藥5～6次，施藥間隔7 d，距離最后一次噴藥3 d時黃瓜和土壤中氟唑活化酯殘留量均<0.020 mg·kg-1，無殘留風險。