HPLC法測定纈沙坦膠囊中纈沙坦的含量及有關物質

陳 莉 劉秀娟 張玉霖*

（湖北科技學院藥學院，湖北 咸寧 437100）

纈沙坦為是血管緊張素受體拮抗劑，具有良好的抗高血壓作用，可用于各種類型高血壓，并對心腦腎有較好的保護作用。選擇性地作用于AT1受體亞型，阻斷AngⅡ與AT1受體的結合，從而抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產生降壓作用[1]。纈沙坦的含量測定與有關物質檢查主要采用高效液相色譜法，本文參考了相關文獻[2-5]建立了同時測定纈沙坦膠囊中纈沙坦的含量測定及有關物質的檢查方法，為纈沙坦及有關質劑的質量標準研究提供參考依據。

1 儀器與試藥

高效液相色譜系統（北京清博華科技有限公司，LC300），電子天平（上海越平科學儀器有限公司，FA2004B）。

纈沙坦對照品（中國食品藥品檢定研究院，100651-201604，純度98.6%），纈沙坦雜質Ⅱ對照品（中國食品藥品檢定研究院，510066-201401，純度99%），纈沙坦膠囊（海南奧美華制藥有限公司，批號：180401；湖北千金湘江藥業股份有限公司，批號：160804），乙腈、甲醇為色譜純，其他為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2 色譜條件

Hypersil ODS色譜柱：（250 mm×4.6 mm，5 μm）；梯度洗脫：0（40∶60∶0.1），10 min（40∶60∶0.1），25 min（70∶30∶0.1），32 min（70∶30∶0.1），33 min（40∶60∶0.1），38 min（40∶60∶0.1）；檢測波長為250 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。纈沙坦膠囊與其對照品色譜圖見圖1。

3 方法的專屬性考察

3.1 溶液配制：未破壞試樣：取膠囊纈沙坦（80 mg），加流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含0.5 mg的溶液，作為未破壞供試品溶液。

纈沙坦雜質Ⅱ對照試樣：精密量取纈沙坦雜質Ⅱ對照適量，加流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含5 μg的溶液，作為纈沙坦雜質Ⅱ對照溶液。

酸破壞試驗：取本品細粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入1 mol/L的HCl溶液3 mL，置80 ℃水浴中加熱約30 min，放冷至室溫，用1 mol/L的NaOH調pH至中性，加流動相稀釋定容至50 mL，搖勻。

堿破壞實驗：取本品細粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入1 mol/L的NaOH溶液3 mL，置80 ℃水浴中加熱約30 min，放冷至室溫，用1 mol/L的HCl調pH至中性，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

高溫破壞實驗：取本品細粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加流動相5 mL，置100 ℃水浴中加熱約2 h，放冷至室溫，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

氧化破壞實驗：取本品細粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入30%的雙氧水溶液5 mL，靜置2 h，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

3.2 測定結果：取3.1項下配制溶液，濾過，取續濾液在色譜條件下進樣測定，記錄色譜圖（圖1）。由破壞性實驗得知，酸、堿及高溫條件下破壞產生雜質數量較少；氧化破壞所產生雜質數量較多。而在此色譜條件下，氧化破壞所產生的各雜質分離情況良好，纈沙坦峰計理論塔板數n=38900 ，纈沙坦峰與其后雜質分離度R=2.1。分離情況見圖2。

4 含量測定方法與結果

4.1 線性關系與范圍：取纈沙坦對照品適量，加入流動相溶解后，分別逐步稀釋定容至濃度約為20、40、60、80、100 μg/mL。取上述溶液按色譜條件2分別進樣測定，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積A對濃度C（μg/mL）進行線性回歸，得線性方程為A=29.579C+270.12，r=0.9992，結果表明：纈沙坦濃度在19.6～98.0 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

4.2 加樣回收實驗：取同批纈沙坦膠囊（批號：160804）裝量差異項下內容物，研細，精密稱取適量（約相當于纈沙坦25 mg），置50 mL量瓶中，用初始流動相溶解定容至刻度，搖勻，過濾，分別取續濾液500 μL，置于9個10 mL量瓶中，再取1.00 mg/mL的標準溶液150 μL、250 μL、350 μL，各3份加入，再分別用流動定容至刻度，搖勻。按色譜條件進樣測定，結果平均回收率為99.5%，RSD=0.96%（n=9）。

4.3 重復性考察：取同批均纈沙坦膠囊（批號20180401）內容物6份（約含纈沙坦50 mg），分別置50 mL量瓶中，加初始流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密移取續濾液1 mL至20 mL容量瓶中稀釋定容，搖勻，按色譜條件依次進樣測定，計算纈沙坦膠囊含量。結果平均含量為97.1%，RSD=1.06% （n=6）

4.4 穩定性考察：取含量測定項下的供試品溶液，在避光條件下放置0、2、4、6、8 h后分別取樣測定，記錄主峰面積，得主峰面積的RSD=1.5%，說明纈沙坦供試品溶液在室溫避光條件下8 h內穩定（n=5）。

4.5 纈沙坦膠囊的含量測定：取纈沙坦膠囊10顆，取內容物混合均勻，精密稱取適量（約相當于纈沙坦50 mg），置50 mL量瓶中，加初始流動相使纈沙坦溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 mL置20 mL量瓶中，用初始流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，在上述色譜條件下進樣測定，記錄色譜圖，利用標準曲線計算纈沙坦膠囊中纈沙坦含量，結果見表1。

圖1 纈沙坦HPLC色譜圖

圖2 破壞性試驗HPLC色譜圖

表1 樣品有關物質檢查及含量測定結果

5 纈沙坦雜質Ⅱ與有關物質檢查

5.1 檢測限與定量限：分別配制系列不同濃度的纈沙坦雜質Ⅱ結照品溶液，在色譜條件下，調節檢測器靈敏度，分別進樣測定，以信噪比S/N為3作為檢測限，以信噪比S/N為10作為定量限。試驗表明本試驗條件下，檢測限為0.1 μg/mL，定量限為0.2 μg/mL。

5.2 纈沙坦雜質Ⅱ與有關物質檢查：取纈沙坦膠囊內容物適量，加初始流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含纈沙坦0.5mg的溶液，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；按色譜條件依次進樣測定，記錄色譜圖。測定結果見表1。

6 討 論

本實驗比較了各種流動相對分離效果的影響。采用了以下流動相：乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）等度洗脫[2]；不同比例的甲醇-水-冰醋酸梯度洗脫及乙腈-水-冰醋酸梯度洗脫。通過比較這些流動相對分離的影響，確定按文中色譜條件2梯度洗脫時，色譜峰峰形較好，且主峰與雜質峰分離效果較好，可同時滿足有關物質與含量測定的要求。作者考查了纈沙坦及其雜質Ⅱ紫外吸收光譜，二者光譜相似，在225 nm和250 nm的波長下均有吸收，雖然在225 nm較靈敏，但色譜流出曲線漂移較大，故選擇250 nm檢測。經檢驗，在此條件下，雜質檢測靈敏度符合要求。