新疆紫草中總萘醌提取方法的比較

楊東方

（山西藥科職業學院，山西太原030031）

紫草（Arnebia euchroma）為我國傳統常用中藥，始載于《神農本草經》[1]，列為中品，多用于濕疹、水火燙傷、麻疹不透等癥[2]。臨床上常用于治療皮膚病、慢性腎炎、燒燙傷、靜脈炎等[3]。《中國藥典》2015 年版規定，紫草為新疆紫草（Arnebia euchroma（Royle）Johnst）或內蒙紫草（Arnebia. guttata Bunge）的干燥根[4]，其中，以新疆紫草質量較優[5]。研究表明，新疆紫草含有多種活性成分，主要包括萘醌類、生物堿、黃酮類、有機酸及多糖等[6-11]；具有廣泛的抗病毒作用、抗氧化活性、免疫調節及抗腫瘤活性[12-14]；以紫草素為代表的萘醌類成分為其主要活性成分[15]。

目前，紫草中總萘醌類成分的提取方法有超臨界CO2萃取法、超聲提取法、溶劑浸提法、減壓蒸餾法等。但是各種方法之間的提取效率、有效成分的穩定性等方面存在差異。

為了篩選新疆紫草中總萘醌類化合物較為理想的提取方法，本研究對回流提取法、滲漉提取法、超聲提取法進行了比較研究。

1 材料和方法

1.1 儀器

UV-1800 紫外- 可見分光光度儀（日本島津公司），AY120 電子分析天平（日本島津公司），HH-S4數顯恒溫水浴鍋（金壇市醫療器械廠），KQ-5200DE型超聲波清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）；電熱恒溫干燥箱、旋轉蒸發儀、恒溫水浴鍋（上海百典儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥品

供試新疆紫草購自山西省藥材公司，并經鑒定為Arnebia euchroma（Royel）Johnst。左旋紫草素對照品購自中國藥品生物制品檢定所，其余所用試劑均為分析純。

1.3 試驗方法

1.3.1 新疆紫草粗粉制備 取新疆紫草藥材于60 ℃烘箱中干燥至恒質量，粉碎后，過篩（2 mm）備用。

1.3.2 提取方法

1.3.2.1 回流提取法 稱取粗粉50.00 g，60 ℃分別加8 倍和6 倍95%乙醇回流2 次，時間分別為2，1 h，合并提取液，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏備用。

1.3.2.2 滲漉提取法 稱取粗粉50.00 g，加8 倍量95%乙醇浸泡過夜，以1 mL/min 流速進行滲漉，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏，備用。

1.3.2.3 超聲提取法 稱取粗粉50.00 g，分別加8 倍和6 倍95%乙醇超聲2 次，每次30 min，合并提取液，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏備用。

1.3.3 標準曲線制備 精密稱取左旋紫草素對照品2.5 mg，置于50 mL 容量瓶中，無水乙醇溶解定容，即得質量濃度為0.05 mg/mL 的對照品溶液。

分別精密量取對照品液1，2，3，4，5 mL 置于10 mL 容量瓶中，無水乙醇定容。采用紫外- 可見分光光度法，在516 nm 處測定吸光度。

1.3.4 樣品含量的測定 精密稱量不同提取方法獲得的干膏0.05 g，置50 mL 容量瓶中，無水乙醇定容，溶解過濾。量取濾液5 mL，置25 mL 容量瓶中，無水乙醇定容，搖勻，即得樣品供試液。精密吸取上述樣品供試液1 mL，在線性關系下測定吸光度，并計算出樣品中總萘醌的含量。

1.3.5 精密度試驗 選擇總萘醌類得率最高的方法，同時制取5 份樣品溶液，連續測定其吸光度，計算RSD，考量其精密度。

1.3.6 穩定性試驗 選擇總萘醌類得率最高的方法，精密量取樣品溶液1 mL，每隔30 min 重復測定總萘醌含量，連續5 h，計算RSD，考察其不同時間點的穩定性。

2 結果與分析

2.1 標準曲線制備

以吸光度（A）為縱坐標，左旋紫草素對照品（C）質量濃度（mg/mL）為橫坐標進行回歸分析，得標準曲線方程為：A＝25.092 4C－0.004 1，r＝0.999 6，在5～25 mg/L 質量濃度范圍內，二者的線性關系良好。

2.2 不同提取方法總浸膏得率及總萘醌含量比較

由表1 可知，在3 種方法中，總萘醌含量從大到小依次為超聲提取法、回流提取法、滲漉提取法。

表1 不同提取方法總浸膏得率及總萘醌含量測定結果%

2.3 精密度試驗分析

采用超聲提取法提取5 份樣品溶液，以吸光度計算，RSD 為2.61%，說明精密度良好。

2.4 穩定性試驗分析

采用超聲提取法，每隔30 min 連續5 h 重復測定總萘醌含量，其RSD 為1.86%，說明提取液在5 h內穩定性良好。

3 結論與討論

紫草中總萘醌類成分脂溶性強，易溶于石油醚、氯仿等有機溶劑，可溶于乙醇，微溶于水[16]。在測試過程發現，回流提取法在提取過程中，有效成分損失較大。這與萘醌類成分不穩定，對光、熱等敏感，其穩定性受溫度影響較大有關[17]。

滲漉提取法的總浸膏得率最高，超聲提取法的總萘醌含量最高。采用滲漉提取法，雖然總萘醌類成分不是最高，但總浸膏得率較高。綜合比較，滲漉法作為紫草中總萘醌類成分初始提取方法，可以有效節約能源，且具有設備要求低、操作簡便等優點，較適用于工業化量產。

相對于傳統的提取方法，超聲提取法獲得的總萘醌類成分含量最高，研究表明，超聲波法無需加熱、加壓，可以縮短提取時間，降低成本，提高生產效率，但對設備要求較高[18]。目前，雖然滲漉提取法在工業化中使用較為普遍，但由于超聲提取法在減少有機溶劑使用、降低環境污染等方面的優勢，決定其在未來工業化方面具有廣闊的應用前景。因此，超聲法提取紫草有效成分的工藝條件值得進一步研究。