腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型情況及其對移植效果的影響

周敏捷，王靜，鐘超

(南方醫科大學南方醫院，廣州510515)

人類白細胞抗原(HLA)作為人體組織細胞的遺傳標志，在抗原識別、遞呈、免疫應答與調控、破壞外來抗原靶細胞等方面發揮重要作用。腎臟移植術前供受者HLA配型已是腎移植術前必要檢測項目，良好的HLA配型對腎移植受者長期存活有重要意義。除此之外，是否還有其他的一些配型因素影響腎移植受者長期存活呢？研究發現，人類自然殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)與自身免疫性疾病、病毒感染及移植等有重要的關系。在臨床上，KIR基因的類型和數目會直接影響多種自身免疫性疾病的發展、HIV等病毒感染、造血干細胞移植、骨髓移植、實體器官移植的存活[1～6]。隨著研究的進展，KIR與腎移植的關系已成為移植領域的一個研究熱點。在歐美國家，骨髓移植中均已將KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因列為組織配型中的一個獨立分析參數[7]。我們前期研究發現，KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配對術后發生急性排斥反應(AR)受者的移植腎功能恢復有益[8]。我們繼續對之前的腎移植受者進行長期跟蹤隨訪，以了解KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配對移植腎受者長期存活的影響?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2007年1月～2012年6月在我院接受腎移植手術，出院時移植腎功能已恢復正常的受者223例。受者中男156例、女67例，平均年齡41.1歲；原發病為慢性腎小球腎炎168例，先天性多囊腎29例，糖尿病腎病21例，不詳5例。223例受者移植前均接受規律血液透析2個月以上，移植前血肌酐(Scr)平均為1 028 μmol/L。受者的ABO血型與供者相容，術前淋巴細胞毒交叉配合試驗為陰性，術后基礎免疫抑制方案均為他克莫司、嗎替麥考酚酯、潑尼松三聯抗排斥治療。

1.2 腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型情況判斷方法 采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應方法(PCR-SSP) 檢測KIR基因型，并計算基因頻率和基因表現型頻率。①KIR基因：參考官方網站http://www.Ebi.ac.uk/ipd/kir/genes.html，根據胞外決定簇數目、胞質區長短和免疫受體酪氨酸抑制基序命名KIR基因，分為KIR家族抑制型基因(KIR-L)和KIR家族活化型基因(KIR-S)。KIR-L包括KIR2DLl、2DL2、 2DL3、2DIA、2DL5、3DL1、3DL2和3DL3，KIRS包括KIR2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5和3DS1。②KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因[9，10]：KIR配體HLA-Bw4I80相關基因的共同特點是第80位氨基酸殘基均為異亮氨酸(Ile)，編碼此類蛋白的基因包括A9、A23、A24、A25、A32；B5、B13、B17、B27、B37、B38、B44、B47、B49、B51、B52、B53、B57、B58、B59、B63、B77；B7、B8、B14、B22、B35、B39、B40、B41、B42、B45、B46、B48、B50、B54、B55、B56、B60、B61、B62、B64、B65、B67、B70、B71、B72、B73、B75、B76、B78，共51個血清學分型。供受者間KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因相同歸為相合，有錯配歸為錯配。

1.3 腎移植近遠期效果觀察方法 術后對腎移植受者隨訪5年，定期復查Scr，選取術后1年及5年兩個節點進行觀察。隨訪內容包括：①早期腎功能恢復情況：包括移植腎AR及功能延遲恢復(DGF)發生例數。AR判斷標準：患者臨床表現為發熱、血壓升高、尿量減少、移植腎區脹痛、體質量增加、尿蛋白和Scr升高；彩色多普勒超聲檢查顯示腎血管阻力指數升高；移植腎組織活檢病理符合AR病理表現。DGF判斷標準：腎移植術后7 d內Scr未恢復正常并行血液透析治療。②1年移植腎功能情況：分為移植腎功能正常(Scr<133 μmol/L)、移植腎功能下降(Scr>133 μmol/L)和移植腎功能喪失(Scr>707 μmol/L)3種，移植腎功能正常、下降均為移植腎存活。③5年移植腎功能情況：判斷標準同1年移植腎功能情況。

2 結果

2.1 腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型結果 223對供受者中，KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型相合55對(24.67%)、錯配168對(75.33%)，錯配是相合的3倍。

2.2 KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配對腎移植效果的影響 223例納入研究的受者，除3例死亡外，均隨訪滿5年。

2.2.1 近期效果 KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型相合的腎移植受者術后AR發生率16.36%(9/55)、DGF發生率0，錯配的腎移植受者術后AR發生率21.43%(36/168)、DGF發生率9.52%(16/168)，錯配者腎移植受者術后DGF發生率高于相合者(P<0.05)。

2.2.2 遠期效果 KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型相合的腎移植受者術后1年移植腎存活率100%、5年移植腎存活率96.36%、5年受者存活率98.18%(1/55)，錯配者中1年移植腎存活率99.40%、5年移植腎存活率91.07%、5年受者存活率98.81%(2/168)，錯配者腎移植受者術后5年移植腎存活率低于相合者(P<0.05)。見表1。

表1 KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因不同配型情況腎移植受者術后1、5年腎功能情況比較(例)

注：與KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配腎移植受者比較，*P<0.05。

3 討論

腎移植術后急慢性排斥反應發生率非常高，發生機制不明確，是影響移植腎存活率的重要因素。因此，腎移植術前供受者移植配型選擇是一關鍵環節。目前，臨床腎移植術前配型主要以HLA相容程度作為金標準。HLA是目前已知的具有最復雜多態性的人類基因系統，移植腎的存活率很大程度上取決于供受者之間HLA配型相合程度的高低。

但是，近年來隨著基礎醫學和臨床研究的不斷進展，NK細胞已逐漸被認為是繼T淋巴細胞之后與移植物排斥反應關系最密切的細胞，其活性依賴于HLA通過與KIR結合后釋放的活化或抑制信號。KIR主要表達于NK細胞和細胞毒性T淋巴細胞表面，而NK細胞主要分布于外周血、淋巴結和骨髓中。NK細胞受體根據結構的不同分為2類，第1類是免疫球蛋白超家族，第2類是C2型凝集素樣家族，其中前者包括KIR和白細胞免疫球蛋白樣受體。KIR基因簇位于染色體19q.13.4區域，共有16個KIR基因座。KIR有兩種類型，即抑制型和活化型。3DS1、2DS1～5編碼活化型受體，而3DL1-3、2DL1～3、2DL5編碼抑制型受體，2DL4既編碼抑制型受體又可編碼活化型受體，還有假基因2DP1和3DP1不編碼蛋白[11]。在人體內，HLA作為KIR的配體，KIR與靶細胞表面MHC-Ⅰ類分子的配體就好比是螺絲與螺母的關系，結合后抑制或活化免疫細胞毒活性，在控制免疫應答過程中發揮非常重要的作用[12]。近年來，人們逐漸認識到KIR基因與移植排斥及移植腎功能密切相關[13]，如KIR配體不合與移植死亡率增加相關，尤其是抑制型KIR分子與相應HLA-Ⅰ配體錯配影響移植腎的存活率。

我們在前期研究中曾報道，腎移植供受者之間KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配概率達76.09%，雖然KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配不會增加腎移植術后AR的發生概率，但可以幫助發生AR的受者順利逆轉AR。因此，當時我們提出在腎移植供受者之間并不需要所有的基因都相合，在供受者之間某些基因是需要錯配的，只有這些特定位點的基因錯配才會對移植后的恢復及人腎長期存活有益[8]。但是，本次研究我們發現錯配組的DGF發生率達到9.52%，而相合組的DGF發生率為0，提示KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配會增加腎移植術后DGF發生率。經過對當時納入研究的受者進行長期跟蹤隨訪后，我們發現錯配組與相合組的1年移植腎存活率相近，但5年移植腎存活率兩組發生較大差異，相合組5年移植腎存活率為96.36%，高于錯配組的91.07%，二者相比差異有統計學意義。我們相信隨著時間的推移，這種差異會越來越大。

在移植腎長期存活的研究中，KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型與移植腎長期存活的關系國內研究較少。通過本研究的結果表明，KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因錯配會增加腎移植術后DGF發生概率，同時顯著影響腎移植受者的長期存活率；隨著長期的術后隨訪會發現，這種趨勢將更加明顯。因此，我們建議今后在腎移植術前配型中可適當參考KIR配體HLA-Bw4 I80相關基因配型情況選擇供體，從而減少術后并發癥，并顯著提高腎移植術后長期存活率。