前列腺腫瘤患者tPSA、Bax、HIF-1α表達水平及與病情的相關性研究

史建華，劉瑞強，尹茂軒，楊幫東

(濮陽市人民醫(yī)院泌尿外科，河南 濮陽457000)

前列腺癌多發(fā)于45～89歲的中老年男性人群，屬于常見生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，流行病學研究[1]提示年齡超過50歲的人群前列腺癌的發(fā)病率和死亡率呈指數(shù)增長，隨著疾病的進展，多伴有尿路梗阻、血尿等并發(fā)癥，嚴重降低了患者的生活質(zhì)量，甚至威脅患者的生命安全。因而，探尋前列腺癌的有效診斷及病情評估方法以為制定有效的治療方案做參考已成為現(xiàn)臨床研究的重要方向。

前列腺特異性抗原 (Prostate specificantigen，PSA)是診斷前列腺疾病的重要指標，但研究[2]提示單獨的PSA檢測缺乏足夠的特異性和敏感性。文獻[3]提示Bax、HIF-1α在多類腫瘤細胞中呈現(xiàn)高表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切，但前列腺癌中上述Bax、HIF-1α的表達情況資料缺乏。故而，本研究深入觀察了 前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達水平，并分析其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2015年8月-2018年5月在我院接受治療前列腺腫瘤患者為研究對象。納入標準[4]：⑴年齡≥50周歲；⑵經(jīng)病理診斷確診為前列腺腫瘤；⑶無其他系統(tǒng)嚴重疾病；排除標準：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他原發(fā)腫瘤疾病者。根據(jù)納入排除標準共納入病例數(shù)80例，年齡55～82 歲，平均 63.85±4.11 歲；對照組納入標準：⑴年齡≥50周歲；⑵經(jīng)病理確診為前列腺增生；⑶無其他系統(tǒng)嚴重疾病者，共納入80例，年齡54～82歲，平均64.12±5.03歲。兩組患者年齡、性別等一般資料比較無差別，具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審通過，且患者均知情同意。

1.2 方法 取所有研究對象空腹靜脈血，離心后分離血清，化學發(fā)光法檢測血清總前列腺癌特異性抗原（tPSA）水平；采用免疫組化染色法檢測Bax、HIF-1α蛋白表達表達水平；兔抗人蛋白多克隆抗體均購于美國GE公司；DAB顯色盒、免疫組化試劑盒等相關試劑盒及染色液均購于南京建成生物研究所。適量前列腺癌灶組織、增生組織標本常規(guī)石蠟切片，梯度水化；熱抗原修復，10min過氧化物酶修復；山羊血清1h封閉；分別滴加Bax、HIF-1α蛋白抗體，孵育（4℃）過夜；PBS緩沖液3次沖洗；滴加二抗 （辣根過氧化物酶標記）；1h室溫孵育，PBS3次沖洗；DAB顯色，蘇木素復染；自來水沖洗反藍后梯度脫水，中性膠封片，高倍顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定標準：每張切片隨機取5個高倍鏡視野，對陽性細胞所占百分率進行計數(shù)；陽性細胞細胞數(shù)＜10%為陰性，10%～25%輕度陽性，26%～50%中度陽性，超過50%強陽性；若陽性細胞≥10%均可判定為陽性表達[5]。

1.3 評價指標 觀察兩組患者 tPSA、Bax、HIF-1α表達的差異，比較不同臨床病理特征前列腺腫瘤患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況，分析影響前列腺腫瘤患者的 tPSA、Bax、HIF-1α表達水平的因素。

1.4 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進行分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標準差表示。兩組患者、不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較采用卡方檢驗和t檢驗進行分析，采用回歸分析法分析影響前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達水平的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽性表達率高于前列腺增生組，兩組患者的Bax陽性表達率無差別。見表1。

表1 兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較

2.2 不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較 中低分化、有轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ、有神經(jīng)浸潤的前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽性表達率較高，Bax陽性表達率較低，不同年齡患者間無差別。見表2。

表2 不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較

2.3 影響前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達水平的因素分析 將單因素分析有意義的分化程度、轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、有無神經(jīng)浸潤作為自變量，將前列腺癌患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達水平作為因變量進行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和有無轉(zhuǎn)移是影響tPSA、Bax、HIF-1α表達的因素。見表3。

2.4 tPSA、HIF-1α對前列腺癌診斷價值分析 tPSA對前列腺癌診斷的陽性預測值、陰性預測值、靈敏度高于HIF-1α，特異度低于HIF-1α。見表4。

表3 -1影響前列腺腫瘤患者的tPSA表達水平的因素分析

表3 -2影響前列腺癌患者Bax表達的因素分析

表3 -3影響前列腺腫瘤患者的HIF-1α表達水平的因素分析

表4 tPSA、HIF-1α對前列腺癌診斷價值分析

3 討論

全球范圍內(nèi)前列腺癌一般多發(fā)于歐美國家，已成為男性第二大惡性腫瘤，但近年來我國前列腺癌發(fā)病率也呈現(xiàn)顯著上升趨勢[6]。早期前列腺癌由于腫瘤細胞逐漸侵犯前列腺周圍組織并不會表現(xiàn)出明顯癥狀，隨著病情的進行還可能表現(xiàn)為尿流緩慢、尿流中斷、排尿不盡、尿頻、尿急等癥狀，嚴重患者還可出現(xiàn)尿潴留、尿路梗阻及尿失禁等癥狀，嚴重降低了患者的生活質(zhì)量[7，8]。因而，前列腺癌的早期準確診斷和病情評估具有重要意義。

tPSA是現(xiàn)臨床泌尿科腫瘤中最靈敏的腫瘤標志物，其不是腫瘤的特異感應，而是器官的特異感應，正常男性的TPSA值是4ng/L以下，若超過4ng/L，也不能完全確定患者患有前列腺癌，要根據(jù)其超過的范圍多少而定提示患者需要做進一步檢查確診[9，10]。BAX是與BCL-2同源的水溶性相關蛋白，是BCL-2基因家族中細胞凋亡促進基因，BAX的過度表達可拮抗BCL-2的保護效應而使細胞趨于死亡，對 Bcl-2 產(chǎn)生阻抑作用[11，12]。 HIF-1α 可調(diào)控多種信號途徑并對細胞凋亡、血管新生及糖酵解均具有良好的調(diào)控作用[13-15]。上述因子均為腫瘤特異性標志物，本研究以此為研究點探討相關因子與前列腺癌病情的相關性。

本研究多兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況比較發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽性表達率高于前列腺增生組，兩組患者的Bax陽性表達率無差別。上述結(jié)果提示前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α存在高表達，具有成為診斷前列腺癌重要指標的潛力。正常情況下PSA分布于前列腺導管內(nèi)，組織表達水平較低，前列腺癌導管屏障遭到破壞，PSA快速釋放入血，因此前列腺癌患者血清tPSA水平較高[16]。HIF-1α與缺氧環(huán)境關系密切，提示前列腺癌在發(fā)生、發(fā)展過程可能造成了缺氧環(huán)境。

進一步對不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達情況的比較發(fā)現(xiàn)中低分化、有轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ、有神經(jīng)浸潤的前列腺癌患者的tPSA水平及HIF-1α陽性表達率較高，Bax陽性表達率較低，不同年齡患者間無差別。上述結(jié)果說明高分化、高病理分期及存在神經(jīng)浸潤的前列腺癌患者的tPSA水平及HIF-1α陽性表達率較高，Bax低陽性表達，提示在前列腺癌的發(fā)展中，Bax蛋白的水平下降在腫瘤形成過程中抑制了細胞凋亡，前列腺癌HIF-1α蛋白可能通過調(diào)控Baxx蛋白的表達而抑制腫瘤細胞發(fā)生凋亡，促進腫瘤細胞的增殖。

本研究將單因素分析有意義的分化程度、轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、有無神經(jīng)浸潤作為自變量，將前列腺癌患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達水平作為因變量進行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和有無轉(zhuǎn)移是影響tPSA、Bax、HIF-1α表達的因素。該結(jié)果說明前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α、Bax水平均受分化程度和轉(zhuǎn)移情況的影響。tPSA對前列腺癌診斷的陽性預測值、陰性預測值、靈敏度高于HIF-1α，特異度低于HIF-1α。tPS屬激肽酶家族蛋白，存在于前列腺組織和精液中，正常人血清中含量極微，其水平的異常變化可提示前列腺癌的可能性；正常條件下HIF-1α可與基因產(chǎn)物pYHL結(jié)合并被降解，半衰期僅有數(shù)分鐘，但在pVHL和缺氧環(huán)境下HIF-1α可快速升高，因此tPSA、HIF-1α均對前列腺癌的診斷具有重要價值。

本研究證實前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展與多種信號通路、多種因子有關，為前列腺癌的診斷、病情程度及預后判斷提供一定的基礎，但具體機制還有待進一步研究探討。

綜上所述，前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α表達水平較高，Bax水平與非前列腺癌患者相當，但上述指標均受分化程度和轉(zhuǎn)移情況的影響。