胃癌患者的E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)水平及其臨床意義研究

陳恒，江立千

(河南圣德醫(yī)院臨檢中心，河南 信陽 464100)

流行病學(xué)研究證實(shí)，2010-2017年每年部分地區(qū)胃癌的平均發(fā)病率可達(dá)274～593/10萬人左右[1]。臨床上胃癌的發(fā)生不僅能夠?qū)е禄颊呱钯|(zhì)量的顯著下降，同時(shí)患者的五年生存率和中位生存時(shí)間可明顯的惡化[2]。

在胃癌發(fā)生過程中的相關(guān)分子機(jī)制研究中，可以發(fā)現(xiàn)不同的分子或者蛋白水平的改變，均能夠促進(jìn)胃癌的發(fā)生，加劇胃癌患者病情的進(jìn)展速度。E-鈣黏蛋白的表達(dá)能夠通過促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲能力的增加，進(jìn)而促進(jìn)了癌細(xì)胞對(duì)于胃黏膜基底膜組織的浸潤(rùn)和突破過程[3]；波形蛋白的表達(dá)，能夠通過維持上皮細(xì)胞的極性，穩(wěn)定上皮細(xì)胞的增殖過程，降低癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[4]；甲胎蛋白是消化道重要的生物學(xué)腫瘤標(biāo)志物，在胃腸道黏膜上皮細(xì)胞的持續(xù)性DNA分裂的過程中，甲胎蛋白的表達(dá)濃度可明顯的上升[5]。為了揭示E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)與胃癌患者的關(guān)系，從而為臨床上胃癌的病情評(píng)估提供參考，為胃癌患者的血清學(xué)篩查提供分子標(biāo)志物，本次研究選取2016年5月-2017年8月在我院接受治療的胃癌患者為研究對(duì)象，探討了E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)及其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2016年5月-2017年8月在我院接受治療的胃癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡18～80歲；⑵手術(shù)病理診斷為胃癌者；⑶無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他部位原發(fā)腫瘤者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對(duì)象100例，其中男62例，女 38例，年齡 42～75歲，平均 50.18±6.12歲。對(duì)照組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡18～80歲；⑵經(jīng)活檢確診為胃炎者，排除惡性病變者，根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100例，男50例，女50例，年齡42～76歲，平均50.22±5.79歲。兩組患者年齡、性別等一般資料比較無差別，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4um采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對(duì)照，高倍顯微鏡下觀察E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況，比較不同特征胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的差異，分析影響胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組患者、不同特征胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的比較采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析。采用Logistic回歸分析法分析影響胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的比較 胃癌患者的E-鈣黏蛋白陽性表達(dá)率高于胃炎組，波形蛋白陽性表達(dá)率低于胃炎組，兩組患者的甲胎蛋白陽性表達(dá)率無差別。見表1。

表1 兩組患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的比較

2.2 不同特征胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的比較 分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有肝轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ的胃癌患者的E-鈣黏蛋白和甲胎蛋白陽性表達(dá)率較高，波形蛋白陽性表達(dá)率較低，不同年齡、性別胃癌患者的E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白陽性表達(dá)率無差別。見表2。

2.3 影響胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的因素分析 將單因素分析有意義的因素作為自變量，將胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白陽性表達(dá)作為因變量，進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響E-鈣黏蛋白、波形蛋白表達(dá)的因素，肝轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響甲胎蛋白表達(dá)的因素。見表3、表4、表5。

表2 不同特征胃癌患者E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白表達(dá)情況的比較

表3 影響胃癌患者E-鈣黏蛋白陽性表達(dá)率的因素

表4 影響胃癌患者波形蛋白陽性表達(dá)率的因素

表5 影響胃癌患者甲胎蛋白陽性表達(dá)率的因素

3 討論

幽門螺桿菌感染能夠顯著促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞的病變，增加胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，特別是在合并有慢性萎縮性胃炎或者胃腸道上皮化生的患者中，胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步的上升[6]。現(xiàn)階段臨床上主要通過手術(shù)治療胃癌，但包括手術(shù)及術(shù)后放療治療后，胃癌患者的臨床病情緩解率仍然較低，治療后的患者無進(jìn)展生存期仍然無明顯的改善。而免疫靶向性治療，能夠在胃癌患者的輔助治療過程中發(fā)揮重要作用，本次研究對(duì)于胃癌患者體內(nèi)的E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)分析研究，不僅能夠深入揭示胃癌的發(fā)生機(jī)制，同時(shí)還能夠?yàn)槲赴┗颊叩拿庖甙邢蛐灾委熖峁﹨⒖及悬c(diǎn)。

E-鈣黏蛋白是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化因子的成員，其能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，促進(jìn)金屬基質(zhì)蛋白酶的激活，從而降低癌細(xì)胞間的粘附程度，促進(jìn)了癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移過程。同時(shí)基礎(chǔ)方面的研究還證實(shí)，E-鈣黏蛋白能夠通過提高癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄活性的增加，進(jìn)而提高癌細(xì)胞紡錘體的復(fù)制和分裂速度，促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性自我擴(kuò)增[7]；波形蛋白是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的重要負(fù)性調(diào)控因子，其能夠維持上皮細(xì)胞的極性和形態(tài)，抑制癌細(xì)胞間質(zhì)成分的過度分解，降低癌細(xì)胞的變形能力[8]。波形蛋白還能夠穩(wěn)定癌細(xì)胞間縫隙連接蛋白的濃度，提高癌細(xì)胞間縫隙連接的數(shù)量，進(jìn)而進(jìn)一步穩(wěn)定癌細(xì)胞的生物學(xué)特征[9]；甲胎蛋白是評(píng)估消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)生的重要標(biāo)志物，在肝癌患者中具有明顯上升趨勢(shì)，雖然部分研究者探討了甲胎蛋白的表達(dá)與胃癌的關(guān)系，認(rèn)為甲胎蛋白的表達(dá)上升與胃癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸的惡化密切相關(guān)[10，11]，但對(duì)于E-鈣黏蛋白、波形蛋白與胃癌患者臨床病理特征的分析研究不足。

本次研究通過免疫組化方法，探討了E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)與胃癌患者的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在病例組患者中，E-鈣黏蛋白的表達(dá)明顯的上升，而波形蛋白的表達(dá)明顯的下降，提示E-鈣黏蛋白、波形蛋白的異常表達(dá)均能夠促進(jìn)胃癌的發(fā)生過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于E-鈣黏蛋白、波形蛋白的下列幾個(gè)方面的作用有關(guān)[12，13]：⑴E-鈣黏蛋白的上升能夠促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化病理過程的進(jìn)展，促進(jìn)金屬基質(zhì)蛋白酶對(duì)于癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，為癌細(xì)胞的遷移和對(duì)于基底膜組織的浸潤(rùn)提供前提；⑵波形蛋白水平的下降失去了其對(duì)于癌細(xì)胞生物學(xué)特征的穩(wěn)定作用，導(dǎo)致癌細(xì)胞間細(xì)胞連接蛋白的不足，促進(jìn)了癌細(xì)胞的擴(kuò)散。王紅山等[14]研究者也認(rèn)為，在胃癌患者中，E-鈣黏蛋白的表達(dá)陽性率可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的肌層浸潤(rùn)或者局部引流淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，E-鈣黏蛋白的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)在胃癌患者中甲胎蛋白的表達(dá)陽性率的上升，這與王雅坤等[15]研究者的結(jié)論存在一定的差別，這可能與本次研究中胃癌患者的臨床分期多數(shù)為早期患者，同時(shí)可能與甲胎蛋白的檢測(cè)靈敏度的不同有關(guān)。在探討相關(guān)指標(biāo)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系中，可以發(fā)現(xiàn)中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有肝轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ的胃癌患者的E-鈣黏蛋白和甲胎蛋白陽性表達(dá)率較高，而波形蛋白的表達(dá)陽性率較低，提示了相關(guān)腫瘤蛋白的表達(dá)與胃癌患者的臨床病理特征關(guān)系較為密切，這主要由于E-鈣黏蛋白、甲胎蛋白的上升，能夠提高胃黏膜上皮癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)內(nèi)皮的粘附能力，導(dǎo)致胃黏膜腺體細(xì)胞的分化成熟過程的異常；而波形蛋白的下降，能夠影響到胃黏膜上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)的改變，并增加了癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和畸變的風(fēng)險(xiǎn)，從而促進(jìn)了相關(guān)臨床病理特征的進(jìn)展。危險(xiǎn)因素的分析也可見，分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響E-鈣黏蛋白、波形蛋白表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)因素，而肝轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響甲胎蛋白的風(fēng)險(xiǎn)因素，進(jìn)一步提示了相關(guān)蛋白的表達(dá)與胃癌患者的病情關(guān)系。

綜上所述，在胃癌患者中，E-鈣黏蛋白的表達(dá)明顯上升，而波形蛋白的表達(dá)明顯下降，同時(shí)E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的異常表達(dá)，均能夠促進(jìn)胃癌患者臨床病理特征的進(jìn)展。后續(xù)臨床相關(guān)研究，可以繼續(xù)探討E-鈣黏蛋白、波形蛋白、甲胎蛋白的表達(dá)與胃癌患者臨床預(yù)后轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。