高效液相色譜-質譜測定罐裝飲料中9種雙酚-二縮水甘油醚

李娟，譚洪濤，周鴻，辜蕓，謝慧英

(江西省疾病預防控制中心，江西省食源性疾病診斷溯源重點實驗室，江西 南昌330029)

雙酚A-二縮水甘油醚(BADGE)、雙酚F-二縮水甘油醚(BFDGE)廣泛存在于罐裝食品的內涂層中，在高溫殺菌和貯存過程，其單體與水或氯化物作用，生成各種衍生物（水化物、氯化物），可以導致動物生殖細胞的畸形和繁殖率的下降。歐盟規定雙酚A二縮水甘油醚及其水合物的總量應＜9mg/kg，雙酚A二縮水甘油醚及其氯化物的總量應＜1mg/kg，同時禁止BFDGE用于食品接觸的涂料。

目前，雙酚二縮水甘油醚類的分析方法主要是液相色譜法[1，2]、液相色譜-質譜法[3-9]、氣相色譜-質譜法[10]和酶聯免疫法[11]，雙酚二縮水甘油醚類的沸點較高，應用氣相色譜法具有一定局限性。現有的出入境檢驗檢疫行業標準中[12]的液相色譜-質譜-質譜法可以用于檢測出口食品中BADGE、BFDGE及其衍生物。但樣品前處理繁瑣，基質干擾大，分析時間長，需45min才可以完成一次分析，因此建立罐裝食品中雙酚二縮水甘油醚類殘留量的快速、準確、靈敏的測定方法非常必要。

本文對分析條件進行了優化，同時優化了樣品的提取和凈化步驟，建立了罐裝食品中雙酚A-二縮水甘油醚、雙酚F-二縮水甘油醚及其衍生物的HPLC-MS-MS法，該方法操作簡單、靈敏度高、抗干擾能力強，可同時對9種目標物進行準確定性和定量，且完全滿足相關法規的限量要求。解決了行業標準中分析時間長，基質干擾大等問題。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑 Quattro Premier XE三重四極桿液質聯用儀 (美國Waters公司)；Milli-Q去離子水發生器 (美國Millipore公司)；Oasis HLB固相萃取柱(3mL/60mg)；EYELA旋轉蒸發器；EYELA氮氣濃縮儀(日本EYELA公司)；YAMATO渦旋混合器(日本YAMATO公司)。

BADGE、BADGE ·2HCl、BADGE ·HCl、BADGE·H2O·HCl、BADGE·2H2O、BADGE·H2O、BFDGE·2H2O、BFDGE、BFDGE·2HCl 9 種標準物質(純度≥95%，德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)；乙酸銨、甲酸(液質專用，美國FLUKA公司)；甲醇、正己烷(色譜純，美國MERCK公司)；叔丁基甲醚(色譜純，美國Fisher公司)；實驗用水均為Milli-Q凈化的超純水。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1mm×100mm，1.7μm），流動相（A）為含5mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸的水溶液，流動相（B）為甲醇，梯度洗脫，洗脫程序：0～4min，60%～10%A；4～5min， 保持 10%A 5～5.1min，10%A～60%A；5.1～6min，保持 60%A。 流速：0.3ml/min，，進樣量5μl

1.2.2 質譜條件 電噴霧(ESI)離子源；正離子多反應監測(MRM)掃描；電噴霧電離，噴霧電壓3.2kv，錐孔電壓：20V，源溫度120℃，脫溶劑溫度500℃，脫溶劑流量：650L/Hr，錐孔氣流量：50L/Hr，其它監測條件見表1。

表1 9種目標化合物質譜分析條件

1.2.3 標準溶液的配制 標準儲備液：分別稱取BADGE、BADGE ·2HCl、BADGE ·HCl、BADGE ·H2O·HCl、BADGE·2H2O、BADGE·H2O、BFDGE·2H2O、BFDGE、BFDGE·2HCl 9 種標準標準品，以甲醇定容，配成100.0mg/L的標準儲備溶液，-18℃冷凍避光保存。

標準使用液：各取一定體積上述標準儲備液，用甲醇配成一系列混合標準使用液，質量濃度分別為 5、10、15、20、30、50、60μg/L，4℃避光保存。

1.2.4 樣品前處理 稱取樣品2.0g于50ml離心管內，加入15ml叔丁基甲醚，超聲振蕩提取15min，離心，轉移叔丁基甲醚層至濃縮瓶中，于45℃下減壓濃縮至干，加入5ml甲醇-水-甲酸溶液（90+10+0.1，體積比）溶解后，加入7ml水混勻，待凈化。

凈化：依次用5ml甲醇和5ml水活化HLB固相萃取柱，加入待凈化液，依次用5ml水和5ml甲醇-水-甲酸溶液（60+40+0.1，體積比）淋洗去雜。待淋洗液全部流出后，減壓抽干3min。用5ml甲醇洗脫，收集洗脫液。將洗脫液在45℃下用氮氣吹干，再以甲醇-水-甲酸溶液（60+40+0.1，體積比）溶解殘渣，過0.22μm微孔濾膜，進行測定。

2 結果與討論

2.1 液相色譜條件的優化 比較了不同流動相（甲醇、乙腈）對9種目標物分離和離子化程度的影響，結果發現甲醇比乙腈信號強且穩定。在流動相中加入0.1%甲酸溶液有助于待測物母離子峰的形成，同時流動相中加入醋酸銨有助于消除鈉鹽的干擾，因此，本實驗選擇甲醇～0.005mol/L醋酸銨溶液（含0.1%甲酸）作為流動相，9種目標物的色譜圖見圖1。

圖1雙酚-二縮水甘油醚各化合物的離子色譜圖

2.2 質譜條件的優化 BADGE和BFDGE分子結構中含有醚鍵，其衍生物分子結構中除了醚鍵還含有醇羥基，在正離子多監測模式下進行全掃描以選定適當的母離子和子離子，并對各目標化合物的噴霧電壓、碰撞電壓、錐孔電壓、脫溶劑溫度等條件進行了優化，以提高目標物的離子化效率，使其離子化效率達到最佳，見表1。

2.3 方法學驗證

2.3.1 線性范圍及檢出限 采用HPLC-MS-MS對9種雙酚類化合物的混合標準溶液進行分析。以化合物的峰面積對相應的質量濃度繪制工作曲線。結果表明：9種雙酚類化合物在質量濃度為5.0～60.0μg/L時線性良好，相關系數R2均大于0.995，滿足定量分析的要求，分別以目標峰的3倍信噪比和10倍信噪比確定各化合物的檢出限和定量限，見表2。

表2 線性方程、相關系數、檢出限和定量限

2.4 方法回收率 選擇不含雙酚類的樣品進行加標回收實驗，在3個水平下進行添加回收，每個水平測定3次。平均回收率為78.2%～105.1%，相對標準偏差RSD為4.6%～9.0%，見表3。

表3 回收率和精密度

2.4 樣品分析 采用本文方法對市場上購買的26種罐裝飲料中的雙酚類化合物進行分析。結果顯示，17份樣品中檢出BADGE·2H2O、8份樣品中檢出 BADGE·H2O·HCl，其最大檢出值分別高達761μg/kg、110μg/kg， 均未超過歐盟對罐裝食品中雙酚類化合物總量的規定，但高攝入人群仍然存在一定地健康危害，需引起重視。其中BFDGE及其衍生物均未檢出，這與文獻[13]結果一致，說明目前BFDGE類暫未見在罐裝性食品的內涂層中使用。

結論

本文建立的罐裝食品中雙酚A-二縮水甘油醚、雙酚F-二縮水甘油醚及其衍生物的UPLCMS-MS法，具有準確度高、靈敏度高、前處理簡單等特點，與現有的方法相比較，大大縮短了分析時間，提高了分析效率，適合罐裝食品中9種雙酚類化合物殘留量的檢測。