PKD1、MAP2K4蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與病理學(xué)特征的相關(guān)性

婁歡，武明莉，劉芳，楊小風(fēng)

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450000)

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率或者病死率等生存預(yù)后指標(biāo)不佳，流行病學(xué)研究證實(shí)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率可達(dá)372～483/10萬人左右[1]。臨床上子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊邿o進(jìn)展生存期的縮短，增加患者 3 年內(nèi)的病死率[2，3]。

在探討子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制的過程中可以發(fā)現(xiàn)，腫瘤相關(guān)蛋白的改變，能夠影響子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的分化、凋亡等過程。蛋白激酶D1（PKD1）能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)的腫瘤相關(guān)蛋白激酶的激活，提高癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄基因的活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞的增殖速度的加快；絲裂原活化蛋白激酶4（MAP2K4）能夠通過影響癌細(xì)胞內(nèi)的MAPK/p38信號(hào)通路，穩(wěn)定癌細(xì)胞的凋亡和浸潤(rùn)過程，抑制癌細(xì)胞的過度浸潤(rùn)導(dǎo)致的臨床病情的進(jìn)展[4，5]。部分研究者探討了PKD1在卵巢癌或者甲狀腺癌等惡性腫瘤中的表達(dá)情況，認(rèn)為PKD1蛋白的表達(dá)濃度的上升與卵巢癌患者臨床病理特征的進(jìn)展密切相關(guān)，認(rèn)為PKD1蛋白的表達(dá)上升能夠?qū)е侣殉舶┗颊哌h(yuǎn)期病死風(fēng)險(xiǎn)的上升[6]，但對(duì)于PKD1蛋白、MAP2K4蛋白在子宮內(nèi)膜癌患者病灶組織中的分析研究不足。為了揭示相關(guān)因子與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系，從而為臨床上子宮內(nèi)膜癌的臨床診療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取病理科于2015年3月至2017年1月收集的80例子宮內(nèi)膜癌組織，探討了相關(guān)指標(biāo)的改變及其與患者臨床病理特征的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取病理科于2015年3月至2017年1月收集的80例子宮內(nèi)膜癌組織，符合要求的40例子宮內(nèi)膜增生患者的子宮內(nèi)膜組織 （對(duì)照組）。

子宮內(nèi)膜癌患者，年齡38～65歲，平均為54.1±9.4歲，國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟分期（FIGO）：Ⅰ期 22例、Ⅱ期26例、Ⅲ期19例、Ⅳ期13例；分化程度：高分化18例、中分化31例、低分化31例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例。對(duì)照組，年齡35～65歲，平均為52.1±11.5歲。兩組研究對(duì)象的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴子宮內(nèi)膜癌患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑵子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前未接受放化療、免疫治療；⑶對(duì)照組為子宮內(nèi)膜增生患者；⑷本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)⑴伴有卵巢及盆腔等部位的其他惡性腫瘤；⑵未經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)；⑶資料缺失不能納入統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 免疫組化染色及判斷方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4μm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidinbiotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 PKD1 蛋白、MAP2K4蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽(yáng)性片及PBS代替一抗分別作為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，高倍顯微鏡下觀察PKD1蛋白、MAP2K4蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

免疫組化結(jié)果判定：PKD1蛋白陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核、MAP2K4蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽(yáng)性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本的PKD1蛋白、MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 子宮內(nèi)膜癌組織中的PKD1蛋白、MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.25%、50.00%，對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織中的PKD1蛋白、MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.50%、82.50%，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表 1。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織中的PKD1、MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與惡性程度指標(biāo)的關(guān)系 低分化、FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌組織中的PKD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著的高于高中分化、FIGO分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌組織（P＜0.05）；見表 2。

表1 兩組標(biāo)本的PKD1蛋白、MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n（%）]

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中的PKD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與惡性程度指標(biāo)的關(guān)系

低分化、FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的子宮內(nèi)膜癌組織中的MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著的低于高中分化、FIGO分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2的子宮內(nèi)膜癌組織（P＜0.05）；見表 3。

表3 子宮內(nèi)膜癌組織中的MAP2K4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與惡性程度指標(biāo)的關(guān)系

3 討論

子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的持續(xù)性異常分裂，能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜來源惡性腫瘤的發(fā)生，特別是在合并有雌激素受體敏感性上調(diào)的患者中，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高。臨床上的長(zhǎng)期觀察認(rèn)為，子宮內(nèi)膜癌的五年生存率不足45%[7]，包括手術(shù)在內(nèi)的相關(guān)綜合性治療措施治療后的無瘤生存時(shí)間不足36個(gè)月[8]。免疫靶向治療能夠在婦科惡性腫瘤的治療過程中發(fā)揮重要的作用，其能夠抑制腫瘤的復(fù)發(fā)，提高患者的整體生存預(yù)后水平[9]。而本次研究對(duì)于子宮內(nèi)膜癌患者病灶組織中的相關(guān)因子的表達(dá)分析，能夠?yàn)榕R床上子宮內(nèi)膜癌的免疫靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

PKD1蛋白主要存在于平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞或者間質(zhì)細(xì)胞中，PKD1蛋白的表達(dá)濃度的上升，能夠提高癌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄基因的活性[10]。PKD1能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞生物學(xué)特征的改變，進(jìn)而提高癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和自我增殖的能力。基礎(chǔ)領(lǐng)域方面的研究還認(rèn)為，PKD1蛋白的表達(dá)濃度上升，能夠提高子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞對(duì)于基底膜的突破能力，導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的提升[3]；MAP2K4是MAPK信號(hào)通路相關(guān)因子，其對(duì)于下游P38蛋白或者JAPK蛋白的調(diào)控作用，能夠穩(wěn)定癌細(xì)胞的細(xì)胞周期，避免癌細(xì)胞的過度增殖[4]。MAP2K4能夠穩(wěn)定腫瘤干細(xì)胞的活性，抑制腫瘤干細(xì)胞的激活導(dǎo)致的婦科惡性腫瘤臨床分期的進(jìn)展[11]。部分臨床研究主要通過免疫組化分析了PKD1蛋白在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為PKD1蛋白表達(dá)濃度的上升能夠?qū)е掳┘?xì)胞過度分裂效應(yīng)的發(fā)生[6]，但對(duì)于MAP2K4的分析研究不足。

本次研究通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，PKD1、MAP2K4在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中的表達(dá)陽(yáng)性率均明顯的改變，其中PKD1的表達(dá)陽(yáng)性率明顯的上升，而MAP2K4蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率明顯的下降，提示了PKD1、MAP2K4的表達(dá)異常均能夠影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程，通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要與PKD1、MAP2K4的下列作用有關(guān)[12-14]：⑴PKD1的表達(dá)上升提高癌細(xì)胞內(nèi)多種腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致癌細(xì)胞的分化異常、凋亡抑制；⑵MAP2K4的表達(dá)下降，影響到了下游JAPK蛋白的生物學(xué)活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞的細(xì)胞周期的調(diào)控紊亂。趙彩琴等[15]研究者也認(rèn)為，在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中，PKD1的表達(dá)陽(yáng)性率可平均上升30%以上，特別是在短期內(nèi)腫瘤范圍擴(kuò)散較為明顯，子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞浸潤(rùn)肌層的患者，PKD1的表達(dá)上升更為明顯。臨床病理特征的相關(guān)分析研究可見，在癌細(xì)胞分化程度較差、臨床分期較晚、發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等人群中，PKD1的表達(dá)陽(yáng)性率較高，提示了PKD1的表達(dá)對(duì)于子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的影響，這主要由于PKD1的表達(dá)提高了癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力，導(dǎo)致癌細(xì)胞的分化成熟能力異常，并提高了癌細(xì)胞對(duì)于盆腔內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)PKD1蛋白的表達(dá)與癌細(xì)胞浸潤(rùn)子宮肌層的關(guān)系，提示PKD1的表達(dá)并不能提高癌細(xì)胞突破子宮基底膜組織的能力。在分析AP2K4與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征關(guān)系的過程中發(fā)現(xiàn)，AP2K4的表達(dá)缺失與癌細(xì)胞的分化障礙，子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期的進(jìn)展，提高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)、提高癌細(xì)胞浸潤(rùn)子宮肌層的能力。但部分研究者并未發(fā)現(xiàn)MAP2K4的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[11]，存在相關(guān)差異考慮與MAP2K4蛋白檢測(cè)抗體的敏感性差異有關(guān)。

綜上所述，在子宮內(nèi)膜癌患者中，PKD1的表達(dá)明顯上升，而MAP2K4的表達(dá)明顯的下降，同時(shí)PKD1、MAP2K4的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。