寧鄉豬GLP2R基因多態性研究

曾青華

摘 要：為探討寧鄉豬遺傳多樣性，本研究以外來豬種大白豬為對照，研究了寧鄉豬GLP2R基因的多態性。通過限制性片段長度多態性聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP）分析檢測了該基因A/G位點。結果表明，寧鄉豬全部為GG型，大圍子豬和黔邵花豬的優勢等位基因都為G；而外來品種（大白豬）的優勢等位基因為A，其基因頻率為0.6433，中外品種的差異較大。本研究為寧鄉豬的保種和選育提供了有益的資料。

關鍵詞：豬；GLP2R基因；遺傳多態性

寧鄉豬是我國著名的四大地方豬品種之一，原產于湖南省寧鄉縣的流沙河及草沖一帶，其特征是“絲頸葫蘆肚，耳薄嘴筒齊，稀毛現薄皮，魚尾后腳直，奶子一斬齊，四腳要撒蹄”、“烏云蓋雪銀頸圈”。其體型中等，體質疏松細致，體軀呈圓筒狀，毛色為黑白花，四肢、肋腹及頸下部為白色，頭和臀部呈黑色。GLP2R屬于G蛋白偶聯受體家族[1]。GLP2R為GLP2的特異性受體，GLP2與其受體結合從而發揮作 用[2-3]。Luo等[4]認為GLP2R基因與豬肌內脂肪含量有關。

本研究首次檢測了寧鄉豬GLP2R基因的多態性，旨在為揭示豬GLP2R基因的分子遺傳機制奠定基礎，并為寧鄉豬保種和選育提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

以4個地方豬種（大圍子豬、寧鄉豬、沙子嶺豬、黔邵花豬）和1個外來豬種（大白豬）為試驗材料，共計523頭，分別采取豬耳組織樣品，于-20 ℃保存。

1.2 基因組DNA提取

基因組DNA提取按常規酚-氯仿法進行。

1.3 引物合成及聚合酶鏈反應擴增

用Primer Premier 5.0軟件設計引物，其中正向引物：5'-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3'；反向引物：5'-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3'，由華大基因公司合成。聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）體系：2×PCR Master·Mix 10 μL，雙蒸水8.0 μL，引物1.0 μL，基因組DNA 1.0 μL。PCR擴增程序：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s；55 ℃復性30 s；72 ℃延伸30 s，共35個循環；72 ℃延伸 5 min；4℃保存。

2 結果與分析

2.1 基因型分型

在擴增的746 bp的片段中，709 bp處A/G突變位點導致了限制性內切酶BstE Ⅱ的變化。GLP2R基因的A/G位點存在3種基因型，分別為GG基因型（506 bp、240 bp）、AG基因型（746 bp、506 bp、240 bp）和AA基因型 （746 bp）（圖1）。

2.2 豬GLP2R基因的多態性分析

GLP2R基因A/G突變位點PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型頻率見表1。大圍子豬和黔邵花豬這兩個地方品種的優勢等位基因都為G；而外來品種（大白豬）的優勢等位基因為A，基因頻率為0.6433。從基因型分布頻率看，GG型占優勢，AA型個體較少，只在沙子嶺豬中發現1個，在黔邵花豬中發現4個，在桃源黑豬中檢出15個；但大白豬中GG型較少（41個），而AA型和AG型分別有125個和127個。

3 討論與結論

寧鄉豬GLP2R基因A/G位點基因型全部為GG型，可能的原因是該品種經過長期高度近交的人工選育，此位點已全部純合，這也反映了該品種比較純。大圍子豬在該位點也是全部為GG型。沙子嶺豬和黔邵花豬G等位基因為優勢等位基因，而在外來品種（大白豬）中A等位基因為優勢等位基因，這也反映了中外品種的遺傳背景差異大。在該位點上的差異有望作為品種標記的一種手段，應用于標記輔助選擇。□□

參考文獻：（4篇，略）