基于板藍根中(R,S)-告伊春含量研究板藍根加工方法

王 林，金傳山,2,3，張 偉,2,3，鄭曉倩，朱月健

(1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012；2.中藥復(fù)方安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012；3.中藥飲片制造新技術(shù)安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012；4.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800)

板藍根為十字花科植物菘藍IsatisindigoticaFort.的干燥根，有清熱解毒、涼血利咽之功效[1]。板藍根作為傳統(tǒng)抗病毒中藥之一，2015年版《中華人民共和國藥典》即以(R,S)-告伊春作為含量測定項，現(xiàn)代藥理研究表明，(R,S)-告伊春是板藍根水提液中明確的抗病毒活性成分[2]。而(R,S)-告伊春是由芥子苷類物質(zhì)(表原告伊春和原告伊春)在加熱或其他條件下發(fā)生降解反應(yīng)轉(zhuǎn)化而得到的。因為芥子苷類物質(zhì)并無生物活性，只有被降解后才具有抗病毒的活性[3-4]。

課題組前期產(chǎn)地調(diào)研時發(fā)現(xiàn)，黑龍江產(chǎn)板藍根在產(chǎn)地加工過程中存在兩個問題：一是在產(chǎn)地加工過程中，以曬干為主要干燥方式，這種模式獲得的板藍根藥材中(R,S)-告伊春的含量僅能達到《中華人民共和國藥典》規(guī)定的下限，品質(zhì)較差；二是中成藥加工中，直接將產(chǎn)地曬干的板藍根藥材破碎為粗顆粒投料使用，這種生產(chǎn)模式不符合優(yōu)質(zhì)藥材生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)飲片，進而生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)中成藥的指導(dǎo)原則。

因此，本研究以黑龍江大慶、齊齊哈爾等生產(chǎn)的板藍根為研究對象，共收集4批新鮮板藍根藥材以及15批曬干藥材，采用高效液相色譜法測定板藍根中(R,S)-告伊春含量，對比板藍根烘干品與曬干品、板藍根藥材軟化切制形成飲片與板藍根藥材直接破碎成顆粒之間的質(zhì)量差異，以期通過工藝優(yōu)化提升板藍根質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(G1312C二元泵，G1316B二極管陣列檢測器)：美國安捷倫公司；DZKW-S-4型電熱恒溫水浴鍋：上?？坪銓崢I(yè)發(fā)展有限公司；Sartorius BSA224S 萬分之一電子天平：賽多利斯科學儀器北京有限公司；Sartorius ME5百萬分之一電子天平：德國Sartorius公司；電熱鼓風式干燥箱：上海博迅實業(yè)有限公司。

1.2 試藥 (R,S)-告伊春對照品(批號Z27M8X36933，純度≥98%)：上海源葉生物科技有限公司；甲醇(色譜級)；純凈水：杭州娃哈哈公司。

19批藥材均于2017年10月采自黑龍江省大慶市及齊齊哈爾市等地，采收信息見表1。所采樣品經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學俞年軍教授鑒定為十字花科植物菘藍IsatisindigoticaFort.干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 (R,S)-告伊春含量測定

2.1.1 供試品制備 取本品粉末(過4號篩)約1 g，精密稱定，置圓底瓶中，精密加入水50 mL，稱定質(zhì)量，煎煮2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用水補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 對照品制備 取(R，S)-告依春對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為40.70 μg/mL的對照品溶液，即得。

2.1.3 色譜條件 Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱；以甲醇-0.02%磷酸溶液(7∶93)為流動相；檢測波長為245 nm。理論板數(shù)按(R，S)-告依春峰計算應(yīng)不低于5 000。

2.2 板藍根烘干藥材與曬干藥材(R,S)-告伊春含量比較

2.2.1 不同溫度干燥對板藍根中(R,S)-告伊春含量的影響 取S16新鮮板藍根樣品，洗凈，平攤至表面無水珠。選擇粗細均勻的板藍根，置于敞口式烘干機，烘干組按照40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃不同溫度梯度設(shè)置，直至烘干；曬干組置于空曠地方曬干，干燥程度以掰斷有清脆響聲即可。依據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》板藍根項下(R,S)-告伊春含量測定法進行測定，不同烘干溫度對板藍根中(R,S)-告伊春含量的影響見表2。

表1 板藍根藥材樣品信息

表2 不同溫度干燥對板藍根(R,S)-告依春含量的影響(n=3)

2.2.2 不同產(chǎn)地板藍根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比較 取3批不同產(chǎn)地新鮮板藍根樣品，洗凈，平攤至表面無水珠。將烘干組板藍根置于敞口式烘干機，60 ℃烘干；將曬干組板藍根置于空曠地方曬干，測得不同工藝下板藍根(R,S)-告伊春含量。結(jié)果表明，60 ℃烘干工藝能夠明顯提升板藍根中(R,S)-告伊春含量。見表3、圖1。

2.3 板藍根飲片與板藍根藥材粗顆粒中(R,S)-告伊春含量比較

2.3.1 板藍根飲片軟化切制工藝正交實驗優(yōu)選 取S16板藍根曬干藥材，除去雜質(zhì)，凈選粗細均勻的板藍根藥材300 g，平行9份，以浸潤用水量(A)、浸潤時間(B)、飲片厚度(C)和烘干溫度(D)為考察因素，采用L9(34)正交試驗表優(yōu)選軟化切制工藝，將9份平行樣置于托盤中，均勻擺放，每隔1 h噴淋1次，潤透，取出，切片，烘干。取出放涼，置于塑封袋中，備用。見表4、表5。

表3 不同產(chǎn)地板藍根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比較(n=3)

注：1.(R,S)-告伊春對照品；2.板藍根60 ℃烘干藥材；3.板藍根曬干藥材

圖1 板藍根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量對照色譜圖

表5 板藍根飲片軟化切制工藝優(yōu)選正交試驗(n=2)

由表5直觀分析可知，影響板藍根軟化切制的主次因素依次是D、A、B、C，軟化切制最佳工藝組合為A1B1C2D2，即0.6倍水浸潤12 h，飲片厚度為3 mm，60 ℃烘干。

2.3.2 板藍根粗顆粒與板藍根飲片(R,S)-告伊春含量比較 按照同一組樣品平行對照原則，采用“2.3.1”項中優(yōu)選出的最佳軟化切制工藝對15批不同來源的板藍根進行加工，得到軟化切制前后板藍根中(R,S)-告伊春含量。結(jié)果表明，軟化切制過程能明顯提升板藍根中(R,S)-告伊春的含量。見表6、圖2。

表6 板藍根藥材及軟化切制后飲片(R,S)-告伊春含量測定(n=3)

圖2 (R,S)-告伊春對照品(1)、板藍根飲片(2)

3 討論

在烘干工藝研究中，60 ℃烘干所得板藍根(R,S)-告伊春含量最高。對比同一批新鮮板藍根藥材以60 ℃烘干和曬干兩種工藝獲得的(R,S)-告伊春含量，發(fā)現(xiàn)60 ℃烘干制得的板藍根藥材中(R,S)-告伊春含量明顯高于曬干者，且烘干法干燥藥材大約需要12～14 h，曬干法則需要15 d左右。烘干板藍根不僅有效成分(R,S)-告伊春含量得到提升，而且加工周期短，因此建議產(chǎn)地加工以烘干法代替曬干法，以提升黑龍江產(chǎn)板藍根的質(zhì)量。

在軟化切制研究中，利用正交設(shè)計試驗法優(yōu)選出最佳的軟化切制工藝為0.6倍水，噴淋12 h，切片厚度3 mm，60 ℃烘干。通過比較板藍根粗顆粒與板藍根飲片(R,S)-告伊春含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過軟化切制再烘干的工藝過程能明顯提升板藍根中(R,S)-告伊春含量。但由于板藍根烘干成本較高，故難以在產(chǎn)地全面推廣烘干法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的曬干法，軟化切制工藝研究表明，若使用產(chǎn)地曬干品藥材作為中成藥投料，需要采用軟化切制后的飲片，以確保中成藥的質(zhì)量。

(R,S)-告伊春是一對對映體，分別為R-告伊春和S-告伊春，現(xiàn)有文獻研究表明，R-告伊春是板藍根抗病毒的有效成分[2]，而S-告伊春具有致甲狀腺腫大的不良反應(yīng)[5]。本研究表明，烘干工藝及軟化切制工藝均能使板藍根中(R,S)-告伊春含量升高，而其提升的是R-告伊春還是S-告伊春則有待進一步研究，從而更加科學地評價兩種工藝的合理性。

[安徽省高?？蒲袆?chuàng)新平臺團隊(中藥飲片產(chǎn)地加工與炮制一體化關(guān)鍵技術(shù)研究創(chuàng)新團隊)對本課題給予了支持，謹致謝意！]