IL-8基因rs4073位點(diǎn)與新疆維吾爾族男性高尿酸血癥患者關(guān)聯(lián)性研究

張 蓓，陸 影，瑪伊娜·卡哈爾，迪麗達(dá)爾·庫(kù)德熱提，田 戈，宋睿睿，張曉波，楊珊珊，孫玉萍△

(新疆醫(yī)科大學(xué)：1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；2.第一附屬醫(yī)院； 3.附屬中醫(yī)醫(yī)院/新疆呼吸病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；4.研究生學(xué)院；5.第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆烏魯木齊 830011)

痛風(fēng)是終生性疾病，高尿酸血癥期是痛風(fēng)的前期，只有大概10%的高尿酸血癥患者會(huì)發(fā)展為痛風(fēng)。白細(xì)胞介素-8(IL-8)作為重要的趨化因子與急性和慢性炎癥過(guò)程的起始和級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)有關(guān)，且已有研究證實(shí)，IL-8與痛風(fēng)具有顯著的相關(guān)性[1-2]。IL-8的基因位于染色體4q13-q21，含4個(gè)外顯子、3個(gè)內(nèi)含子和1個(gè)近側(cè)啟動(dòng)區(qū)[3]。有研究表明，rs4073位點(diǎn)與IL-8的轉(zhuǎn)錄水平有關(guān)[4-8]。新疆是多民族聚居地區(qū)，不同的民族有其不同的遺傳背景，然而迄今為止，尚沒(méi)有研究對(duì)新疆維吾爾族高尿酸血癥與白介素基因多態(tài)性之間的關(guān)系進(jìn)行探討，本研究對(duì)維吾爾族IL-8基因rs4073位點(diǎn)的基因多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了與高尿酸血癥的關(guān)系，旨在探索高尿酸血癥患者急性痛風(fēng)發(fā)作可能的遺傳標(biāo)記物，為今后高尿酸血癥患者發(fā)展為痛風(fēng)起到預(yù)警作用，并提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2012年2月至2013年9月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、喀什第一人民醫(yī)院、吐魯番醫(yī)院、托里縣人民醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的維吾爾族男性1 168例作為研究對(duì)象，年齡20～60歲，3代直系血親在采樣地區(qū)穩(wěn)定居住20年以上，相互之間無(wú)血緣關(guān)系，其中健康維吾爾族男性594例(對(duì)照組)，高尿酸血癥維吾爾族男性574例(高尿酸血癥組)。要求所有研究對(duì)象自愿參加，并知情同意。高尿酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)定義[9]：空腹血清尿酸(SUA)超過(guò)417 μmol/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)任何可導(dǎo)致核酸代謝亢進(jìn)的血液系統(tǒng)疾病，腫瘤放、化療后及藥物所致的尿酸升高的患者；(2)因嘌呤代謝酶導(dǎo)致的尿酸代謝缺陷，檢測(cè)尿液中的尿酸與肌酐比值等指標(biāo)；(3)近期服用過(guò)易引起血尿酸水平上升的藥物(阿司匹林、噻嗪類(lèi)利尿劑、吡嗪酰胺類(lèi)藥物等)的患者。

1.2主要儀器與試劑 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)伯樂(lè)BIO-RAD CFX96 touch)、核酸自動(dòng)提取儀(北京百泰克生物有限公司)等。

1.3方法 采集研究對(duì)象清晨空腹靜脈血5 mL，其中2 mL置于無(wú)菌乙二胺四乙酸抗凝采血管中用于DNA的提取，分裝在2 mL的EP管中并置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ａ硗? mL置于另一促凝管中用于生化指標(biāo)的測(cè)定。Taqman探針和引物由生命技術(shù)公司合成。探針和引物合成及實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列上游引物：5′TTATCTAGAAATAAAAAAGCATACA3′，下游引物：5′TTGATAATTCACCAAATTGTGGAGC3′，長(zhǎng)度312 bp。均由美國(guó)Invitrogen公司合成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系：DNA樣品為1 μL，Taqman探針為1 μL，PCRmix為5 μL，無(wú)DNase水3 μL，10 μL的終體積。反應(yīng)循環(huán)體系：95 ℃、3 min，95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，40個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1IL-8基因rs4073位點(diǎn)的Hardy-Weinberg檢驗(yàn) 利用擬和優(yōu)度χ2檢驗(yàn)分析對(duì)照組基因型頻數(shù)分布，SNPs位點(diǎn)基因型的頻數(shù)分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說(shuō)明所選用的樣本具有群體代表性，均可用來(lái)作為遺傳標(biāo)記分析IL-8基因與高尿酸血癥的關(guān)系。見(jiàn)表1。

表1 IL-8基因rs4073位點(diǎn)Hardy-Weinberg遺傳平衡 定律檢測(cè)(n=594)

2.2IL-8基因rs4073位點(diǎn)基因型與尿酸的關(guān)系 對(duì)照組該位點(diǎn)各基因型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高尿酸血癥組該位點(diǎn)各基因型TT>AA>AT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3兩組組研究對(duì)象IL-8基因rs4073位點(diǎn)分布頻率比較 高尿酸血癥組與對(duì)照組該位點(diǎn)AT基因頻率均最高，對(duì)照組AA型次之，TT型最低，高尿酸血癥組則TT型次之，AA型最低，兩組研究對(duì)象基因型頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與野生型AA比較，TT基因型具有最高的高尿酸血癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.61)，AT基因型則具有保護(hù)性(OR=0.814)。兩組研究對(duì)象等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A等位基因較T等位基因具有較高的高尿酸血癥發(fā)病危險(xiǎn)(OR=1.309)。見(jiàn)表3。

表2 IL-8基因rs4073位點(diǎn)基因型與尿酸的關(guān)系

2.4IL-8基因rs4073位點(diǎn)基因型相關(guān)性分析 將logistic回歸模型分析結(jié)果中的危險(xiǎn)因素作為協(xié)變量，進(jìn)行基因模型分析做引入?yún)f(xié)變量前后對(duì)比，結(jié)果顯示，協(xié)變量調(diào)整后IL-8基因rs4073位點(diǎn)的相加模型TT基因型，隱性模型TT基因型較AA基因型患高尿酸血癥的風(fēng)險(xiǎn)增高(OR=1.610、1.832，95%CI：1.178～2.200、1.416～2.370，P<0.05)。見(jiàn)表4。

表3 兩組研究對(duì)象IL-8基因rs4073位點(diǎn)分布頻率比較

表4 基因型相關(guān)性分析

3 討 論

高尿酸血癥是痛風(fēng)的前期，外界因素可誘發(fā)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。在歐美等西方發(fā)達(dá)國(guó)家，男性平均有1%～2%的人受到痛風(fēng)的影響[9]。美國(guó)成年人高尿酸血癥和痛風(fēng)患病率分別達(dá)21%、3.9%[10]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，在我國(guó)，高尿酸血癥和痛風(fēng)患病率也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。20世紀(jì)80年代痛風(fēng)還屬少見(jiàn)疾病，而2006年對(duì)山東省沿海城市(青島、煙臺(tái)、威海、日照、東營(yíng))的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該區(qū)域20歲以上居民有13.19%的人血尿酸升高，1.14%被確診為痛風(fēng)患者[11]。其他沿海及內(nèi)陸一些城市也發(fā)現(xiàn)，成年人高尿酸血癥及痛風(fēng)患病率呈類(lèi)似的上升趨勢(shì)。除飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣外，基因因素也在高尿酸血癥和痛風(fēng)的病理機(jī)制中具有重要作用。炎癥細(xì)胞因子具有多種生物學(xué)效應(yīng),是一類(lèi)主要由免疫系統(tǒng)細(xì)胞生成的內(nèi)源性多肽，亦可介導(dǎo)多種免疫反應(yīng)。

本研究結(jié)果顯示，維吾爾族高尿酸血癥組患者IL-8基因rs4073位點(diǎn)各基因型TT>AA>AT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IL-8基因rs4073位點(diǎn)顯示，突變型基因罹患高尿酸血癥的風(fēng)險(xiǎn)大于野生型。T等位基因攜帶者罹患高尿酸血癥的危險(xiǎn)是攜帶A等位基因的1.309倍。從生化指標(biāo)和基因頻率分布可見(jiàn)，TT基因型尿酸值高于其他基因型，由此推測(cè)，T基因突變是維吾爾族高尿酸血癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)基因型。

IL-8作為一種重要的致炎性細(xì)胞因子，屬嗜中性粒細(xì)胞因子，具有對(duì)嗜中性粒細(xì)胞的趨化和激活作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫炎性反應(yīng)。IL-8屬調(diào)節(jié)炎癥的介質(zhì)，在抗感染、炎癥和免疫過(guò)程具有重要的調(diào)節(jié)作用，與多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展存在緊密聯(lián)系[12-15]。本研究結(jié)果顯示，IL-8基因rs4073位點(diǎn)的突變與尿酸值的增高和高尿酸血癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有密切的關(guān)系，推測(cè)該位點(diǎn)與由高尿酸血癥發(fā)展為痛風(fēng)也具有密切的關(guān)系。

總之，高尿酸血癥是一種多基因疾病，其可誘發(fā)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。高尿酸血癥期患者無(wú)明顯臨床癥狀，而一旦發(fā)展為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎便是終身疾病，急性發(fā)作期患者疼痛難忍，因此，篩查炎癥相關(guān)因子——IL-8 rs基因4073位點(diǎn)的基因多態(tài)性，找到高尿酸血癥發(fā)展為痛風(fēng)的遺傳標(biāo)志物，對(duì)今后可能發(fā)展為痛風(fēng)的高尿酸血癥患者具有一定的預(yù)警和預(yù)防作用，因此，可在不同地域人群中進(jìn)行類(lèi)似研究，以消除地域偏倚，以便發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥發(fā)展為痛風(fēng)的遺傳標(biāo)志物是勢(shì)在必行的。

4 結(jié) 論

維吾爾族高尿酸血癥組IL-8基因rs4073位點(diǎn)基因型分布頻率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，攜帶IL-8基因rs4073位點(diǎn)TT基因型人群罹患高尿酸血癥的危險(xiǎn)性增加，IL-8rs基因4073位點(diǎn)的基因多態(tài)性可作為高尿酸血癥患者遺傳標(biāo)記物在不同地域人群中進(jìn)行進(jìn)一步研究。