德陽地區地中海貧血基因型分析

王 秀，曹桂群，文 強，徐志紅

(德陽市人民醫院生殖遺傳科，四川德陽 618000)

地中海貧血(地貧)是一種常染色體隱性遺傳病，是由于編碼珠蛋白的基因發生缺失或點突變，使珠蛋白鏈合成缺如或不足所致的遺傳性溶血性貧血。在我國主要以α地貧和β地貧最為常見[1]。在長江以南地區，廣東、廣西、四川、海南等地發病率較高。由于重型α地貧患兒大多數在懷孕的中晚期宮內死亡，而重型β地貧患兒除定期輸血、除鐵治療和造血干細胞移植外，尚無有效的治愈方法，只能通過生育前進行胎兒羊水細胞的地貧基因產前診斷，提早發現并終止妊娠，從而避免重型地貧患兒的出生[2]。為初步了解德陽地區人群中α地貧和β地貧基因型的分布情況，本研究對2 498例疑診地貧患者進行了基因型分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年2月至2018年9月本院門診及住院部就診的2 498例疑診地貧患者作為研究對象。血常規檢測為小細胞低色素性貧血，以平均紅細胞比容小于80 fL，平均紅細胞血紅蛋白小于27 pg作為篩查依據[3]，部分患者為有地貧家族史，需進一步確診者。其中男462例，女2 036例；年齡生后5 h～84歲。

1.2樣本采集與處理 采用枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈全血2 mL，及時按DNA提取試劑盒說明書的方法提取DNA檢測或置于-20 ℃冰箱冷凍保存并于7 d內提取DNA檢測。

1.3主要設備與檢測試劑 主要設備為美國BIO-RAD定量擴增儀，凱普HB 2012A核酸分子雜交儀等。采用潮州凱普生物化學有限公司生產的血液基因DNA提取試劑盒(離心柱型)和α/β地貧基因檢測試劑盒。

1.4方法 采用聚合酶鏈反應(PCR)和反向斑點雜交技術進行地貧基因檢測(PCR+導流雜交法)，檢測3種缺失型α-地貧(--SEA、-α3.7、-α4.2)、3種突變型α-地貧(CS、QS、WS)及17個位點的19種突變型β-地貧。α/β地貧基因擴增及檢測采用凱普配套DNA提取試劑盒提取DNA基因組，提取的樣本DNA進行PCR擴增，擴增產物進行導流雜交。雜交顯色后人工肉眼判讀，陽性結果為藍紫色斑點。操作過程參照凱普地貧基因檢測試劑說明書進行。

2 結 果

2.1地貧基因檢出率 2 498例疑診患者檢出地貧基因攜帶者1 537例，檢出率為61.53%，共檢出41種地貧基因突變類型，其中α-地貧756例，占49.19%(756/1 537)，β-地貧752例，占48.93%(752/1 537)，αβ復合型地貧29例，占1.89%(29/1 537)。

2.2α地貧的基因類型及其分布 756例α-地貧基因攜帶者中檢出13種基因型，前4位α-地貧的基因型及構成比分別為--SEA/αα(74.87%)、-α3.7/αα(12.70%)、--SEA/αα合并-α3.7(3.70%)、-α4.2/αα(2.65%)。根據臨床特點區分，靜止型145例(19.18%)，標準型571例(75.53%)，中間型40例(5.29%)。見表1。

表1 α-地貧基因型及構成比

2.3β-地貧的基因類型及其分布 752例β-地貧基因突變類型以CD41-42(35.37%)、IVS-2-654(26.60%)、CD17(24.20%)、-28(5.98%)為主。其基因型和構成比見表2。

表2 β-地貧基因型及構成比

2.4αβ復合地貧的基因類型 αβ復合地貧29例，涉及5種α-地貧基因突變類型和5種β-地貧基因突變類型。復合型α-地貧基因型以--SEA/αα(48.28%)、-α3.7/αα(31.03%)為主，β-地貧基因突變類型多見于CD41-42(58.62%)。見表3。

表3 αβ復合地貧基因型及構成比[n(%)]

3 討 論

地貧是全球分布最廣、累及人群最多的一種單基因遺傳病。在我國南方各地報道的地貧檢出率為2.50%～20.00%[4]。由于地貧基因攜帶率存在明顯的地域差異，在不同種族、不同地域具有不同的分布特點，德陽地區2 498例疑診患者檢出地貧基因攜帶者1 537例，檢出率為61.53%，α-地貧檢出率為30.26%，β-地貧檢出率為30.10%，αβ復合地貧檢出率為1.16%，檢出率明顯高于四川自貢、遂寧、瀘州地區等。α型和β型地貧基因陽性病例的比值為1.01∶1，較自貢(1.27∶1)低，高于遂寧(0.58∶1)、瀘州(0.65∶1)[5-7]。表明德陽地區地貧檢出率較高，α地貧與β地貧檢出率相接近，與毗鄰地區明顯不同。

本研究α地貧756例，檢出13種α地貧基因類型，主要以東南亞型(--SEA/αα缺失型)為主(74.86%)，α-3.7/αα缺失型占12.70%，--SEA/α3.7缺失型占3.70%，-α4.2/αα缺失型占2.65%。德陽地區α地貧基因常見類型與賀鈺磊等[8]報道的四川地區相似，但構成比稍有所不同。其中非缺失型比例為3.97%，以HbQS突變占多數(15/30)，這點又與四川地區、廣東和廣西地貧高發地區非缺失突變以HbCS突變占多數不同[8-10]。

本研究β地貧752例，檢出12種突變基因類型，15種基因組合形式，雜合突變為主。前4位依次為CD 41-42、IVS-2-654、CD17、-28。這4類基因型總例數為693例，占92.15%。德陽地區β地貧主要類型為CD 41-42，與相關研究結果相似[5-6]，與陳紅英等[7]和唐敏等[11]報道的四川瀘州地區和川南地區以CD17突變型為主有差異。

本研究αβ復合型地貧29例(1.89%),13種基因突變類型，與相關文獻報道的自貢地區復合型地貧檢出率為2.06%相近[5]。αβ復合地貧基因型以β-地貧CD41-42復合α-地貧——SEA/αα和-α3.7/αα為主，可能與--SEA/αα、-α3.7/αα與CD41-42在德陽地區地貧基因型中最為常見有關。據文獻報道，αβ復合型地貧患者無論與α或β地貧患者婚配，下一代均可能生出中或重型地貧患兒，如雙方均為αβ復合型地貧患者，生出重型患兒的概率將會大大提升[12]。

德陽地區人口歷經“湖廣填四川”、支援三線建設人群的遷移混雜，遺傳背景復雜，地貧檢出率較高且基因類型較多，共檢出41種，α地貧與β地貧攜帶率相接近，分布具有區域性特點。本研究較好地了解了德陽地區地貧的基因型檢出情況及分布特點，為開展地貧的產前診斷提供了有益資料。因此，作為高發地區,積極開展地貧人群的基因檢測，對夫婦雙方均為地貧攜帶者或已生育過地貧兒的孕婦進行產前診斷，防止重型地貧兒出生是降低地貧發生率最有效的預防措施[8]。有效貫徹遺傳咨詢及產前診斷，對地貧的預防、診治均具有十分重要的臨床意義。