人腦膠質(zhì)瘤組織中HMGB1 NF-кB的表達(dá)及臨床意義

吳昊 鄭卜毅 鄒詣 童凌云 王歐洋 朱鵬磊

膠質(zhì)瘤是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，約占原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的28%。2007年WHO制定的分類標(biāo)準(zhǔn)將膠質(zhì)瘤分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)，其對(duì)臨床診斷膠質(zhì)瘤及判斷其預(yù)后提供了參考依據(jù)。然而，膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，因此，探討膠質(zhì)瘤疾病發(fā)生及惡性進(jìn)展的相關(guān)機(jī)制，對(duì)延長(zhǎng)患者生存周期及改善預(yù)后有著重要意義。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是近來年臨床研究的熱點(diǎn)，其定位于染色體13q12，是一種廣泛存在于哺乳動(dòng)物中非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，主要參與多種生物行為，包括基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞炎癥反應(yīng)等［1-2］。已有研究發(fā)現(xiàn)HMGBl/NF - kB參與多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展過程，并與腫瘤的病理特征關(guān)聯(lián)密切。在此基礎(chǔ)上，本研究通過分析對(duì)比76例膠質(zhì)瘤組織及20例正常腦組織中HMGBl、NF-kB的陽(yáng)性表達(dá)情況，探討HMGB1及NF-kB與膠質(zhì)瘤的臨床因素、病理特征的相關(guān)性，研究其在膠質(zhì)瘤疾病發(fā)生、病理過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年9月至 2017年9月溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)外科收治的76例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的膠質(zhì)瘤患者術(shù)后腫瘤標(biāo)本設(shè)為觀察組，其中男44例，女32例；年齡32～81歲，平均（55.42 ± 5.18）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）影像資料MRI提示為膠質(zhì)瘤，病理報(bào)告明確為膠質(zhì)瘤；（2）均為首次手術(shù)，無復(fù)發(fā)二次手術(shù)；（3）術(shù)前未行放化療。并依照2007版WHO制定神經(jīng)腫瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)：低級(jí)別膠質(zhì)瘤（LGG）（Ⅰ、Ⅱ級(jí)），高級(jí)別膠質(zhì)瘤（HGG）（III、IV級(jí)）。另選取20例同期行顱內(nèi)減壓術(shù)的患者術(shù)后正常腦組織設(shè)為對(duì)照組。本項(xiàng)目經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查及備案，并與患者簽定知情同意書。

1.2 免疫組化染色評(píng)估 標(biāo)本在4%多聚甲醛溶液中固定24h，石蠟包埋。蠟塊切至厚度為3 μm切片。隨后按常規(guī)制片步驟進(jìn)行二甲苯脫蠟，乙醇水化，抗原孵化，抗原修復(fù)，脫色脫水，蓋玻片。使用尼康高分辨顯微鏡觀察結(jié)果。選擇每張切片免疫反應(yīng)較強(qiáng)區(qū)域，高倍視野（×400）觀察5個(gè)不重復(fù)視野，計(jì)數(shù) HMGB1及NF - kB染色細(xì)胞，染色表達(dá)率=染色細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。無染色細(xì)胞為0分，染色率≤25%為1 分，25%＜染色率≤50%為2分，50%＜染色率≤75%為3分，染色率＞75%為4分；陰性（-）：0分，低表達(dá)（+）：1～2分，高表達(dá)（+ +）：3～4分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料組間比較行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較行t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對(duì)照組之間HMGB1、NF-kB表達(dá)陽(yáng)性水平的比較 見表1。

表1 HMGB1、NF-kB在正常組織和膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)［n（%）］

2.2 HMGB1、NF-kB的蛋白表達(dá)與腫瘤惡性程度的相關(guān)性分析 見表2。

表2 HMGB1、NF-kB的蛋白表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析［n（%）］

2.3 HMGBl、NF-kB在膠質(zhì)瘤樣本中陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性 在膠質(zhì)瘤標(biāo)本中，HMGBl與NF-kB的陽(yáng)性表達(dá)逐漸增高，二者呈正相關(guān)（r=0.316，P=0.0037）。見表3。

表3 HMGB1、NF-kB在膠質(zhì)瘤組織中的相關(guān)性（n）

3 結(jié)論

高遷移率族蛋白（HMG）是一類高度保守的DNA結(jié)合蛋白，其廣泛存在于腦、心、肝、脾及淋巴組織的真核細(xì)胞內(nèi)，HMG族蛋白分為HMGA、HMGB及HMGN家族。HMGB又分為 HMGB1 和HMGB2，存在于細(xì)胞核內(nèi)HMGB1主要參與包括基因轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)等生物學(xué)過程，而存在于細(xì)胞核外HMGB1可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，調(diào)控細(xì)胞增殖、分化及腫瘤生長(zhǎng)等生理過程。目前多種研究發(fā)現(xiàn)HMGB1表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌、胃惡性腫瘤組織中HMGB1呈高表達(dá)水平，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、遷徙和周圍血管的生成［3-4］。作者通過免疫組化法發(fā)現(xiàn)HMGB1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平對(duì)比正常腦組織明顯升高，因此作者認(rèn)為其與膠質(zhì)瘤發(fā)生密切相關(guān)。

核因子（NF - kB）屬于Rel蛋白家族成員的一員，以 p50 /p65與抑制蛋白相結(jié)合而形成多聚體的形式存在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，是目前已知細(xì)胞內(nèi)眾多免疫和炎癥反應(yīng)體系的中間調(diào)節(jié)因子之一。其廣泛存在于真核生物體內(nèi)，能與免疫球蛋白結(jié)合形成蛋白因子從而調(diào)控基因的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄。NF-kB亦是重要的炎癥通路的中間調(diào)節(jié)因子，在細(xì)胞核外與許多細(xì)胞信號(hào)通路有著密切的關(guān)系，參與免疫反應(yīng)、細(xì)胞增殖、遷移及腫瘤細(xì)胞侵襲等過程［5］。已有研究表明NF-kB在胃癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)明顯增加，其高表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為密切相關(guān)［6］。并且研究還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外的HMGB1可與其受體TLR4或 RAGE結(jié)合，激活細(xì)胞外重要的細(xì)胞通路，如 MAPK、NF-κB通路，以誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移［7］。本研究發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤中NF-kB的表達(dá)顯著高于正常腦組織，提示膠質(zhì)瘤的發(fā)病過程可能存在NF - kB因子的參與。而且HMGB1、NF-kB二者陽(yáng)性表達(dá)隨著腫瘤惡性程度的升高而逐漸增強(qiáng)，提示其可能涉及膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)、進(jìn)展等過程。另外，通過相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)HMGB1、NF - kB 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中存在正相關(guān)性。然而，目前對(duì)HMGB1- NF-kB如何相互調(diào)節(jié)尚缺乏相關(guān)研究，仍需闡明膠質(zhì)瘤發(fā)病中HMGB1- NF - kB相互如何調(diào)節(jié)的機(jī)制，并為將來膠質(zhì)瘤的診治過程提供理論依據(jù)。