無創DNA檢測在診斷高齡孕婦胎兒非整倍體中的應用

陳梅連 鄒曉紅 胡利輝

（肇慶市高要區人民醫院 廣東 肇慶 526040）

隨著計劃生育政策的改革調整，高齡孕婦數量也在逐年增加，醫學研究證實，隨著孕婦年齡的增長，胎兒出生缺陷和發育異常風險也會增加。所以，加強出生缺陷檢測和產前檢查，對于人口素質的提高具有重要意義。無創DNA產前檢測(NIPT)是一種安全性較高的無創侵入性產前檢查方法。本研究對無創DNA檢測在診斷高齡孕婦胎兒非整倍體中的應用價值進行了分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

本研究選擇分析我院產科2015年1月-2018年10月接受產前檢查2460例產婦的醫療檔案，孕周12～26周，平均（20.5±4.2）周，年齡35～39歲孕婦2350例，年齡40歲以上孕婦110例。

表 羊水染色體核型和NIPT結果分析

1.2 方法

第一，NIPT檢測方法。在無菌條件下抽取10ml外周血，置于EDTA抗凝管中，離心處理后提取血漿，游離出血漿中的DNA，PCR擴增后形成待分析文庫，通過高通量測序方法實施覆蓋度測序，并應用生物信息學分析技術對胎兒染色體非整倍體異常的患病風險進行計算，常見異常包括性染色體異常、13-三體、18-三體、21-三體等。對于低風險檢測結果的孕婦，通過電話隨訪了解胎兒出生后生長發育情況，對結果假陰性情況進行驗證。若孕婦NIPT檢測結果證實為高風險，則可在獲得孕婦認可后實施羊水穿刺，并作出準確判斷。

第二，羊水細胞染色體核型分析。針對于NIPT檢測結果為高風險的孕婦，超聲監測下在云18～24周時實施羊膜腔穿刺手術，抽取20ml羊水樣本，實驗室培養，確定細胞分裂最旺盛時收獲細胞，常規制備染色體實施G顯帶后核型分析，全部樣本均進行50個分裂相計數，確定出2個完整的核型。

第三，觀察指標和診斷標準。染色體異常的陽性診斷標準為羊水細胞染色體核型分析結果，NIPT檢測為陽性的孕婦均接受電話隨訪，確定胎兒圍生期臨床表現，并以此為陰性診斷標準，對NIPT檢測方法的陽性預測值、陰性預測值、特異度和敏感度進行計算。通常情況下，青春期前無法準確判斷出性染色體異常情況，因而本研究不對孕婦的特異度和敏感度等指標進行檢測。

1.3 統計學分析

數據采用SPSS20.0統計軟件進行統計學分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

NIPT檢測結果證實，性染色體高風險患者42例，其中，實施羊膜腔穿刺術治療患者34例，拒絕羊水穿刺而繼續妊娠患者8例，最終失訪。共有4例21-三體高風險患者不愿接受侵入性產前診斷性檢查，其中，直接引產患者2例，接受孕24周系統超聲檢查，并確診為多發性畸形患者2例，并實施引產術終止妊娠。同時，NIPT檢測證實共有2418例患者檢查結果為陰性，并接受電話隨訪，結果證實孕婦均順利分娩，新生兒保健檢查證實無表型異常。NIPT檢測結果與金標準羊水染色體核型分析比較證實，高齡孕婦胎兒非整倍體檢查，陰性預測值為100.00%，陽性預測值為90.91%，特異度為99.93%，敏感度為100.00%。見表。

3.討論

產前篩查與診斷是目前臨床上最為常用的胎兒唐氏綜合征檢查和診斷方法，且產前檢查的主要目標也在于胎兒非整倍體情況的早期檢查和干預，以往臨床使用的超聲影像學檢查和血清學篩查方法存在假陽性率過高以及敏感性不足的問題，因而臨床應用價值不足[1]。隨著計劃生育正常的改革和調整，高齡孕婦數量也逐漸增加，由此所導致的孕育異常核型胎兒問題逐漸凸顯。高齡妊娠是胎兒非整倍體問題產前檢查的主要指征，然而，高齡孕婦通常胎兒來之不易更加珍惜，因而對于羊水穿刺這種侵入性檢查存在疑慮，害怕出現感染或是流產等問題，這就大大降低了孕婦及家屬對于產前診斷的依從性[2]。產前檢查常用有創性操作包括臍血細胞、羊水和絨毛培養的核型分析檢查，這也是非整倍體染色體疾病產前診斷的金標準，然而，侵入性檢查也存在一定陰道流產風險，這就會大大增加孕婦及其家屬的心理負擔[3]。

無創DNA產前檢測是一種較為準確可靠的產前篩查技術，能夠對21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征等進行相對準確的判斷，因而更加適用于高齡孕婦和產前高風險篩查，結合無創DNA檢測結果對是否需要產前介入性診斷進行分析[4-5]。盡管無創DNA檢測屬于一種非診斷性檢查方式，其陽性結果仍然需要深入的有創性診斷加以驗證，且對于染色平衡易位的檢出率較低，無法準確判斷染色體結構異常問題，但是，這一檢查方法具有更高的準確性，能夠有效避免產前穿刺問題，減少有創檢查導致流產、胎兒宮內感染的發生風險，具有假陽性率低、更加準確、檢測時間更早和安全性更高的優勢[6-7]。

綜上所述，無創DNA檢測是一種安全、可靠、快速的高齡孕婦胎兒非整倍體檢測方法，有助于降低新生兒缺陷率，因而推廣應用價值較高。