人胰腺癌細胞系PANC-1細胞培養方法的改良

孫如玉 何志成 江靜 蔣燕 胡秀娟 王振振 吳青杰 李群超 胡賢偉 姜楠 劉超

（1安徽醫科大學基礎醫學院 安徽 合肥 230032）

（2安徽醫科大學第二臨床醫學院 安徽 合肥 230601）

人胰腺癌細胞系中，源自胰腺癌導管細胞的PANC-1細胞被廣泛應用于科學研究中。本課題組以前PANC-1細胞培養采用的是傳統細胞培養方法[1]，培養細胞所用的培養液為90%DMEM/HIGH Glucose (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 加上10% 胎牛血清（BI-FBS）和1%雙抗（青霉素和鏈霉素混合液）[2]；根據實驗中具體操作步驟，對PANC-1細胞的培養方法進行改良。改良后的方法，簡化了步驟，減少污染機率。

1.資料與方法

1.1 細胞株

人胰腺癌細胞系PANC-1細胞；購自中國科學院細胞庫（上海）。

1.2 主要試劑

DMEM/HIGH Glucose(1X）培養基（Hyclone，美國）。

1.3 主要儀器

5%CO2培養箱（Thermo美國），醫用凈化工作臺（蘇州）。

2.改良的PANC-1細胞培養方法

2.1 PANC-1細胞的復蘇

1）準備器械和試劑，常規消毒和復蘇細胞；在標記好的培養皿加入適量的培養液；

2）將細胞懸液吸出直接加入培養皿，充分震蕩混勻；

3）鏡下觀察細胞密度及分布后，置于37℃5%CO2培養箱內孵育，24小時后換液。

2.2 PANC-1細胞的傳代

1）準備器械和試劑，常規消毒；

2）鏡下觀察細胞生長狀態和匯合度，一般于匯合度80%左右進行傳代；

3）常規洗滌、胰酶消化細胞；

4）利用消化的間隙，在新培養皿中加入培養液，作好標記；

5）鏡下觀察細胞脫落和離散；

6）將原培養皿內細胞懸液，平均分配于新培養皿中；震蕩混勻后放37℃，5%CO2培養箱孵育。

3.結果

從2016年8月-2017年9月，本課題組共復蘇PANC-1細胞11次，傳代19次，見圖。

圖 傳統方法和改良方法對比圖

細胞傳統復蘇到傳代和改良復蘇到傳代平均用時差異顯著（P＜0.05）；傳統細胞傳代周期和改良細胞傳代周期間差異不顯著。

4.討論

本課題組人胰腺癌細胞系PANC-1細胞的培養傳統方法主要參考賈連群，雷萍主編的現代基礎醫學理論與技術進展中細胞培養基本技術[1]和賽默飛世爾科技（ThermoFisher Scientific）貼壁細胞培養技術[3]。

細胞凍存液由90%胎牛血清（BI-FBS）和10%二甲亞砜(dimethyl sulPhoxide，DMSO)配制[4]。DMSO作為常用的低溫冷凍保護劑，部分學者認為對大多數細胞無毒性[5]。改良細胞復蘇方法中，是把處于凍存液中的細胞懸浮液直接加入到培養皿中，沒有離心去除DMSO。

改良方法優點：（1）細胞傳代過程中不使用離心機，減少細胞損失和細胞污染的機會；（2）簡化細胞傳代步驟，特別適用于新進人員；（3）可以比較快速增殖細胞。

改良方法缺點：細胞傳代過程中，細胞懸液的分配過程中液量可能會有偏差。解決方法，正常加胰酶消化，加等量的培養液中和并吹打均勻，細胞懸液分配前，要注意一下具體的液量，盡量分配。

綜上所述，基于傳統細胞培養基礎上的改良方法，可以用于人胰腺癌細胞系PANC-1細胞的培養，也為其它細胞培養方法的改良提供參考。