加味升降散治療SD大鼠神經(jīng)病理性疼痛的行為學(xué)觀察*

諶凌燕 陳冬建 吳智兵

（1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院康復(fù)科，廣州 510000；2南方醫(yī)科大學(xué)南海醫(yī)院，佛山 528200；3廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一附屬醫(yī)院腦病科，廣州 510000）

神經(jīng)病理性疼痛 (neuropathic pain,NP) 是由軀體感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而直接造成的疼痛，因其機(jī)制復(fù)雜，臨床上尚無(wú)治療方法可以完全治愈[1～4]。臨床治療NP的主要藥物是阿片類(lèi)藥物、抗驚厥和抗抑郁藥物，這些藥物雖然可以暫時(shí)緩解疼痛，但對(duì)神經(jīng)損傷的修復(fù)及再生無(wú)益，長(zhǎng)期服用甚至有副作用，如引起神經(jīng)的脫髓鞘，使神經(jīng)順應(yīng)性下降等[5]。前期有學(xué)者通過(guò)改良慢性坐骨神經(jīng)縮窄性損傷 (modified chronic constriction injury of the sciatic nerve,MCCI) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明，替米沙坦[6]、右美托咪定、舒芬太尼聯(lián)合[7]、IRF8反義寡核苷酸[8]、帕瑞昔布鈉、甲基強(qiáng)的松龍[9]、辛伐他汀[10]等西藥對(duì)CCI模型大鼠的神經(jīng)病理性疼痛都有一定程度的治療作用，但均存在著治療時(shí)效短、有復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)。

本研究前期根據(jù)中醫(yī)“通則不疼”的治療理念，運(yùn)用具有升降氣機(jī)，通郁散結(jié)作用的名方“加味升降散”應(yīng)用于臨床疼痛相關(guān)疾病的治療取得了較好的效果，臨床報(bào)道也較多，如帶狀皰疹性神經(jīng)痛、原發(fā)性三叉神經(jīng)痛、神經(jīng)性頭痛等[11,12]。但是，針對(duì)加味升降散在治療NP的作用機(jī)制等并不明確，且研究較少。本研究預(yù)通過(guò)構(gòu)建經(jīng)典的足骨神經(jīng)縮窄損傷模型，通過(guò)灌胃不同劑量的加味升降散及不同治療時(shí)間，探討加味升降散治療NP的作用機(jī)制，為加味升降散用于臨床治療疼痛相關(guān)疾病提供理論依據(jù)。

方 法

1.分組

雄性SD大鼠60只，體重為180～200 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。安置于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)飼料：SPF級(jí)，飼養(yǎng)條件：SPF級(jí)動(dòng)物房，大鼠自由攝食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、假手術(shù)組，模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組，每組各10只。具體分組處理如下： ①正常組(n= 10)：無(wú)任何手術(shù)處理，正常飼養(yǎng)。②假手術(shù)組(n= 10)：僅暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)主干，不結(jié)扎；不予藥物處理，術(shù)后第7天開(kāi)始采用同等量生理鹽水灌胃，每日2次(8 am、4 pm)，連續(xù)灌胃21天。③模型對(duì)照組(n= 10)：建立右側(cè)iCCI模型；不予藥物處理，術(shù)后第7天開(kāi)始采用同等量生理鹽水灌胃，每日2次(8 am、4 pm)，連續(xù)灌胃21天。④低劑量治療組(n= 10)：建立右側(cè)iCCI模型；術(shù)后第 7 d開(kāi)始給藥，予2.7 g/kg的升降散加味溶液灌胃，每日2次(8 am、4 pm)，連續(xù)灌胃21天。⑤中劑量治療組(n= 10)；建立右側(cè)iCCI模型；術(shù)后第 7 d開(kāi)始給藥，予5.4 g/kg的升降散加味溶液灌胃，每日2次(8 am、4 pm)，連續(xù)灌胃21天。⑥高劑量治療組(n= 10)；建立右側(cè)iCCI模型；術(shù)后第 7 d開(kāi)始給藥，予10.8 g/kg的升降散加味溶液灌胃，每日2次(8 am、4 pm)，連續(xù)灌胃21天。

2.加味升降散的制備

加味升降散濃縮液由大黃、姜黃、僵蠶、蟬蛻、延胡索、白芍、炙甘草、按質(zhì)量比4:3:2:1:1.25:1.25:0.5比例組成，將藥物在粉碎機(jī)上分別粉碎后，過(guò)200目細(xì)篩。每42.75 kg混合中藥制劑則加水600 L，煮沸后再煎60 min，過(guò)濾，收集藥物濾液，藥渣再加水500 L，同法提取60 min，過(guò)濾，合并兩次濾液，離心（轉(zhuǎn)速：3,600 rpm），將離心后的濾液減壓濃縮（溫度：60℃，壓力：-0.06 MP）成32.5 L（折合生藥濃度1.2 g/ml），作為升降散加味濃縮液（濃縮液于4℃下冷藏保存）。

給藥劑量參照文獻(xiàn)[13]“藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算”，設(shè)為高、中、低三個(gè)劑量，分別為10.8 g/kg，5.4 g/kg，2.7 g/kg。最終濃縮藥液生藥含量小劑量升降散加味為0.27 g/ml，中劑量升降散加味為0.54 g/ml，大劑量升降散加味為1.08 g/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3.模型的建立

以經(jīng)典的CCI模型為基礎(chǔ)，建立大鼠右側(cè)改良坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷 (chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型。具體步驟如下：

（1）術(shù)前準(zhǔn)備及麻醉：將大鼠稱(chēng)重，腹腔注射4%的水合氯醛 (400 mg/kg)麻醉后，俯臥位固定，用小動(dòng)物剃毛機(jī)將右后肢大腿外側(cè)去毛，備皮，常規(guī)絡(luò)合碘消毒皮膚，鋪無(wú)菌巾，術(shù)中注意保暖。

（2）坐骨神經(jīng)暴露：于右側(cè)大腿外側(cè)中下1/3處平行股骨處分離肌肉皮膚，充分暴露坐骨神經(jīng)及其3個(gè)末端分支：腓腸神經(jīng)、腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)。

（3）坐骨神經(jīng)結(jié)扎：在坐骨神經(jīng)干近分叉5 mm處，用0.4 cm×1 cm 的多孔膠片包裹神經(jīng)，再用4-0絲線做4道結(jié)扎，間距約1～2 mm，以神經(jīng)微下陷、肢體不抽搐為準(zhǔn)（此部分均由同一個(gè)術(shù)者完成，以保證結(jié)扎強(qiáng)度的一致性）。術(shù)畢用帶針慕斯線逐層縫合傷口，絡(luò)合碘消毒皮膚切口，肌注青霉素4～5萬(wàn) U以預(yù)防感染，置烤燈下取暖，待復(fù)蘇后，送動(dòng)物房單籠喂養(yǎng)。

手術(shù)器械于術(shù)前高壓蒸汽消毒，術(shù)中注意無(wú)菌操作及大鼠的保暖，術(shù)后嚴(yán)密觀察大鼠恢復(fù)情況，剔除術(shù)側(cè)患肢癱瘓或出現(xiàn)自殘現(xiàn)象或出現(xiàn)其他健康問(wèn)題者。

4.觀察指標(biāo)

各組大鼠于術(shù)前、手術(shù)后7 d（喂藥0 d）、喂藥后1 d、3 d、7 d、10 d、14 d、17 d、21 d共計(jì)9個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行自發(fā)行為學(xué)評(píng)分檢測(cè)、機(jī)械痛閾值檢測(cè)及熱痛閾值檢測(cè)。具體檢測(cè)方法如下：

（1）自發(fā)行為學(xué)評(píng)分檢測(cè)：安靜環(huán)境下，將大鼠置于0.45 m×1.2 m×1.2 m大小的格子內(nèi)，觀察在自由活動(dòng)的情況下，后肢的使用情況以及跛行程度，評(píng)分依據(jù)：0分：正常運(yùn)動(dòng)行為，無(wú)后爪畸形；1分：正常運(yùn)動(dòng)行為，但明顯有后爪畸形；2分：輕度運(yùn)動(dòng)行為異常，有垂足現(xiàn)象；3分：嚴(yán)重運(yùn)動(dòng)行為異常，術(shù)側(cè)后爪癱瘓。

（2） 機(jī)械痛閾值檢測(cè)：機(jī)械痛閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT) 的測(cè)量方法：在安靜的環(huán)境中，將大鼠單獨(dú)放置于透明的有機(jī)玻璃體中，環(huán)境溫度調(diào)節(jié)在23～25℃之間，待大鼠適應(yīng)環(huán)境30 min后，以Electronic von Frey 刺激針刺激大鼠右足底，每只大鼠刺激3次，間隔大于8 s。大鼠感應(yīng)到纖維絲給予的機(jī)械刺激時(shí)或纖維絲離開(kāi)后出現(xiàn)抬足、縮足、快速甩足反應(yīng)為陽(yáng)性表現(xiàn)，記下此時(shí)的纖維絲刻度大小，即機(jī)械痛閾值；將3次讀數(shù)取平均值作為MWT。

（3）熱痛閾值檢測(cè)：熱痛閾值的測(cè)定：以熱傷害性刺激誘發(fā)的大鼠縮腿回避反射潛伏期作為熱痛閾的標(biāo)準(zhǔn)(熱縮足潛伏期，paw withdrawal thermal latency,PWTL)。采用YLS-6B智能熱板儀進(jìn)行測(cè)量，具體操作步驟如下：

提前20 min開(kāi)啟儀器，設(shè)置合適的紅外光源照射強(qiáng)度，測(cè)量前預(yù)熱加熱盤(pán)2～3 min，以確保儀器的性能穩(wěn)定。

提前30 min將大鼠置于行為學(xué)測(cè)驗(yàn)臺(tái)上（3 mm厚度的透明干燥玻璃板），用有機(jī)玻璃籠分隔開(kāi)，保持測(cè)量環(huán)境的安靜，溫度保持在55.3℃，待大鼠適應(yīng)環(huán)境并進(jìn)入安靜狀態(tài)后開(kāi)始測(cè)量。

將加熱盤(pán)緩慢移到大鼠后足底正下方，通過(guò)標(biāo)志線確認(rèn)位置，使紅外光源對(duì)準(zhǔn)大鼠后足第2、3趾間皮膚，按下”Start”鍵，熱痛儀自動(dòng)開(kāi)始計(jì)時(shí)，當(dāng)大鼠感覺(jué)到疼痛而出現(xiàn)抬足反應(yīng)時(shí)，設(shè)備自動(dòng)檢測(cè)到大鼠足爪位置變動(dòng)而停止計(jì)時(shí)，此時(shí)的顯示時(shí)間記為熱痛閾值。每次照射時(shí)間小于或等于30 s。

重復(fù)測(cè)量3次，光斑直徑小于或等于0.8 cm，每次之間間隔5 min，其平均值為熱縮足潛伏期(PWTL)。如果動(dòng)物熱痛覺(jué)不敏感超過(guò)30 s為不合格，給予剔除。

測(cè)量注意事項(xiàng)：①測(cè)量過(guò)程中要始終保持玻璃板的干燥潔凈，大鼠的尿液或糞便均會(huì)嚴(yán)重影響測(cè)量結(jié)果；②與機(jī)械痛閾測(cè)量一樣，保證每次測(cè)量環(huán)境條件的一致性，特別是環(huán)境溫度；③行為學(xué)測(cè)量應(yīng)遵循隨機(jī)、雙盲的原則。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述和分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示。重復(fù)測(cè)量資料采用重復(fù)測(cè)量方差分析；完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t法兩兩比較，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.自發(fā)疼痛行為學(xué)評(píng)分

正常組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組五個(gè)組別中，分別在手術(shù)前、手術(shù)后7 d（喂藥0 d）、喂藥后第1 d（術(shù)后第8天）、3 d、7 d、10 d、l4 d、17 d、21 d。每組均測(cè)量10只大鼠。自發(fā)性疼痛行為學(xué)評(píng)分檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表1。

由表1中可以看出，在手術(shù)前對(duì)隨機(jī)分組后的SD大鼠做疼痛行為學(xué)評(píng)分，各組大鼠均表現(xiàn)良好，無(wú)顯著性差異。手術(shù)后7 d（喂藥0 d）時(shí)，正常組和假手術(shù)組之間、以及正常組組內(nèi)、假手術(shù)組組內(nèi)大鼠的疼痛行為學(xué)評(píng)分都表現(xiàn)良好，假手術(shù)組大鼠機(jī)體也恢復(fù)良好，均無(wú)顯著性差異。模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組由于手術(shù)過(guò)程中，坐骨神經(jīng)均被包裹并結(jié)扎，使其疼痛持續(xù)并產(chǎn)生不同程度的行動(dòng)異常、垂足等現(xiàn)象。模型對(duì)照組中，隨著手術(shù)后時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，大鼠自身機(jī)體產(chǎn)生耐受性和適應(yīng)性，其疼痛行為異常、垂足等現(xiàn)象，都有一定程度的恢復(fù)，但恢復(fù)較慢。從不同時(shí)間點(diǎn)的角度整體觀察低劑量治療組、中劑量治療組和高劑量治療組，發(fā)現(xiàn)隨著藥劑量的增加，其行為學(xué)評(píng)分都逐漸降低，行動(dòng)異常、垂足等現(xiàn)象逐漸減少，說(shuō)明加味升降散對(duì)治療大鼠神經(jīng)病理性疼痛有療效，同時(shí)在一定藥劑用量范圍之內(nèi)，隨著藥劑量的增加，在相同的時(shí)間內(nèi)，治療效果也會(huì)越明顯。

2.機(jī)械痛閾值

正常組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組六個(gè)組別中，分別在手術(shù)前、手術(shù)后7 d（喂藥0 d）、喂藥后1 d（術(shù)后8 d）、3 d、7 d、l0 d、l4 d、17 d、21 d，對(duì)手術(shù)過(guò)的右肢腳底部位進(jìn)行機(jī)械痛閾值測(cè)定，每個(gè)組別測(cè)定10只大鼠，重復(fù)3次。機(jī)械痛閾值測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表2。

由表2中可以看出，在手術(shù)之前各組的機(jī)械痛閾平均值基本相同，無(wú)顯著性差異(P＞ 0.05)，說(shuō)明各組的SD大鼠自身并無(wú)明顯區(qū)別。在手術(shù)后7 d（喂藥0 d）時(shí)，除正常組外，其它組的機(jī)械痛閾值都明顯降低，但在喂藥之前，各組之間無(wú)明顯差異(P＞ 0.05)，說(shuō)明手術(shù)成功，且在各分組之間無(wú)明顯手術(shù)個(gè)體性差異。整體觀察假手術(shù)組和其他四組，假手術(shù)組的機(jī)械痛閾值呈現(xiàn)快速升高、機(jī)體恢復(fù)良好的一個(gè)變化趨勢(shì)；而其他四組，則可能是由于包裹神經(jīng)膠片的存在，使大鼠的疼痛感覺(jué)更持久和穩(wěn)定，從而導(dǎo)致機(jī)械痛閾值恢復(fù)較慢。模型對(duì)照組和其他三組治療組做對(duì)比，機(jī)械痛閾值恢復(fù)最慢，且均有顯著性差異(P＜0.05)，說(shuō)明加味升降散對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)械痛閾方面也有一定程度的治療作用。在三個(gè)治療組之間，隨著藥劑用量的增加，在每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)基本都表現(xiàn)出藥劑量也大、機(jī)械痛閾值越大、治療效果越好的變化趨勢(shì)。

表1 自發(fā)性疼痛行為評(píng)分分析結(jié)果(±SD, n=10)Table 1 Analysis of spontaneous pain behavior scores (±SD, n=10)

表1 自發(fā)性疼痛行為評(píng)分分析結(jié)果(±SD, n=10)Table 1 Analysis of spontaneous pain behavior scores (±SD, n=10)

*P＜0.05,與高劑量組比較；#P＜0.05,與中劑量組比較；aP＜0.05,與0 d比較；bP＜0.05,與1 d比較；cP＜0.05,與3 d比較；dP＜0.05,與7 d比較；P＜0.05,與10 d比較；fP＜0.05,與14 d比較*P＜0.05,compared with the high-dose group; #P＜0.05,compared with middle-dose group; aP＜0.05,compared with 0 d; bP＜0.05,compared with 1 d; cP＜0.05,compared with 3 d; dP＜0.05,compared with 7 d; P＜0.05,compared with 10 d; fP＜0.05,compared with 14 d.

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(表2 機(jī)械痛閾值測(cè)定及分析結(jié)果(s) (±SD, n=10)Table 2 Mechanical pain threshold test and analysis results （±SD, n=10)

(表2 機(jī)械痛閾值測(cè)定及分析結(jié)果(s) (±SD, n=10)Table 2 Mechanical pain threshold test and analysis results （±SD, n=10)

*P＜0.05,與假手術(shù)組比較；#P＜0.05,與模型對(duì)照組比較；△P＜0.05,與低劑量對(duì)照組比較；aP＜0.05,與0 d比較；bP＜0.05,與1 d比較；cP＜0.05,與3 d比較；dP＜0.05,與7 d比較；eP＜0.05,與10 d比較；fP＜0.05,與14 d比較*P＜0.05,compared with sham-operated group; #P＜0.05,compared with model control group; △P＜0.05,compared with low-dose control group; aP＜0.05,compared with 0 d; bP＜0.05,compared with 1 d; cP＜0.05,compared with 3 d; dP＜0.05,compared with 7 d; eP＜0.05,compared with 10 d; fP＜0.05,compared with 14 d.

正常組Normal時(shí)間點(diǎn)Time point假手術(shù)組Sham operation模型對(duì)照組Model control低劑量治療組Low dose treatment中劑量治療組Middle dose treatment高劑量治療組High dose treatment手術(shù)前Before surgery36.2±3.934.9±2.936.1±3.635.9±4.437.6±3.933.9±2.5喂藥0 d Feed for 0 d34.6±4.213.2±1.610.3±1.8*11.8±1.3*10.1±1.0*11.0±2.4喂藥1 d Feed for 1 d37.4±1.813.3±1.3 9.5±1.2* 9.6±0.6* 8.5±1.1a*12.1±1.2*喂藥3 d Feed for 3 d35.9±3.213.7±1.410.3±1.1*10.5±1.9* 9.9±0.8a*#△13.8±1.1*喂藥7 d Feed for 7 d36.7±4.117.5±2.4c11.3±0.6c*12.5±1.0*12.4±0.5a*15.3±0.8*喂藥10 d Feed for 10 d33.8±2.921.6±2.3abcd11.9±0.5abcd*13.0±1.7c#13.9±0.8a#16.5±1.8#喂藥14 d Feed for 14 d37.1±3.424.6±2.2ce10.8±0.6abcd*13.9±0.9abce*16.2±0.3abcde*18.2±2.1a*喂藥17 d Feed for 17 d36.9±3.927.9±2.9abcdef11.4±0.7abcd*15.8±0.7df*#18.3±0.7af*#21.2±2.2*#喂藥21 d Feed for 21 d34.5±4.530.1±1.2abcdefg12.9±0.6abcdefg*16.7±2.1abdefg*#23.5±3.2abcdefg*#25.1±2.4*#

3.熱痛閾值

正常組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組六個(gè)組別中，分別在手術(shù)前、手術(shù)后7 d（喂藥0 d）、喂藥后1 d、3 d、7 d、l0 d、l4 d、17 d、21 d，進(jìn)行熱痛閾值測(cè)定，每個(gè)組別測(cè)定10只老鼠，且重復(fù)3次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3和圖3可以看出，為手術(shù)之前，對(duì)比六個(gè)組別的熱痛閾值，基本都維持在13 s左右，并且正常組中，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的熱痛閾值也基本維持在13 s左右，各組數(shù)據(jù)之間均無(wú)顯著性差異(P＜0.05)。在手術(shù)后7d（喂藥0 d時(shí)），假手術(shù)組、模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組都有不同程度的下降，其中假手術(shù)組下降幅度較小，而模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組和高劑量治療組則下降幅度較大，其該四組均與假手術(shù)組之間有顯著性差異(P＜0.01)。隨著喂藥治療時(shí)間的延長(zhǎng)，模型對(duì)照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組則都有一定程度的恢復(fù)，且隨著藥劑量的增加，在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)均表現(xiàn)為高劑量組治療效果＞中劑量治療效＞低劑量治療效果。假手術(shù)組則隨著時(shí)間的推移，SD大鼠機(jī)體自身也在逐漸恢復(fù)。

討 論

iCCI模型，因其制作流程簡(jiǎn)單、損傷小，且可以出現(xiàn)明顯、穩(wěn)定的自發(fā)性疼痛、熱痛覺(jué)過(guò)敏、機(jī)械疼痛超敏等癥狀，與人體外周神經(jīng)損傷造成的神經(jīng)病理性慢性疼痛的臨床表現(xiàn)較為相似，故作為本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物研究模型的基礎(chǔ)[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組與治療組在iCCI建立初始階段，即喂藥0 d，都呈現(xiàn)高自發(fā)性疼痛癥狀、低機(jī)械疼閾值及熱疼閾值，這表明iCCI動(dòng)物模型構(gòu)建成功。加味升降散治療組結(jié)果顯示，不同劑量的加味升降散及不同治療時(shí)間，加味升降散治療效果存在差異性。從自發(fā)性疼痛分析，顯示，雖然隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，各組大鼠自發(fā)性疼痛評(píng)分都有明顯的改善，但加味升降散治療組表現(xiàn)更好的恢復(fù)效果，隨著劑量的增加，在同一治療時(shí)間，治療效果更佳。從機(jī)械痛閾值及熱痛閾值分析顯示，加味升降散治療組相比模型組都有明顯的改善其疼痛閾值，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)，效果越明顯，另外高劑量的加味升降散治療效果明顯優(yōu)于低劑量組。這說(shuō)明加味升降散可以有效緩解和治療神經(jīng)病理性疼痛產(chǎn)生的自發(fā)性疼痛行為、機(jī)械刺激的敏感性和熱刺激的敏感性，并且在一定的用量范圍之內(nèi)，隨著加味升降散用量的增加，其治療效果會(huì)越好。

表3 熱痛閾值測(cè)定及分析結(jié)果(s,±SD, n=10)Table 3 Thermal pain threshold test and analysis results (s,±SD, n=10)

表3 熱痛閾值測(cè)定及分析結(jié)果(s,±SD, n=10)Table 3 Thermal pain threshold test and analysis results (s,±SD, n=10)

aP＜0.05,與0 d比較；bP＜0.05,與1 d比較；cP＜0.05,與3d比較；dP＜0.05,與7 d比較；eP＜0.05,與10 d比較；fP＜0.05,與14 d比較；gP＜0.05,與17 d比較aP＜0.05,compared with 0 d; bP＜0.05,compared with 1 d; cP＜0.05,compared with 3 d; dP＜0.05,compared with 7 d; eP＜0.05,compared with 10 d;fP＜0.05,compared with 14 d; gP＜0.05,compared with 17 d.

高劑量治療組High dose treatment手術(shù)前Before surgery13.4±2.114.0±2.313.6±1.913.2±1.513.9±2.212.7±2.7喂藥0 d Feed for 0 d12.5±1.88.7±1.13.4±1.23.2±1.12.9±0.72.8±1.1喂藥1 d Feed for 1 d13.6±1.49.2±2.33.8±2.43.5±3.33.8±4.33.4±2.7時(shí)間點(diǎn)Time point正常組Normal假手術(shù)組Sham operation模型對(duì)照組Model control低劑量治療組Low dose treatment中劑量治療組Middle dose treatment喂藥3 d Feed for 3 d13.1±3.19.5±0.9b3.5±1.54.2±1.13.4±2.2ab4.5±1.2喂藥7 d Feed for 7 d12.8±1.29.8±1.294.2±2.84.2±1.04.4±0.8bc5.9±1.2c喂藥10 d Feed for 10 d14.6±1.88.9±1.44.2±1.2bcd4.6±0.9c5.2±0.9abd7.1±0.7bc喂藥14 d Feed for 14 d13.2±2.49.5±1.3abcde4.9±1.4abcd5.1±1.3e5.6±1.6bd8.3±1.3bc喂藥17 d Feed for 17 d14.1±2.89.8±0.9abcde5.2±0.6abcd5.9±1.06.7±0.7abd9.0±1.0喂藥21 d Feed for 21 d13.5±1.910.0±0.8acde5.8±1.0abcd6.7±1.28.1±1.3bdeg8.9±1.4f

加味升降散主要成分包括大黃、姜黃、僵蠶、蟬蛻、延胡索等。其姜黃具有止疼作用，何氏報(bào)道姜黃素能減輕坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)大鼠機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏[15]。另有研究證實(shí)，小鼠扭體法測(cè)定蟬蛻各部分均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其強(qiáng)度為蟬蛻整體＞身＞頭足[16]。因此，加味升降散用于NP治療其有效成分與姜黃及蟬蛻的止疼有關(guān)。根據(jù)中醫(yī)學(xué)辨證分析“痛則不通，通則不痛”，研究發(fā)現(xiàn)NP的發(fā)生與炎癥因子過(guò)量及凝血因子增加有關(guān)，導(dǎo)致疼痛通路受阻，從而導(dǎo)致疼痛[17]。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)分析顯示，Literat 等[18]證實(shí)在肺炎細(xì)胞培養(yǎng)基中加姜黃素能明顯抑制前炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-8、腫瘤壞死因子-α的表達(dá)。李氏等觀察到莪術(shù)中的有效成分姜黃素具有抗血小板聚集及抗凝作用[19]。僵蠶具有活化纖溶系統(tǒng)，與抑制血栓形成，具有抗凝作用[19]。因此，其有效改善及治療NP的作用機(jī)制可能與加味升降散中姜黃、僵蠶等藥理活性有關(guān)。

綜上所述，加味升降散可有效緩解iCCI模型大鼠疼痛效果，這與加味升降散臨床應(yīng)用結(jié)果相一致。通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，加味升降散治療效果更佳；在同一治療時(shí)間下，隨著加味升降散劑量的增加，治療效果提升。根據(jù)中醫(yī)學(xué)分析及現(xiàn)代藥理學(xué)分析，加味升降散治療效果可能與其重要各單體組分的活性物質(zhì)有關(guān)，如姜黃的鎮(zhèn)痛及抗炎癥作用及抗凝血作用。本研究結(jié)果對(duì)指導(dǎo)臨床加味升降散臨床用藥具有指導(dǎo)作用，但其是否與其炎癥作用或抗凝血作用有關(guān)，需進(jìn)一步研究證實(shí)。