819份不同痰標本來源分枝桿菌培養結果分析

陳世浩，袁奕武，王勇萍，林炳耀，梁曉晴

（佛山市第四人民醫院檢驗科，廣東 佛山 528000）

結核病迄今仍是全球重要的公共衛生問題，盡管結核病治療已有許多進展，但結核病患者對抗結核藥物耐藥問題已日漸突出，成為結核病控制面臨的最嚴峻問題。我國是全球22個結核病高負擔國家之一，結核病患者例數居全球第二位，也是27個耐藥結核病高負擔國家之一[1]。在結核病控制工作中，通過實驗室細菌學檢查診斷傳染性肺結核是全面監督化療策略（DOTS）的要素之一，痰結核桿菌檢查對于發現傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價防治效果具有重要意義[2]。分枝桿菌培養法靈敏度高于涂片法，可鑒定死菌與活菌，此外，分枝桿菌的分離培養也為菌種鑒定和藥物敏感性測定提供菌株，被譽為結核病診斷的“黃金標準”[3]。由于佛山市各區結防機構實驗室沒有開展痰分枝桿菌培養，從2013年1月開始對各區涂陽痰標本集中收到佛山市第四人民醫院檢驗科進行痰分枝桿菌培養。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2013年8月-2014年12月實驗室共接收各區實驗室耐多藥可疑患肺結核涂陽的痰標本和本單位的門診及住院確診肺結核病人涂陽的痰標本共819份，進行分離培養。把819份涂陽痰標本根據不同標本來源時間分成兩組：A組12 h內培養完成（住院肺結核病人，包括初治和復治），B組24 h-168 h培養完成（各區實驗室耐多藥可凝患肺結核痰標本和本單位門診肺結核病人，包括耐多藥可凝患肺結核、初治和復治）。

1.2 材料 染色液：萋尼抗酸染色液的配制按常規，培養基：L-J的配制按常規[2-4]。

1.3 方法 （1）痰標本直接涂片鏡檢采用《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》規定的萋尼染色法，具體參考文獻[2]。（2）分枝桿菌分離培養檢查方法采用《分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊》規定的分枝桿菌的分離培養簡單法，具體參考文獻[4]。（3）質量控制：實驗室通過廣東省結核病耐藥性監測辦公室檢查驗收，定期接受省參比實驗室督導并參加國家參比實驗室質控考核并通過，質控菌株為MTB標準株H37Rv（27294），來源于廣東省結核病控制中心結核病參比實驗室。

1.4 統計學處理 所有資料采用雙錄入方法錄入Access數據庫，Access設置自動核對提示，數據核對錄入無誤后采用SPSS 16.0統計軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 痰涂片鏡檢和培養結果 臨床診斷的肺結核患者和耐多藥可疑肺結核患者的涂陽痰標本819份，涂片結果分別：1條-8條占，1+占，2+占，3+占，4+占。總819份痰涂片陽性標本分離培養結果：分離培養陽性709份，占86.57%（709/819），培養陰性77份，占9.47%（77/819），培養污染33份，占4.03%（33/819）；A組460份痰涂片陽性標本分離培養結果：分離培養陽性419份，占91.09%（419/460），培養陰性31份，占6.74%（31/460），培養污染10份，占2.17%（10/460），B組359痰涂片陽性標本分離培養結果：分離培養陽性290份，占80.78%（290/359），培養陰性46份，占12.81%（46/359），培養污染23份，占6.41%（23/359）。見表1。

1.2 涂陽培陰與涂片結果分布 總涂陽培陰77份痰標本中：1條-8條23份占29.87%（23/77），1+42份占54.54%（42/77），2+10份占12.98%（10/77），3+1份占1.29%（1/77），4+1份占1.29%（1/77），A組涂陽培陰31份痰標本中：1條-8條10份32.25%（10/31），1+17份占 54.83%（17/31），2+4份占12.90%（4/31），3+0份占0%（0/31），4+0份占0%（0/31），B組涂陽培陰46份痰標本中：1條-8條13份占28.26%（13/46），1+25份占54.34%（25/46），2+6份占13.04%（6/46），3+1份占2.17%（1/46），4+1份占2.17%（1/46）。見表2。

3 討論

對臨床診斷的肺結核患者和耐多藥可疑肺結核患者涂陽標本819份培養結果分析顯示，A組涂陽培陰率6.74%（31/460），明顯低于對于未治療的患者，符合一般涂陽培陰率不超過10%的有關報道[5]。B組涂陽培陰率12.81%（46/358），高于對于未治療的患者，符合一般涂陽培陰率不超過10%的有關報道[4]。A組污染率2.17%（10/460），明顯低于使用4%氫氧化鈉簡單法的污染率不超過5%的有關報道[6,7]。分析目前B組比A組患者痰標本出現涂陽培陰率和污染率高原因：（1）B組標本不能及時進行培養，可能在保存過程結核分枝桿菌會發生自溶或死掉。（2）當痰標本不能及時處理時其他細菌就很容易生長，特別是真菌生長更快，如果痰中有真菌使用4%氫氧化鈉前處理是很難殺滅。

從表2看出總的涂陽培陰標本涂片痰菌量97.4%（75/77）在2+以下，高于文獻涂陽培陰標本涂陽痰菌量87.9%在2+以上[8]，A組涂陽培陰標本涂片痰菌量分布1+＞8條＞2+，B組涂陽培陰標本涂片痰菌量分布1+＞8條＞2+＞3+、4+，這些涂片結果看出：（1）涂陽培陰與痰菌量有一定的相關性；（2）有可能是由于結核藥物的作用使化療后患者痰標本中的野生株活力低，表現為涂片陽性培養陰性和陽性生長時間延長；（3）結核分枝自然變異的影響[9]。

表1 涂陽培養結果分布

表2 涂陽培陰與涂片結果分布

綜合以上數據分析表明，應在保證痰標本質量和培養基品質的前提下，做到以下幾點：（1）嚴格規范無菌操作流程，嚴格掌握前處理液的濃度、與痰標本的比例和接種量，降低污染率，提高培養陽性率；（2）對菌量少的痰標本可以進行離心法進行培養，提高養陽性率；（3）對抗酸桿菌涂片陽性使用抗結核藥物治療的標本，在進行分枝桿菌分離培養檢查時，可適當延長培養結果時間，有助于提高涂陽培率。