一例仔豬流行性腹瀉病毒的診斷與分析

賈青龍/康地飼料中國集團

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒引起的消化道疾病，具有急性、接觸性、高度傳染性；以哺乳仔豬、斷奶仔豬和育肥豬發病率最高，主要癥狀為嘔吐、水樣腹瀉和脫水，其中，以哺乳仔豬受害最為嚴重。豬流行性腹瀉（PED）與豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬輪狀病毒病是目前危害我國豬群最嚴重的三種病毒性腹瀉病，臨床癥狀都是以腹瀉為主，很難區分。本研究以河南某暴發仔豬腹瀉的豬場為例，分析豬流行性腹瀉病毒（PEDV）毒株特性，對其與近些年的流行毒株進行了比對，旨在為豬流行性腹瀉的防控及免疫機理的研究提供理論依據。

一、發病情況

2018年1月份，河南某豬場初生仔豬2日齡開始出現嘔吐、水樣腹瀉，發病仔豬食欲下降，精神狀態差，腹瀉24 h之后脫水，出現死亡。患病仔豬嚴重行走不便，采食量較低，病程持續時間7日齡，耐受的或經過治療存活的仔豬后續發育受阻。母豬、保育、育肥等階段未見任何癥狀。

二、臨床表現

病畜體表被毛粗亂發暗、有結痂物，腹下和鼻鏡出現紫紺，個別發病仔豬有體溫上升現象，體溫39.5～40.2℃。尾部及后部被糞便污染，排出糞便呈水樣（圖1）。豬群怕冷，擠堆，發病仔豬死亡率達85%。病情嚴重的仔豬，精神沉郁，臥地不起，糞便自行流出，初步確診為腹瀉。同批次母豬所產仔豬發病率達35%。

三、臨床診斷

剖檢病豬，可見胃黏膜潮紅、水腫，小腸腸壁變薄、透明，腸內充滿氣體和黃色水樣物，腸黏膜脫落，據此判斷疑似豬流行性腹瀉。

圖1 病豬體表及水樣糞便

四、實驗室檢查

1.RT-PCR檢測。收集病死豬腸內容物和腸系膜淋巴結等具有代表性的組織病料3份，送武漢某疾病診療中心實驗室，采用RT-PCR方法分別檢測豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和豬德爾塔冠狀病毒（PDCOV），結果如圖2。

圖2 豬流行性腹瀉病毒（PEDV）PCR檢測結果

圖2從陽性模板中擴增出283 bp的片段，如果樣品中有豬流行性腹瀉病毒存在，能夠擴增出283 bp大小的條帶。圖3從陽性模板中擴增出415 bp的片段，如果樣品中有豬傳染性胃腸炎病毒存在，能夠擴增出415 bp大小的條帶。圖4從陽性模板中擴增出266 bp的片段，如果樣品中有豬傳染性胃腸炎病毒存在，能夠擴增出266 bp大小的條帶。通過檢測擴增片段，檢測到送檢樣本中存在PEDV，沒有檢測到TEGV和PDCOV。

圖3 豬傳染性胃腸炎（TEGV）PCR檢測結果

圖4 豬德爾塔冠狀病毒（PDCOV）PCR檢測結果

2.基因序列分析。通過RT-PCR擴增PEDV S1基因片段，與該毒株的全基因組序列GenBank登錄號KF761675.1的PEDV基因序列97%的相似度，證明擴增的片段是PEDV病毒，如圖5。

3.同源性分析。同源性分析顯示，送檢毒株的基因組序列與我國AJ1102的同源關系最近，相似性為97.5%， 而 AJ1102、CH-HNZZ47-2016、CH-LNC-2012S、PEDV4-S-3這幾支毒株是國內最新的流行毒株，送檢毒株與他們相似性較高。送檢毒株與韓國毒株South Korea-2008、美國毒株USA2014的序列相似性均為96.8%，而與CV777疫苗毒株的相似性較低，為87%（表 1）。

圖5 所送樣品PEDV基因測序結果

表1 PEDV毒株和常見毒株的同源性比對結果

4.PEDV S1基因進化樹。進化樹分析顯示PEDV S1基因屬于變異毒株（G2群）。

圖6 PEDV S1基因進化樹

五、結論與討論

通過對送檢樣本病例豬體的腸樣本病毒的分離鑒定，確認送檢群體中存在豬流行性腹瀉病毒，序列進化樹分析表明該毒株和我國新近毒株、韓國及美國的變異毒株進化關系較近，而與我國之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777處于不同分支，揭示中國流行的PEDV已經發生了變異。PEDV毒株呈現快速變異和進化趨勢，現有的基于經典毒株CV777所產生的活疫苗和滅活苗不能有效的防控流行的PEDV疾病。開展豬傳染性胃腸炎病原檢測，進行豬腹瀉病的鑒別診斷，并采用疫苗免疫與藥物相結合的防治措施，才能有效控制豬流行性腹瀉病的發生與流行。研究結果解釋了PED疫苗免疫失敗的原因，為有效地制訂PEDV的防控措施提供理論依據。