小龍蝦真菌病害(二)：灼斑病

趙楠，巫愛軍，趙桂華，3

(1. 江蘇農林職業技術學院，江蘇 句容 212400；2. 句容市水產技術推廣站，江蘇 句容 212400；3. 句容市潤泰生物科技有限公司，江蘇 句容 212400)

小龍蝦灼斑病(burn spot disease)，又被稱為真菌甲殼潰瘍病(fungal shell canker disease)，在世界各地是最常見、分布最廣和危害較重的甲殼動物病害之一[1]。灼斑病的發生通常與小龍蝦養殖密度較大和養殖水質條件差有密切關系。甲殼表面的微生物是一個復合體[2]，多種有益和有害生物群體存在，如是病原微生物群體數量多，占有絕對優勢，就會引起病害；小龍蝦代謝失調或蝦體受傷也是引發病害的重要因素。當小龍蝦營養缺乏，體質下降時的發病率較高；但在小龍蝦退殼時罕見灼斑病癥狀。

1 分布

廣泛分布于整個歐洲、澳洲，及亞洲部分國家，但是，一些病原菌被限制在一定的區域內，這是病原菌生態學特性所決定的。我國雖有少量發生，但未見報道。

2 癥狀與危害

灼斑病可發生在小龍蝦和其他相關蝦類甲殼表面的任何一個位置(胸、背、腹、尾)，病斑圓形或近圓形，褐色至黑色，中心顏色較四周更深，似用火燙傷形狀，故被稱為灼斑病(圖1)，常伴隨著甲殼潰爛，也被稱為真菌甲殼潰瘍病；外殼上的癥狀是有一個下陷、中心壞死的病褐色斑，出現在外骨骼的鈣化部分；這種癥狀特點在淡水和海水的甲殼類動物上均有報道[3-4]。在種群密度大，或養殖設施差的養殖池中，病原菌對小龍蝦的感染率可達50%[4]；在愛沙尼亞，灼斑病的感染率高達70～80%[5]。螯蝦柱隔孢菌(Ramulariaastaci)侵染率可達85%，并伴有嚴重死亡，黑化病斑直徑可達10 mm，具紅色邊緣、中間呈缺刻狀。螯蝦鈣皮菌(Didymariacambari)通常引起直徑約5 mm的病斑，也侵染尾足(uropods)。當外骨骼被侵蝕時，可致死小龍蝦[5]。在小龍蝦退殼時病斑消失，在新甲殼上會有缺損。小龍蝦的死亡與灼斑病有關，特別是在退殼的時候更是如此，這種情況已在淡水小龍蝦病害中進行了報道[2]。

圖1 小龍蝦灼斑病癥狀(引自Makkonen 等，2013)

3 病原菌

真菌和細菌都能引起小龍蝦灼斑病，但以真菌病原為主。

3.1 真菌

小龍蝦灼斑病的病原真菌有5種，全部屬于半知菌亞門的不同種類，分別是燕麥鐮刀菌(Fusariumavenaceum)、茄鐮刀菌(F.solani)[5-6]、螯蝦柱隔孢菌(Ramulariaastaci)、螯蝦鈣皮菌(Didymariacambari)和細長頭孢菌(Cephalosporiumleptodectyli)[5]；但在早期的研究中將螯蝦柱隔孢菌鑒定為煙鐮刀菌(F.tabacinum)，后來作為異名[7]。

3.1.1 鐮刀菌 引起灼斑病的鐮刀菌種類比較復雜，即便是相同的癥狀，在不同的地區，其病原種類也存在差異，如在愛沙尼亞的歐洲高貴小龍蝦灼斑病和薩雷馬螯蝦(Saaremaa crayfish)灼斑病組織上各分離到了1株鐮刀菌(Fusariumspp.)，通過ITS序列分析比對，根據Genbank數據庫搜索，高貴小龍蝦上菌株被鑒定為燕麥鐮孢(F.avenaceum)，而薩雷馬螯蝦(Saaremaa crayfish)上的菌株被鑒定為茄鐮孢(F.solani)[5]。

在歐洲，茄鐮刀菌侵染土耳其小龍蝦(A.leptodactylus)和信號小龍蝦(Pacifastacusleniusculus)[8-10]；土耳其小龍蝦是最易被茄鐮刀菌感染的種類。但是，Maestracci & Vey (1987)[11]研究歐洲小龍蝦[土耳其小龍蝦和白爪小龍蝦(Austropotamobiuspallipes)]病害由尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)引起的。而煙鐮刀菌(F.tabacinum)會引起白爪小龍蝦的死亡[7]。藨草鐮刀菌變種(Fusariumroseumvar.Culmorum)已在小龍蝦鰓上被發現[12]。在北美小龍蝦(Procambarussimulanssimulans)上也報道了鐮刀菌病害，但缺乏組織病理學研究資料[13]。鐮刀菌是一類機會主義病原菌，小龍蝦受傷后或在污染水中的侵染率高，水環境條件是決定小龍蝦健康生長的主要因素[11]。

3.1.2 螯蝦鈣皮菌 鈣皮菌屬(DidymariaCorda 1842)共有60個種2個類型。分布于整個歐洲、澳洲，及亞洲部分國家，我國雖有少量發生，但未見文獻報道。

螯蝦鈣皮菌危害小龍蝦、歐洲高貴小龍蝦(Astacusastacus)[5，14]、叉肢螯蝦(Orconecteslimnosus)和白爪小龍蝦(Austropotamobiuspallipes)。

3.1.3 螯蝦柱隔孢菌 有性世代為草莓蛇眼小球殼菌[Mycosphaerellafragariae(Tul) Lindau]，屬于球腔菌科(Mycosphaerellaceae)、球殼菌屬(MycosphaerellaJohanson 1884)的一個種。

目前，柱隔孢屬(RamulariaUnger 1833)共有1 178個種、變種和類型。由螯蝦柱隔孢菌(D.cambari)引起的病害也叫紅點病，病菌侵入小龍蝦的體表，受感染處有似火燒的斑點，中間呈棕黑色，具鮮紅色的邊緣，可造成高貴小龍蝦(A.astacus)和叉肢螯蝦(Orconecteslimosus)的大量死亡。

3.2 細菌

氣單胞菌屬(Aeromonas)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、黏細菌(Myxobacteria)和枸櫞酸桿菌屬(Citrobacter)的細菌都能引起小龍蝦病害[15-16]。

Amborskietal.(1975)[17]電鏡觀察認為，幾丁質溶質革蘭氏陰性細菌的作用至今尚未得到充分證明。這些細菌的侵染，必須先通過外皮層、表皮或傷口進入小龍蝦體內，并能夠進行繁殖，與小龍蝦建立真正的侵染關系，使其引發病害。假單胞桿菌不僅是幾丁質溶質細菌，也是小龍蝦灼斑病病斑上分離到的一個種具有強致病性的細菌，但許多其他的細菌種類，如弗羅因德氏枸櫞酸桿菌(Citrobacterfreundii)、嗜水氣單孢菌(Aeromonasliquefaciens)、產堿假單胞菌(Pseudomonasalkaligenes)、腸桿菌(Enterobactersp.)、無色桿菌(Achromobactersp.)和芽孢桿菌(Bacillussp.)也存在于小龍蝦體內外，它們都是次生入侵者[17]，這些細菌也在佛羅里達藍鰲蝦(Cheraxtenuimanus)灼斑病中被分離到。

4 傳播與流行

灼斑病的傳播途徑有病蝦帶菌傳播和水體傳播2種形式。

4.1 病蝦帶菌傳播

主要是種苗調運、交換期間的傳播，集貿市場交易也是重要的傳播途徑。

4.2 水體傳播

水體是一類多因素的復合體，不論是自然水體，還是池塘養殖水體都是如此。引起灼斑病的真菌都是半知菌類，均以分生孢子和菌絲進行繁殖，產生大量的個體分散于水中，因個體微小，肉眼看不見；并且在同一個水體中，由于小龍蝦或魚類的活動，使得分生孢子的分布相對較均勻，只要小龍蝦進入這種水體，病菌孢子就會附著在蝦體上，并產生菌絲，尋找蝦體表面的受傷處(含輕微傷口)侵入蝦體，菌絲在侵染處生長、繁殖，產生毒素，致死細胞組織，形成壞死斑。

甲殼動物的灼斑病能相互傳染，在一些分生孢子密度相對較小的水體中，短期內不影響小龍蝦的生存，但被感染的個體會得病。此外，健康小龍蝦在與感病小龍蝦接觸時，相互感染的幾率較低[18]。許多研究證明，外殼損傷、群體密度大和不良環境條件是小龍蝦發病的因素[2]。

5 病理學

在小龍蝦中，泌尿系統的腹緣通常是病原菌的第一個攻擊點，但在頭胸部、腹部和鰓上也常出現斑[2，17]。發病初期，在外殼上為小的、褐色病斑[18]。在發病中期，病斑被限制在甲殼組織內，也可在軟組織下面，有時在尾部也會出現壞死斑[17]。光學顯微鏡觀察和組織病理學測定顯示，在小龍蝦表面能看到真菌和細菌，PDA培養基可用于分離和分生孢子的產生[2]。

小龍蝦灼斑病防治，目前尚無有效方法，只能通過飼喂中草藥飼料，提高小龍蝦的免疫力，降低病害的發生。